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【金秋计划】微生物内部质量控制之阳性加标

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2024/09/09

食品毒素/微生物检测

金黄色葡萄球菌定性检测阳性加标实验

01

金黄色葡萄球菌菌悬液的制备

在生物安全柜内，按照无菌操作程序，制备金黄色葡萄球菌斜面培养物，挑取培养物加入灭菌生理盐水中，制成macF为0.5的菌悬液，吸取1mL上述菌悬液加入9mL灭菌生理盐水中制成1:10的稀释液，依次进行梯度稀释，稀释至金黄色葡萄球菌终浓度为1CFU/mL~10CFU/mL，待用。同时吸取1mL菌悬液涂布TSA平板，计数菌悬液具体浓度值。

02

阳性对照加标样品制备

食品样品检测过程中，另外称取25g样品，加入225mL增菌液，均质混匀，制成对照样品匀液，用封口夹密封，转移至生物安全柜内，无菌操作吸取1mL待用金黄色葡萄球菌悬液加入对照样品匀液，充分混匀，即为阳性加标实验样品，封口夹密封后放培养箱培养，按照GB 4789.10中第一法的规定进行检验和鉴定。

03

结果判定

经检验，检出金黄色葡萄球菌即满足监控结果与添加目标微生物的一致性，结论为满意。

金黄色葡萄球菌平板计数法阳性加标实验

01

金黄色葡萄球菌菌悬液的制备

参照1.1步骤，金黄色葡萄球菌稀释至终浓度为1000CFU/mL~10000CFU/mL，待用。同时吸取100uL菌悬液涂布TSA平板，计数菌悬液具体浓度值。

02

阳性对照加标样品制备

食品样品检测过程中，另外称取25g样品，加入225mL稀释液，均质混匀，制成对照样品匀液，用封口夹密封，转移至生物安全柜内，无菌操作吸取1mL金黄色葡萄球菌悬液加入对照样品匀液，充分混匀，制成1:10阳性加标匀液，后续按照GB 4789.10中第二法的规定进行检验和鉴定。

03

结果判定

如果参比TSA平板结果为1500CFU/mL，即1mL菌悬液中约有1500CFU的金黄色葡萄球菌，吸取1mL加入250mL阳性加标匀液中，可表示为25g加标样品中含有金黄色葡萄球菌的理论浓度为60CFU/g；采用平板计数法检验，加标样品的检验结果为50CFU/g，计算回收率为（50÷60）×100%≈83.3%，参照RB/T038-2020中B.1规定，回收率大于80%即可判定为结果满意，因此该阳性加标定量检测结论为满意。

金黄色葡萄球菌MPN计数法阳性加标实验

01

金黄色葡萄球菌菌悬液的制备

参照1.1，金黄色葡萄球菌稀释至终浓度100CFU/mL~1000CFU/mL，同时吸取100uL菌悬液涂布TSA平板，计数菌悬液具体浓度值。

02

阳性对照加标样品制备

参照2.2步骤进行，后续检验操作按照GB 4789.10中第三法规定进行检验和鉴定。

03

结果判定

如果参比TSA平板结果为150CFU/mL，即1mL菌悬液中约有150CFU的金黄色葡萄球菌，吸取1mL加入250mL阳性加标匀液中，即25g加标样品中含有金黄色葡萄球菌的理论浓度为0.6 MPN/g。采用MPN计数法检验，如果3×3法检测结果为3-0-0，查MPN表，结果为2.3MPN/g，95%置信区间为（0.46~9.4）MPN/g，则理论值0.6CFU/g在（0.46~9.4）MPN/g之间，表明此次阳性加标结果满意，因此该阳性加标定量检测结论为满意。

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