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Trx标签蛋白:深度解析与常见问题解答
Ins_bf0c01c3
2024/01/19
私聊
生命科学仪器综合讨论
硫氧还蛋白(
Thioredoxins
)是一系列广泛存在于生物体内的氧化还原酶,它能通过置换硫代二硫化物来减少二硫键的结合。常用作融合表达标签的硫氧还蛋白
A(TrxA),
分量为
11.6kDa
,来源于大肠杆菌。
TrxA
标签最独特的优点是它的热稳定性。
TrxA
本身不作为亲和标签来进行重组蛋白优化,而是通过在高温条件下将杂蛋白变性去除而重组蛋白得以保存。
TrxA
也具有极好的促溶效率,用作促溶标签时可将重组蛋白的可溶性表达从
12%
提高至
95%
。
下面是针对
trx
标签常见问答解析:
①
trx
标签蛋白序列
MSDKIIHLTD DSFDTDVLKA DGAILVDFWA EWCGPCKMIA PILDEIADEY QGKLTVAKLN IDQNPGTAPK YGIRGIPTLL LFKNGEVAAT KVGALSKGQL KEFLDANLAG SGSGHMHHHH HHSSGLVPRG
②带有
trx
标签会不会影响蛋白的抗原性
有可能的,
trx
标签是比较大的融合标签,有
20
多
KDa
,非常有可能改变蛋白的抗原决定簇。
一般为了不影响蛋白的功能,会在
trx
标签和目标蛋白之间加一个酶切位点,比如肠激酶的位点
DDDDK
,把
trx
标签去除掉。
③
TRX
标签蛋白怎么纯化
一般这个载体中都会有
His
标签,直接用镍柱纯化即可
④常见的
蛋白标签
有哪些?有什么特点?
常见的蛋白标签有
His-Tag
、
FLAG-Tag
、
HA-Tag
、
Myc-Tag
、
SUMO-Tag
……
His-Tag
主要应用:蛋白纯化优选,也可用于检测。
特点:
? 分子量小,不影响目的蛋白的可溶性、结构和功能。
? 可在非离子型表面活性剂存在
/
变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用,后者在纯化包涵体蛋白时表现突出。
? 可应用于多种表达系统,纯化的条件温和。
? 可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
? 免疫原性相对较低。
FLAG-Tag
主要应用:
广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域,在真核表达系统中表达效率更高。
特点:
? 分子量小,不影响融合蛋白功能,比同类标签更具亲水性。
? 目的蛋白可直接通过
FLAG
标签进行亲和层析,此层析为非变性纯化,可以纯化有活性的融合蛋白且纯化效率高。
? 可以被抗
FLAG
抗体所识别,便于通过
WB
、
ELISA
等方法对含有
FLAG
标签的融合蛋白进行检测、鉴定。
? 融合在目的蛋白
N
端的
FLAG
标签,其可以被肠激酶切除(
DDDK
),从而得到特异的目的蛋白。
更多关于蛋白标签详情可以参看:
https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag
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