仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
杂交瘤技术的基本原理及应用
Ins_bf0c01c3
2024/02/07
私聊
生命科学仪器综合讨论
杂交瘤技术
,作为现代生物技术的瑰宝,自诞生以来便在生物医学领域产生了深远的影响。其基本原理在于利用细胞融合技术,将免疫的
B
淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合,从而得到一种新型的杂交细胞——杂交瘤细胞。这种细胞既保留了
B
淋巴细胞产生特异性抗体的能力,又继承了骨髓瘤细胞无限增殖的特性。通过筛选和克隆,我们可以获得稳定产生特定抗体的杂交瘤细胞系,进而制备出高纯度、高特异性的单克隆抗体。下面是具体的关于杂交瘤技术原理及应用:
杂交瘤技术的基于三种关键技术。
一、动物免疫
将特定的抗原注射到哺乳动物(如小鼠)体内,在外来抗原刺激下,被免疫动物脾脏内的
B
淋巴细胞大量增殖并且分泌针对于该抗原的特异性抗体。动物免疫的作用就是用特定外来抗原对动物进行免疫,以刺激能分泌特异性抗体的
B
淋巴细胞大量增殖。
二、细胞融合
B
淋巴细胞受外来抗原刺激后可以分泌抗体,但
B
淋巴细胞本身是一种终末分化细胞,通常不再进行细胞分裂,存活一段时间(两周)便死亡
-
短命细胞;而骨髓瘤细胞不分泌抗体,却能在体外无限增殖存活。如果能将这两种细胞的特性结合起来,就能得到既能分泌抗体又能在体外长期存活的细胞,细胞融合杂交瘤细胞中非常关键的一个步骤。
通常使用的细胞融合技术有生物方法如仙台病毒,化学方法如聚乙二醇(
PEG
),物理方法如电融合。
B
淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后,能产生五种细胞类型;未融合脾细胞,未融合骨髓瘤细胞,脾细胞
-
脾细胞融合体,骨髓瘤细胞
-
骨髓瘤细胞融合体,脾细胞
-
骨髓瘤细胞杂合体(杂交瘤细胞)。其中,我们需要利用另一个关键技术
-
杂交瘤细胞筛选
-
将所需的杂交瘤细胞分离出来。
三、杂交瘤细胞筛选
筛选杂交瘤细胞一般使用
HAT
培养基。
HAT
培养基筛选方法基本原理:
HAT
培养基成分:含有次黄嘌呤
(H)
、氨基喋呤
(A)
和胸腺嘧啶
(T)
三种成分。
细胞
DNA
合成途径:主要合成和补救合成途径两种方式。主要合成就是利用糖和氨基酸在二氢叶酸还原酶的催化下来合成
DNA
;而补救合成途径则是通过次嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase
,
HGPRT)
和胸腺嘧啶激酶
(thymidine kinase
,
TK)
将核苷酸前体合成核苷酸以供
DNA
合成原料。
HAT
培养基中氯基喋呤是二氢叶酸还原酶的抑制剂,能有效地阻断
DNA
合成的内源性途径。融合前的骨髓瘤细胞不能产生抗体,并且缺乏次黄嘌呤 – 鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(
HGPRT
)基因,使得它们对
HAT
培养基敏感,阻断了
DNA
补救合成途径。
将融合的细胞在
HAT
培养基中孵育大约
10
至
14
天,未融合的以及自身融合的骨髓瘤细胞死亡。这是因为
HAT
培养基阻断了骨髓瘤细胞两大
DNA
合成途径。未融合的以及自身融合的
B
淋巴细胞虽然能够合成
HGPRT
酶,但其是正常细胞,存活一段时间(两周)也死亡。因此,在
HAT
养基中,只有
B
细胞
-
骨髓瘤杂合体存活,因为杂交瘤细胞继承了
B
淋巴细胞和骨髓瘤细胞的双重特性,能够合成
HGPRT
酶和
TK
酶。这些杂交瘤细胞能够分泌抗体(
B
细胞特性)并且无限增殖(骨髓瘤细胞特性)。
然后将培养基稀释到多孔板中,使得每个孔仅含有一个杂交瘤细胞。再由这些单细胞克隆生长,最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株。由于孔中的抗体由相同的
B
细胞产生,针对相同的抗原表位,所以产生的抗体又被称之为单克隆抗体。
接下来采用体内或者体外方式对筛选的能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞进行扩大培养,最后收集提纯获取单抗。
杂交瘤技术应用:
①疾病诊断:单克隆抗体在疾病诊断中发挥着重要作用,以其准确且无交叉反应的特点,显著提高了诊断的准确性。例如,在乙型肝炎及潜伏的乙型肝炎病毒的诊断中,单克隆抗体能显著减少假阴性的漏诊。
②治疗载体:单克隆抗体也可以作为治疗疾病的载体。通过与抗肿瘤药物结合,单克隆抗体能在体内选择性集中攻击肿瘤细胞,具有靶向性,从而减少对正常组织的损伤并减轻抗癌药物的副作用。这种载药单克隆抗体被誉为“生物导弹”。
③抗体序列保护:获取抗体基因序列后,可以通过专利对
