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假病毒中和检测:精确释义与详尽方法指南
Ins_bf0c01c3
2023/11/30
私聊
生命科学仪器综合讨论
在生物医学领域中,假病毒中和检测已成为一种重要的技术手段,用于研究病毒感染、免疫应答以及药物筛选等多个方面。本文将详细介绍假病毒中和检测的定义、方法及实际应用,帮助读者更好地理解这一技术的内涵与价值。
什么是中和抗体?
中和抗体是一类与病毒结合并使病毒失去传染性的抗体。当病毒侵入人体时,浆细胞会产生病毒特异性抗体,但只有少数是中和抗体。
中和机制如下:
(1)
改变病毒表面的构象;
(2)
与吸附相关的病毒表位结合,阻断其与宿主细胞受体的相互作用;
(3)
与病毒形成免疫复合物,易于被巨噬细胞清除;
(4)
当病毒表面抗原与中和抗体结合时会激活补体,从而导致病毒裂解。
S
蛋白(
spike protein
)是
SARS-CoV-2
病毒的主要包膜蛋白,由
S1
和
S2
亚基组成的三聚体跨膜糖蛋白,负责识别宿主细胞受体即血管紧张素转换酶
2(ACE2)
并介导膜融合。
S1
亚基上的受体结合域
(RBD)
直接参与宿主受体识别并介导病毒入侵。
S
蛋白上的受体结合结构域
(RBD)
,被认为是病毒感染宿主细胞的关键位点和大多数中和抗体的靶标。中和抗体可阻止
S1
或
RBD
与
ACE2
结合,从而防止病毒侵入宿主细胞并最终阻止病毒感染
(
图
1)
。因此,
S1
或
RBD
的突变可能会导致
SARS-CoV-2
有较强的传染性。
我们为什么要检测中和抗体?
中和抗体的检测是疫苗开发和临床评估的重要指标之一。好的疫苗应该能够产生高效的中和抗体。中和抗体水平随时间推移而降低,通过持续监测中和抗体水平可以判断疫苗保护效力持续多久。此外,针对
SARS-CoV-2
变异株,疫苗能否产生有效的中和抗体是值得怀疑的。因此,
SARS-CoV-2
中和抗体检测对于评估群体免疫和监测疫苗保护效力是至关重要的。
如何检测中和抗体?中和抗体检测方法:
中和抗体检测试验包括病毒中和试验、假病毒中和试验和替代病毒中和试验。
①病毒中和试验
中和抗体检测的金标准是病毒中和试验,主要包括空斑减少中和试验和微量中和试验。两种方法都使用定量的活病毒与不同稀释度的等量血清混合,并接种预先准备好的单层细胞。最后,根据空斑形成单位或细胞病变效应来评估中和抗体的效价。由于涉及到活病毒的操作,这些检测只能在生物安全三级实验室进行,极大地限制了空斑减少中和试验和微量中和试验的使用。
②假病毒中和试验
目前,越来越多的实验室使用假病毒中和试验进行中和抗体检测。
SARS-CoV-2
假病毒以非致病性病毒
(
如复制缺陷型
HIV-1)
为载体,将载体病毒的包膜蛋白替换为
SARS-CoV-2
的
S
蛋白,并引入检测信号分子,例如
GFP
和荧光素酶。假病毒利用
S
蛋白的
RBD
结构域与
ACE2
结合,模拟病毒入侵的过程。中和抗体可有效抑制
SARS-CoV-2
假病毒感染宿主细胞
(
图
2)
,并通过信号检测评估中和抗体效价。由于假病毒为一次性感染病毒,不具备自我复制能力,无生物安全危险,所以这种方法可以在生物安全二级实验室进行。
③替代病毒中和试验
替代病毒中和试验是基于竞争性酶联免疫吸附试验
(ELISA)
的原理,利用重组
RBD
蛋白与重组
ACE2
蛋白的结合作用来模拟病毒
-
细胞相互作用。样品中的中和抗体可有效阻断
RBD
蛋白与
ACE2
蛋白的结合。与病毒和假病毒中和试验相比,替代病毒中和试验更安全、更容易执行且耗时更少。
义翘神州新开发了一系列优质
RBD
蛋白,涵盖野生型
(
货号
: 40592-V08B)
、
Alpha
变异株
(
货号
: 40592-V08H82
)、
Beta
变异株
(
货号
: 40592-V08H85)
、
Gamma
变异株
(
货号
: 40592-V08H86)
,
Delta
变异株
(
货号:
40592-V08H90)
,
Omicron
变异株
(
货号:
40592-V08H121)
。在替代病毒中和试验中,这些
RBD
蛋白可用于检测不同中和抗体对不同变异株的中和活性
(
表
1)
。结果表明,义翘神州开发的这些抗体具有不同的中和活性。
同时义翘神州提供
假病毒中和检测服务
,详情可以关注:
https://cn.sinobiological.com/services/pseudovirus-neutralization-assay-service
原文出自
SARS-CoV-2
中和抗体检测的工具试剂
:
https://cn.sinobiological.com/news/reagents-for-sars-cov-2-neutralizing-antibody-detection
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