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全能核酸酶SuperNucleaseFAQ详解:解开核酸酶的神秘面纱
Ins_bf0c01c3
2023/10/25
私聊
生命科学仪器综合讨论
全能核酸酶(
SuperNuclease
)是一种来自于粘质沙雷氏菌(
Serratia marcescens
),经基因工程改造的核酸内切酶。可降解双链、单链、线状、环状的
DNA
和
RNA
,完全将核酸降解成
3~5
个碱基长度的
5'-
单磷酸寡核苷酸。义翘神州不仅可以提供研究级核酸酶,依托于
ISO 13485
和
GMP
体系,还可提供高效、高质量、应用广的
GMP
级别全能核酸酶。同时我们提供核酸酶残留检测试剂盒,在解决生物制品核酸污染的同时,有效降低酶本身的残留风险。下面通过问答形式向大家详解全能核酸酶:
Q
: 如何处理粘附细胞?
A
: 用
PBS
洗涤后,向
100μL RIPA
裂解物(或其他哺乳动物细胞裂解物)中加入
1-5μL
全能核酸酶,在室温下孵育
30min
,收集裂解物,离心上清液进行下游实验。
Q
: 如何处理悬浮细胞?
A
: 离心收集悬浮细胞后,将
100μL RIPA
裂解物(或其他哺乳动物细胞裂解物)加入含有
1-5μL
全能核酸酶的离心管中,在室温下孵育
30min
,收集裂解物,离心上清液进行下游实验。
Q
: 如何处组织样本呢?
A
: 研磨
30
~
100mg
动植物组织后,加入
100
~
200μL
裂解液和
1
~
5μL
全能核酸酶,室温孵育
30min
,收集裂解液并离心上清液进行下游实验。
Q
: 大肠杆菌或其他细菌呢?
A
: 离心收集细菌后,裂解液或研磨破碎后,每
100μL
加入
1~5μL
全能核酸酶,室温孵育
30min
,收集裂解液,离心上清液进行下游实验。
Q
: 如何稀释
A
: 正常推荐稀释比(终浓度)为
1:1000
~
1:20000
,其中时间、温度和稀释比是影响反应的积极因素。
Q
: 是否用
PBS
稀释
A
: 是
Q
: 你能减少剂量吗
A
: 如果你想减少剂量,可以适当提高反应温度或延长反应时间
Q
: 反应辅因子
A
: 必须向反应溶液中加入
2-5mM Mg2+
Q
: 反应缓冲液
A
: 常用的生物缓冲液,如
TBS
、
MOPS
(
pH6-8
)等
Q
: 稀释后每次使用多少?如何测试梯度?一开始多少钱?
A
: 根据不同的实验要求,添加量可以在
1/100
和
1/10000
之间。真核细胞所需的量高于原核细胞,因为真核细胞的核酸含量高,并且可以按照
1/1000
的比例添加真核细胞初始添加量,可以按照
1/10000
的比例添加原核细胞。由于全能核酸酶活性在室温下较高,因此在
4
℃下消化的
DNA
添加比例高于室温下。普通的
CoIP
实验、蛋白质表达实验可以适当地略微增加,并且可以按照
1/100
的比例添加对
DNA
残基要求高的实验。
Q
: 如何灭活全能核酸酶?如何移除?
A
:
EDTA
螯合金属离子的使用可以可逆地抑制全能核酸酶的活性,极端条件下可以引起不可逆的失活,如
100mM NaOH
和
70
℃处理
30min
。可以通过阴离子交换柱或
气相色谱
法从目标产物中分离全能核酸酶。由于这种核酸内切酶的高稳定性,建议不要在最终产物需要排除核酸酶的应用中使用全能核酸内切酶。
Q
: 储存条件
A
: 储存温度为
-20
℃。储存缓冲液:
20mM Tris-HCl pH 8.0
,
50mM NaCl
,
2mM MgCl2
,
50%
甘油。
Q
: 全能核酸酶应用
A
:
1
、蛋白质提取过程中核酸污染的去除:当重组蛋白质纯化或哺乳动物细胞裂解物下游需要低粘度时,全能核酸酶可用于降低样品粘度,以便于操作;
2
、有效减少储存的外周血单个细胞(
PBMC
)的聚集;
3
、有利于不溶性蛋白在复性前的高质量包合体系制备;
4
、有效去除带负电荷核酸对双向
SDS-PAGE
蛋白样品的影响;
5
、在宽范围的条件下(
6M
尿素、
0.1M
盐酸胍、
0.4%Triton X100
、
0.1%SDS
、
1mM EDTA
、
1mM PMSF
),降解所有形式的(双链、单链、线性、环状)
DNA
和
RNA
;
6
、根据美国食品药品监督管理局的核酸污染去除程序,去除蛋白质产品中的污染;
7
、本品可与多种细胞细菌裂解液配合使用,去除粗提液中的核酸,降低溶液粘度,提高蛋白质产量。
义翘神州提供不同级别全能核酸酶,
GMP
级条件下生产的
全能核酸酶
SuperNuclease
,无动物源性,可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的
DNA
及
RNA
。超高活性,应用场景广泛且使用量低不易残留,质量、性能、供货能力可靠,并已完成在
FDA
的药物主文件申报备案(
DMF Number#:35978
),满足药物申报的规范。
更多详情可以关注:
https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit
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