仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
杂交瘤技术制备单克隆抗体:详细流程与常见问题解析
Ins_bf0c01c3
2023/10/13
私聊
生命科学仪器综合讨论
杂交瘤技术
是一种将
B
淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合生产单克隆抗体的传统方法。该技术通过将动物脾细胞与骨髓瘤细胞融合,产生永生化杂交瘤细胞系,然后筛选其上清液中的抗原特异性克隆,并进一步循环亚克隆以产生严格的单克隆抗体。
利用杂交瘤技术制备单克隆抗体通常操作流程为
:抗原制备、抗原免疫动物、杂交瘤细胞制备、融合细胞的筛选、培养杂交瘤细胞制备抗体。(详细实验流程:杂交瘤单克隆抗体制备
SOP
)在单克隆抗体制备过程中,常常会遇到细胞污染,细胞融合后不生长、亚克隆后的细胞株不分泌抗体以及细胞难以克隆等问题,本文将详细分析以上常见问题的产生原因以及解决该问题的方法。
一、微生物污染
①细菌、真菌污染主要是由于实验人员操作不当或者消毒不到位引起的。人身上可能携带各种孢子,如果操作不当,或者是未能及时到位的消杀,就有可能会引入污染。除此之外,还须注意平时使用的一些消毒剂,比如
84
消毒液或者
75%
酒精,要确认它的纯度以及质量。如果是因为这些问题导致的消毒不到位,是非常不容易发现的。
②支原体污染则可能由血清制品、关键试剂材料或实验人员带入。正常的
SP2/0
细胞圆润透亮,当被支原体污染后,短期内细胞没有明显的变化,当污染严重后,细胞生长会变得极为缓慢,生长周期变长,细胞形态多样。可通过加入商品化的清除支原体试剂,或者通过将污染的杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔,待产生实体瘤后或产生腹水后,无菌分离重新获得杂交瘤细胞。
③原生生物污染主要是大家比较头疼的黑胶虫,污染后会陆续出现多少不等的小黑点。
二、融合后细胞不生长
①融合后细胞不生长可能是因为融合试剂有毒性,部分毒性试剂作用时间过长引起的。如
PEG
在
10%~60%
都可以进行融合,但浓度越高毒性越大。
②也有可能是使用血清质量比较差,推荐使用胎牛血清。
③还有可能是因为添加的
HAT
试剂中氨基喋呤(
A
)含量过高或
HT
(次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷)含量过低。
三、杂交瘤细胞不分泌抗体或者停止分泌抗体
1
、杂交瘤细胞不分泌抗体,可能的原因有以下几种:
a.
抗原免疫原性弱,免疫效果不好,可以通过多方案检测血清效价进行进一步评估;
b.
操作过程中脾细胞损伤较多,抗原特异性淋巴母细胞大量死亡;
2
、杂交瘤细胞前期有抗体分泌,后期在克隆化过程中抗体分泌量减少或停止分泌抗体,可能的原因有以下几种:
a.HAT
试剂中氨基喋呤(
A
)失效,骨髓瘤细胞增殖抑制杂交瘤细胞的生长;
b.
未及时克隆,不分泌抗体的杂交瘤大量生长挤占生存空间;
c.
骨髓瘤细胞返祖化,抵抗氨基喋呤(
A
)的选择;
d.
梁色体丢失(突变)
;
e.
支原体污染。
解决方法有三种:第一,及时进行细胞建库;第二,高频次检查细胞状态和是否污染;第三,定期进行抗原筛选。
四、杂交瘤细胞难以克隆化
一旦确认有分泌抗体的杂交瘤细胞,就应尽快进行克隆化。克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体,反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞若难以克隆化,可以尝试以下解决方法:
①使用已有杂交瘤细胞株对血清进行筛选,确定最佳批次的血清和使用浓度;
②融合后第一次克隆(一亚)仍需采用含
HT
的条件培养;
③在培养体系中加入白细胞介素
6
(
IL6
),一般商品化的杂交瘤因子都含有
IL6
。
义翘神州提供杂交瘤测序服务和杂交瘤细胞培养及抗体生产服务,具体关于杂交瘤相关问题详情可以参看
杂交瘤技术:
https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology
杂交瘤细胞培养及抗体生产服务:
https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service
杂交瘤测序服务
:
https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-sequencing-service
相关话题
1
肺癌概述及早期诊断
2
瞬时转染与稳定转染:差异与特点
3
特殊染色技术的原理及其在实践中的应用
4
CAR-T质量检测ELISA试剂盒常见问题解析
5
抗体纯化方法概览:四种策略及其优缺点详解
近期热榜
迎国庆送壕礼!十月发帖抢大疆云台
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
喜迎国庆!第十七届原创大赛超级原创日参赛奖励翻倍
丹纳赫四十周年寄语征集领大礼包
热门活动
【售后专场--招聘会】
第三届微课大赛投票进行中ing
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
【求助】大家一般从哪买 链霉亲和素?
2007/09/13
【转帖】蛋白质纯化武器—工艺篇(欢迎补充)
2010/11/01
【投稿指南】外文投稿书信大全,非常的好,能学到很多东西
资料
2011/09/20
《科学家》杂志评出2011年年度人物
讨论
2011/12/23
求助:蛋白质如何脱盐
2005/06/08
【分享】耳朵形状可用于身份识别 伴随一生基本不会变化
2010/12/15
【转帖】入学就业体检将取消乙肝血清学检测项目
2009/10/11
【有奖征集】生命科学仪器二级分类方案意见大征集
原创
2011/07/01
医疗仪器的革新:守护生命的科技力量
分享
2024/09/19
仪器的魅力:科技探索与精准控制的基石
分享
2024/09/19
Tigergene动物实验用颅钻
原创
2024/09/16
全光谱流式细胞仪原理,可以帮忙解答一下吗
原创
2024/09/09
bd流式细胞仪多少钱一台,可以帮忙解答一下吗
原创
2024/09/09
生物技术领域外商投资放开-干细胞重大利好!
原创
2024/09/09
化学发光免疫分析原理,能不能展开详细说说
原创
2024/09/07
Excounter第三代全自动外泌体分析仪重磅上市(让外泌体检测从此简单)
原创
2024/09/07
用实力证明 - 技术人员能力好坏“我说行就行”的时代过去了?
第十七届原创
2024/10/02
同一个部门的人进门还让登记,宝宝很生气!
第十七届原创
2024/10/03
要想新员工学的快,培训技巧很重要!
第十七届原创
2024/10/04
【仪器心得】TDU2第二套热脱附使用心得
第十七届原创
2024/10/02
出峰时间和分子离子峰一样,二级质谱图不一样是同种物质吗
已应助
2024/09/28
玻璃器皿的质保期
已应助
2024/09/28
关于CNAS-G001:2024里的条款理解?
已应助
2024/09/30
岛津2014色谱TCD检测标气中的氧气和氮气,氧气不出峰怎么处理
已应助
2024/09/29
庆祝中华人民共和国成立74周年
原创
2023/10/13
葡萄园里的秋意浓
原创
2023/10/13
Characterizing natural organic matter in drinking water treatment processes and trains
悬赏帖
2023/10/13
请问看不清楚sem图片,自动对焦也不顶用gaigai怎么调整?
求助
2023/10/13
UPLC-MS/MS外标法不进行方法学验证能计算回收率吗?
已应助
2023/10/13
求助溶解性总固体
已应助
2023/10/13
安捷伦未知物分析解卷积怎么定性
悬赏帖
2023/10/13
GC-MS调谐结果视图
已应助
2023/10/13
品牌合作伙伴
丹纳赫苏州基地 打工人的梦想
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...