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HPLC测定heme和原卟啉IX（PPIX）

Ins_0797d232

2024/06/17

液相色谱（LC）

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悬赏金额:10积分状态:未解决

因为接触液相全靠文献，不太懂一些hplc的细节。
跑了好久的hplc，用的是安捷伦1260 infinitlly ②
流动相：5mM醋酸铵；甲醇
检测器：400nmVWD（因为VWD检测器样品一直没有信号，所以就串联了FLD检测器）
色谱柱：C18反相色谱柱125*4mm， 5um
标品：因为极性小，用了DMSO溶解
样品：酶液中提取，提取剂为酸性丙酮；乙醇DMSO冰醋酸；（两种提取方法均来自于文献）
目前拿这个样品跑过upLCMSms，样品中肯定含有PPIX。
问题：为什么标品能正常出峰而样品只能出heme的峰，没有PPIX的峰？是前处理的问题吗？过膜会截留PPIX嘛？又或者是其他问题？在这里寻求各位的帮助！谢谢了！

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xiaolanzi5

第1楼2024/06/18

应助达人

我确认一下，您跑过MS的样品有ppix，但这个样品跑紫外时没出ppix的峰？这个样品在跑紫外时还过了膜吗？如果过膜，过的是什么膜？另外，您的提取剂是提到的两种中哪一种？

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dadgoh

第2楼2024/06/19

应助达人

紫外图谱27分左右那个小峰会不会就是目标封，再优化一下吸收波长呢？

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Ins_0797d232

第3楼2024/06/19

首先，质谱的结果，含有PPIX，质谱连的是紫外检测400nm波长。这个样品在hplc上跑就没有峰，跑的时候过膜了，0.22um有机滤膜。两种提取剂我都跑过HPLC。UPLCMSMS 用的提取剂是乙醇DMSO冰醋酸那个提取剂。
xiaolanzi5(xiaolanzi5) 发表:我确认一下，您跑过MS的样品有ppix，但这个样品跑紫外时没出ppix的峰？这个样品在跑紫外时还过了膜吗？如果过膜，过的是什么膜？另外，您的提取剂是提到的两种中哪一种？

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Ins_0797d232

第4楼2024/06/19

27min那里我不能确定。吸收波长，在酶标仪上进行光谱扫描过，文献报道也是400nm。
dadgoh(dadgoh) 发表:紫外图谱27分左右那个小峰会不会就是目标封，再优化一下吸收波长呢？

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