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【我们不一YOUNG】+液相流动相配制注意事项分享
Ins_baeeaeb7
2024/07/18
私聊
液相色谱(LC)
1
、溶剂选择:
所选用的流动相溶剂应具有化学稳定性,
不与
固定相和样品组分反应,
且纯度和化学特性应满足色谱过程的稳定性和重复性的要求。
溶剂应不干扰检测器的工作,
选择在测定波长范围内无吸收的流动相
。
2
、溶剂纯度:
使用
HPLC
级的溶剂和水,
特别是水相流动相需经常更换,
防止长菌变质。
使用去离子水、
针剂水、
纯净水
(
炊用
)
并不合适,
尤其是做梯度洗脱时,
水中的不纯物会成为鬼峰,
从而干扰分析结果
。
3
、流动相准备:
流动相使用前应用
0.45μm
滤膜过滤、
脱气,
以清除微粒和灰尘,
并防止在溶剂混合时或压力温度变化时产生大量气泡,
导致泵误动作和输液不畅。
流动相恢复到室温后使用,
特别是水与有机溶剂混合时,
混合液温度变化大,
务必注意
。
4
、
pH
值控制:
流动相的
pH
值过高或过低可能造成色谱柱填料被化学破坏。
使用缓冲盐做流动相时,
在使用前和使用后都要用水清洗流路,
绝对禁止将缓冲溶液留在流路中静置过夜或更长时间
。
5
、含盐流动相:
若需要使用含盐的流动相,
使用前务必过滤,
并且色谱柱需先用低比例有机相的溶液冲洗,
以免缓冲盐析出。
建议现用现配含盐的流动相,
以免流动相因滋生微生物而造成柱填料的污染
。
6
、温度控制:
校正溶剂的温度至室温,
以确保体积一致和分析的重现性。
这应该通过将溶剂放入热水或冷水浴中来完成,
以适当调节溶剂温度所需的为准
。
7
、过滤器选择:
在制备过程中过滤流动相时,
选择正确的滤光片类型非常重要。
对于
HPLC
系统,
建议使用孔径为
0.45μm
或更小的膜式过滤器。
对于
UPLC
系统,
孔径应为
0.22μm
或更小
。
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