1．目的
对QTRAP5500定期（每次关机后开机，或每3个月）进行PPG质量校正，保证该仪器处于精确度、灵敏度、分辨率高的状态。
2．适用范围
适用于华大基因质谱分析实验室
3．责任
设备负责人应根据维护计划定期对QTRAP5500进行离子阱质量校正；
所有操作人员必须严格按照本操作规程所规定操作，如遇到特殊情况需要修改操作方法，需经分管领导批准；
质量监督员、质量负责人负责监督操作规程的执行与实施。
4. 操作步骤
4.1正离子模式下PPG质量手动校正
4.1.1 Q1 Positive MS 校正
1) 在硬件配置Hardware Configure 菜单下Active 激活MSOnly (质谱仪和注射泵)；
2) 点击
，确认压力在0.4~1.1×10-5torr之间，打开“Installtion”Project；
3) 点击左边导航栏Navigation Bar 的Tune and Calibrate进入手动调谐模式，点击
，
点击
进入ready状态；
4) 双击Mannul Tuning，进入手动调谐模式；
5) 打开Q1 PosPPGs.dam文件；
6) 调整Scan rate为10Da/s；
7) 进PPG Positive 溶液(2.0×10-7M)，Stringe Pump Method,勾上use（
），先
以大流速（如30μl/min）跑1min，点击Start Syringe；
8) 开针泵，稳定后改为5μl/min的流速；选一个质量的峰优化喷雾针伸出的长度，连续扫描5min，一边调喷雾针伸出的长度，一边看Intensity，取Intensity强度最大值时喷雾针伸出的长度（开始时喷雾针伸出的长度可以设为2mm左右，通过左右调位置看哪个时候Intensity最大）；---该步是换过喷雾针才需做的，一般省略不做，调节TIS electrode 位置方法也一样。
9) 用MCA方式采集10 Cycles , 右键Open file，点击任一质谱峰，右键list Data，切换到Calibration Peak list，按表1 看Intensity 、Peak width、Mass shift 各项指标是否符合；
表1
Mass(Da) | Intensity(cps) (10 MCA scans) | Peak width(Da) | Mass shift(amu) |
59.050 | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
175.133 | >=1.2×106 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
500.380 | >=9.0×106 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
616.464 | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
906.673 | >=1.4×107 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
10) 如果不符合表1的指标，通过调节offset参数去优化，具体步骤为：
11) 回到Mass Method 界面，切换到Resolution，点击Advanced,通过修改offset值，优化各项指标（一般地，提高offset，Resolution会上升，Peak width会减小，Intensity会下降）；
12) 当Intensity和Peak width的指标符合后，点击任一质谱图，点击
（Callibrate From Spectrum）, 出现MassCallibration options窗口，在Standard项选择PPGs POS
13) （
），查看Reference中各个离子的质荷比是否是59.050、175.133、500.380、616.464、906.673，不是的话Edit，各项参数都符合后，点击
；
14) 得到一个校准结果图，看所有的点是否在红线范围内，即Mass shift是否<=0.1，是的话，点击update，优化结束，不是的话，点击update，再重新打一次质谱；
15) 若手动校正不能达到指标，则按照4.3仪器自动校正的步骤进行校正后，再按照手动校正的步骤进行验证是否满足仪器指标的要求；
16) 达到指标后，更新数据，不保存方法；
17) 调整Scan rate为200 Da/s；
18) 用MCA方式采集50 Cycles ,右键Open file，点击任一质谱峰，右键list Data，切换到Calibration Peak list，按表2 看Intensity 、Peak width、Mass shift 各项指标是否符合；
表2
Mass(Da) | Intensity(cps) at 200 Da/s (50 MCA scans) | Intensity(cps) at 1000 Da/s (50 MCA scans) | Intensity(cps) at 2000 Da/s (100 MCA scans) | Peak width(Da) | Mass shift(Da) |
59.050 | n/a | n/a | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
175.133 | >=6.0×106 | >=6.0×106 | >=1.2×107 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
500.380 | >=4.4×107 | >=4.4×107 | >=9.0×107 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
616.464 | n/a | n/a | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
906.673 | >=6.8×107 | >=6.8×107 | >=1.4×108 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
19) 如果不符合表2的指标，通过调节IE1和offset去优化；
