沙氏葡萄糖液体培养基适用性检查

应助达人

【检查方法】

试管接种法，进行促生长能力检查。

【菌液制备与稀释】

1. 白色念珠菌

挑取四代以内（含四代）的白色念珠菌新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，经20～25℃培养2～3天；使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10-6～10-7)

2. 黑曲霉

挑取四代以内（含四代）的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面中，经20～25℃培养5～7天（生长大量黑色菌丝）,加入5ml含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。使用含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或含0.05%聚山梨脂80的0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10-5～10-6，因菌丝数量不同，可能有误差)

【培养基制备】

被检培养基：称取培养基30.0g于1000ml纯化水中,微温溶解，分装试管，121℃高压灭菌15分钟,冷却，备用。

另准备沙氏葡萄糖琼脂培养基进行稀释菌悬液计数，培养基灭菌后置于44.5℃水浴保温待用。

【实验方法】

1. 培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于预先制备的试管培养基中，每种菌接种两支试管。同时分别取1ml菌悬液加于无菌空平皿中，用于计数，每种细菌做两个平板。

2. 培养基阴性组：即空白对照，即不添加菌液。

3. 接种量计数：步骤1中的平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，同时培养基做1个空白。

4. 培养条件：

20～25℃培养 白色念珠菌培养24～48h；黑曲霉培养3～5天

倾注计数用的沙氏葡萄糖琼脂培养基平板置20～25℃培养箱中培养3～5天

【观察记录方法】

参考下述，长情况

A． 白色念珠菌

——SDB试管澄清透明，底部有白色菌团。

B. 黑曲霉

——SDB试管澄清透明，有白色或黑色菌丝团生长。

C．接种量计数＝计数培养基平均菌落数—计数培养基空白组菌落数

【判定依据】

接种量在<100CFU,加菌的培养基试管生长良好且与对照培养基相似，空白管无菌生长，则判定合格。