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【我们不一YOUNG】保留时间与 pH 值
城头变幻大王骑
2024/07/18
私聊
液相色谱(LC)
问
:我新建了一种
液相
分离方法,但该方法似乎对 pH 值的变化非常敏感。这是一个简单的反相色谱方法,我没有使用任何的离子对试剂。我发现保留时间每天都有很大的变化,我可以确认 pH 值确实存在微小变化。问题出在哪里?
答
:从您对问题的描述来看,您所处理的是:pKa 值接近流动相
pH 值的离子型化合物。因此,您需要处理两种保留时间明显不同的化合物。例如,这可能是质子化和非质子化形式的酸。带电形式化合物的保留因子要比不带电形式的要小得多。两者之间的平衡取决于 pH 值。流动相 pH 值的微小变化会改变化合物两种形式的比例,从而影响保留时间。
因此,有必要严格控制 pH 值。由于您已经做了一些实验,您可能已经获得了足够的信息来定量了解保留时间与 pH 值的关系。如果还没有,可以做一些对照实验来获得这方面的知识。此外,您还可以查看该方法的历史记录。这些信息应该是在方法稳健性测试过程中产生的。一旦有了依赖性,您就需要决定您可以接受的保留时间波动范围。然后计算 pH 值调整的精度。即使在困难的情况下,±0.02 pH 单位的精度也应该足够了。
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