注：一般先调节offset值，达不到指标再调IE1，上述措施无效，则先自动校正
20) 达到指标后，更新数据，不保存方法；
21) 重复步骤13到15，以1000 Da/s的Scan rate用MCA方式采集50Cycles；
22) 重复步骤13到15，以2000 Da/s的Scan rate用MCA方式采集100Cycles。
4.1.2 Q3 Positive MS 手动校正
1）打开Q3 PosPPGs.dam文件；
2）调整Scan rate为10Da/s；
3）进PPG Positive 溶液(2.0×10-7M)以5μl/min 的流速；
4）用MCA方式采集10 Cycles , 右键Open file，点击任一质谱峰，右键list Data，切换到Calibration Peak list，按表3 看 Intensity 、Peak width、Mass shift 各项指标是否符合；
表3
Mass(Da) | Intensity(cps) (10 MCA scans) | Peak width(Da) | Mass shift(amu) |
59.050 | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
175.133 | >=1.2×106 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
500.380 | >=9.0×106 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
616.464 | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
906.673 | >=1.4×107 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
5）如果不符合表3的指标，通过调节offset参数去优化；
6）达到指标后，更新数据，不保存方法；
7）调整Scan rate为200 Da/s；
8）用MCA方式采集50 Cycles , 右键Open file，点击任一质谱峰，右键list Data，切换到Calibration Peak list，按表4 看Intensity 、Peak width、Mass shift 各项指标是否符合；
表4
Mass(Da) | Intensity(cps) at 200 Da/s (50 MCA scans) | Intensity(cps) at 1000 Da/s (50 MCA scans) | Intensity(cps) at 2000 Da/s (100 MCA scans) | Peak width(Da) | Mass shift(Da) |
59.050 | n/a | n/a | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
175.133 | >=6.0×106 | >=6.0×106 | >=1.2×107 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
500.380 | >=4.4×107 | >=4.4×107 | >=9.0×107 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
616.464 | n/a | n/a | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
906.673 | >=6.8×107 | >=6.8×107 | >=1.4×108 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
注：一般建议先调节offset值，实在达不到指标再调IE3
9)如果不符合表4的指标，通过调节IE3和offset去优化；10）达到指标后，更新数据，不保存方法；
11）重复步骤8到10，以1000 Da/s的Scan rate用MCA方式采集50Cycles；
12）重复步骤8到10，以2000 Da/s的Scan rate用MCA方式采集100Cycles。
4.2负离子模式下PPG质量手动校正
4.2.1Q1 Nagative MS 校正
1）打开Q1 NegPPGs.dam文件；
2）调整Scan rate为10Da/s；
3）进PPG Nagative溶液(3.0×10-5M)，以10 μl/min的流速；
4）用MCA方式采集10 Cycles , 右键Open file，点击任一质谱峰，右键list Data，切换到Calibration Peak list，按表5看Intensity 、Peak width、Mass shift 各项指标是否符合；
表5
Mass(Da) | Intensity(cps) (10 MCA scans) | Peak width(Da) | Mass shift(amu) |
44.998 | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
411.259 | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
585.385 | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
933.636 | >=1.0×107 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
5）如果不符合表5的指标，通过调节offset参数去优化；
6）达到指标后，更新数据，不保存方法；
7）调整Scan rate为200 Da/s；
8）用MCA方式采集50 Cycles , 右键Open file，点击任一质谱峰，右键list Data，切换到Calibration Peak list，按表6 看Intensity 、Peak width、Mass shift 各项指标是否符合；
表6