CDR
区进行保护,从而保护创新性的抗体序列。
④生产方式备份:由于杂交瘤存在退化转阴的风险,抗体序列可以通过基因工程方式轻松获得抗体样品,为生产方式提供备份。
⑤抗体工程改造:获得的抗体序列可用于抗体人源化、双特异性抗体等抗体工程改造项目,进一步拓展抗体的应用范围和效果。
⑥癌症研究:杂交瘤技术可以制备大量的特异性抗体,用于检测肿瘤标志物、研究癌细胞的生物学特性、筛选分子靶点等。此外,该技术还可以用于检测肿瘤细胞表面的抗原,通过对来自不同患者的癌瘤细胞进行克隆化和筛选,发现不同肿瘤的抗原异质性,为临床肿瘤治疗提供新的思路和策略。
总的来说,杂交瘤技术以其独特的优势在多个领域都有着广泛的应用,为生物医学研究和疾病治疗提供了有力的工具。
义翘神州提供
杂交瘤细胞抗体基因测序服务
和
杂交瘤细胞培养及抗体生产服务
,有需求可以咨询。
https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-sequencing-service
https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service
义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索
“义翘神州”与我们取得联系。
相关话题
1
肺癌概述及早期诊断
2
抗原抗体结合反应的原理
3
什么是杂交瘤技术?杂交瘤技术的原理及步骤
4
真核细胞培养中的常见问题及其解决方案
5
定制抗体服务,探索生命奥秘
近期热榜
迎国庆送壕礼!十月发帖抢大疆云台
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
喜迎国庆!第十七届原创大赛超级原创日参赛奖励翻倍
丹纳赫四十周年寄语征集领大礼包
热门活动
【售后专场--招聘会】
第三届微课大赛投票进行中ing
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
核酸量法测生物量
分享
2012/12/08
【转帖】研究称多痣之人寿命更长 女性样貌可年轻7岁
2010/11/24
【每日一题1.21】【有奖问答】
讨论
2012/01/21
求EPA中,关于作设备检测限和方法检测限的方法(中文)
2006/03/14
高通量抗体库技术的特点及筛选步骤简要分析
资料
2023/11/28
【求助】急求引物设计软件primer primer 5.0的中文教程
2008/09/01
流式细胞术详解 13.14章节
分享
2012/01/03
【资料】生物化学[第七版][PDF]
2009/01/21
医疗仪器的革新:守护生命的科技力量
分享
2024/09/19
仪器的魅力:科技探索与精准控制的基石
分享
2024/09/19
Tigergene动物实验用颅钻
原创
2024/09/16
全光谱流式细胞仪原理,可以帮忙解答一下吗
原创
2024/09/09
bd流式细胞仪多少钱一台,可以帮忙解答一下吗
原创
2024/09/09
生物技术领域外商投资放开-干细胞重大利好!
原创
2024/09/09
化学发光免疫分析原理,能不能展开详细说说
原创
2024/09/07
Excounter第三代全自动外泌体分析仪重磅上市(让外泌体检测从此简单)
原创
2024/09/07
实验室容量瓶、移液管等玻璃器皿检定
求助
2024/09/25
标准溶液该如何配置?
第十七届原创
2024/09/25
微量注射器用移液器检定规程出具证书,带CNAS logo,合理吗?
求助
2024/09/25
关于气相基线高一倍求助
求助
2024/09/24
浅谈培养基的技术性验收
第十七届原创
2024/09/25
如果计量器具较小,校准标签贴不开怎么办?
求助
2024/09/26
【求助】申请CNAS实验室认可,文审阶段老师提出我司的组织机构图中未体现有关部门对实验室的支撑关系。请问如何修改?
求助
2024/09/24
气象色谱仪显示ALS 故障代码 153是什么情况
求助
2024/09/27
制备单克隆抗体的基本流程及原理
资料
2024/02/07
免疫组化是什么技术?免疫组化方法及优点
资料
2024/02/07
放假倒计时中!!!
讨论
2024/02/07
Waters XEVO系列液质的特色
已应助
2024/02/07
如何下载资料
原创
2024/02/07
激光光谱的元素特征光谱分析
原创
2024/02/07
放假了,2024加油
原创
2024/02/07
饮料鼓包并且内部发臭,而同一批其他饮料味道无异常是怎么回事
已应助
2024/02/07
品牌合作伙伴
丹纳赫苏州基地 打工人的梦想
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...