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【我们不一YOUNG】保留时间与 pH 值

城头变幻大王骑

2024/07/18

液相色谱（LC）

问：我新建了一种液相分离方法，但该方法似乎对 pH 值的变化非常敏感。这是一个简单的反相色谱方法，我没有使用任何的离子对试剂。我发现保留时间每天都有很大的变化，我可以确认 pH 值确实存在微小变化。问题出在哪里？

答：从您对问题的描述来看，您所处理的是：pKa 值接近流动相 pH 值的离子型化合物。因此，您需要处理两种保留时间明显不同的化合物。例如，这可能是质子化和非质子化形式的酸。带电形式化合物的保留因子要比不带电形式的要小得多。两者之间的平衡取决于 pH 值。流动相 pH 值的微小变化会改变化合物两种形式的比例，从而影响保留时间。

因此，有必要严格控制 pH 值。由于您已经做了一些实验，您可能已经获得了足够的信息来定量了解保留时间与 pH 值的关系。如果还没有，可以做一些对照实验来获得这方面的知识。此外，您还可以查看该方法的历史记录。这些信息应该是在方法稳健性测试过程中产生的。一旦有了依赖性，您就需要决定您可以接受的保留时间波动范围。然后计算 pH 值调整的精度。即使在困难的情况下，±0.02 pH 单位的精度也应该足够了。

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