Mass(Da) | Intensity(cps) at 200 Da/s (50 MCA scans) | Intensity(cps) at 1000 Da/s (50 MCA scans) | Intensity(cps) at 2000 Da/s (100 MCA scans) | Peak width(Da) | Mass shift(Da) |
44.998 | n/a | n/a | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
411.259 | n/a | n/a | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
585.385 | n/a | n/a | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
933.636 | >=4.0×107 | >=4.0×107 | >=8.0×107 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
9)如果不符合表6的指标，通过调节IE3和offset去优化；
注：一般建议先调节offset值，实在达不到指标再调IE1
10）达到指标后，更新数据，不保存方法；
11）重复步骤8到10，以1000 Da/s的Scan rate用MCA方式采集50Cycles；
12）重复步骤8到10，以2000 Da/s的Scan rate用MCA方式采集100Cycles。
4.2.2Q3 Nagative MS 手动校正
1）打开Q3 NegPPGs.dam文件；
2）调整Scan rate为10Da/s；
3）进PPG Nagative溶液(3.0×10-5M)，以10 μl/min的流速；
4）用MCA方式采集10 Cycles , 右键Open file，点击任一质谱峰，右键list Data，切换到Calibration Peak list，按表7查看Intensity 、Peak width、Mass shift 等各项指标是否符合；
表7
Mass(Da) | Intensity(cps) (10 MCA scans) | Peak width(Da) | Mass shift(amu) |
44.998 | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
411.259 | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
585.385 | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
933.636 | >=8.0×106 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
5）如果不符合表7的指标，通过调节offset参数去优化；
6）达到指标后，更新数据，不保存方法；
7）调整Scan rate为200 Da/s；
8）用MCA方式采集50 Cycles ,右键Open file，点击任一质谱峰，右键list Data，切换到Calibration Peak list，按表8看Intensity 、Peak width、Mass shift 各项指标是否符合；
9)如果不符合表8的指标，通过调节IE3和offset去优化；
注：一般建议先调节offset值，实在达不到指标再调IE3
10）达到指标后，更新数据，不保存方法；
11）重复步骤8到10，以1000 Da/s的Scan rate用MCA方式采集50Cycles；
表8
Mass(Da) | Intensity(cps) at 200 Da/s (50 MCA scans) | Intensity(cps) at 1000 Da/s (50 MCA scans) | Intensity(cps) at 2000 Da/s (100 MCA scans) | Peak width(Da) | Mass shift(Da) |
44.998 | n/a | n/a | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
411.259 | n/a | n/a | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
585.385 | n/a | n/a | n/a | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
933.636 | >=4.0×107 | >=4.0×107 | >=8.0×107 | 0.6 to 0.8 | <=0.1 |
12）重复步骤8到10，以2000 Da/s的Scan rate用MCA方式采集100Cycles。
4.3 PPG质量自动校正
4.3.1 双击左边导航栏Navigation Bar 的Instrument Optimization进入自动调谐模式；
4.3.2 选择“Adjust instrument settings”，再点击“Next”，进入“Select a tuning mode”页面
图1
图 2
4.3.3 选择“Approved Tuning”模式，再点击“Next”，进入“Select the Scan modes”，并如图 1所示选择相匹配的“Tuning Solution”（PPG或者PPG 3000）、“Polarity”以及需要校正的参数，再点击“Next”后进入图 2所示的页面，在该页面修改喷雾电压、Gas1、注射泵的类型和流速等相关参数后，点击“Go”按钮，仪器开始进行自动校正，仪器在校正过程中的状态如图 3所示；
图3
4.3.4 校正自动完成后，会出现“Result Summary”的页面，点击“Finised”结束自动校正；
4.3.5 自动校正的结果以优化起始时间命名，默认保存在Project-“API Instrument”的“Data”文件夹下，可以进行查看；
4.3.6自动校正完成后，进入手动调谐模式，验证仪器状态是否符合各项指标；
5. 注意事项
5.1仪器正常运行时，禁止接触离子源，避免受到高温、高压的伤害；
5.2仪器停止工作后半小时内，禁止接触离子源，避免受到高温的伤害；
应助达人
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