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嵌合抗体的制备工艺及其在多种领域的应用
Ins_bf0c01c3
2023/10/12
私聊
生命科学仪器综合讨论
嵌合抗体
是一个物种(如小鼠)的可变区和另一个物种(如人类)的恒定区而组成的结构性嵌合体。当开发治疗性单克隆抗体(
mAb
)时,嵌合抗体是降低免疫原性和增加血清半衰期的必要过程。
研究人员可以将一个物种的恒定区换成另一个物种的,并且可以在同一个物种内将一个亚型换成另一个亚型。然而,这一过程并不是那么简单,可能极具挑战性。
嵌合抗体的制备流程:
①处死免疫成功的小鼠后,摘取小鼠脾脏,分离
B
细胞。将骨髓瘤细胞与
B
细胞融合,形成杂交瘤细胞,并筛选产生抗原特异性
IgG
的阳性克隆。
②从该克隆中分离编码小鼠
VH
和
VL
的
DNA
序列,并且从人细胞中分离编码人免疫球蛋白恒定区的
DNA
序列。通过基因工程构建小鼠
/
人嵌合基因,并将其转染至哺乳动物细胞。
③选择高表达嵌合
IgG
的克隆,并从培养上清液中纯化
IgG
。
人鼠嵌合抗体特点:
①不仅保留了亲本鼠抗体的高特异性和亲和力,而且使鼠源性成分减少
70%
左右;
②其人源
Fc
段能有效介导生物学效应功能,如抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(
Antibody dependent cell-mediated cytotoxicity
,
ADCC
)、补体依赖性细胞毒作用(
Complement dependent cytotoxicity
,
CDC
)等;
③能自由地选择抗体的型、亚型、类、亚类、大小、结构域及添加糖基化位点等,以利用其不同的生物学特点及理化特性;
④由高效真核表达载体和人抗体恒定区组成的嵌合抗体表达“盒子”可以容许插入不同的鼠单克隆抗体的可变区,缩短操作和研制周期;
⑤操作相对简单。
嵌合抗体的应用
嵌合单克隆抗体在治疗和免疫测定中具有重要的应用。在免疫组织化学或
ELISA
等检测,转换抗体恒定区以匹配宿主或二抗的种属可以显著降低背景染色。
美国
FDA
批准利妥昔单抗后,其他两种嵌合抗体(西妥昔单抗和地努妥昔单抗)也已进入了肿瘤适应症市场。其中,西妥昔单抗是通过利用纯化的
EGFR
免疫小鼠,然后将小鼠抗体
225
的恒定区替换成人
IgG1
的恒定区。命名为
C225
的嵌合分子显示出比亲代小鼠抗体高约
5
倍的亲和力,有效抑制了肿瘤生长。地努妥昔单抗也是从鼠单抗开发的。嵌合分子(
ch14.18
),也是人
IgG1
,显示出同小鼠
IgG2a
抗体相同的结合能力,但是,当使用人的效应细胞时,
ADCC
显示出比亲代小鼠抗体高
50
至
100
倍。
更多嵌合抗体详情可以关注:
https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody
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