仪器信息网APP

选仪器、听讲座、看资讯

立即体验

当前位置：仪器社区 >质谱 > 液质联用（LCMS） > 帖子详情

SCIEX QTRAP 5500 离子阱质量校正标准操作规程

zhangyongmei

2024/10/03

私聊

液质联用（LCMS）

1.目的

对QTRAP5500定期（每次关机后开机，或每3个月）进行离子阱质量校正，保证该仪器处于精确度、灵敏度、分辨率高的状态。

2.责任

设备负责人应根据维护计划定期对QTRAP5500进行离子阱质量校正；

所有操作人员必须严格按照本操作规程所规定操作；

3.操作程序

3.1Enhanced Resolution (ER) Mode 校正

43.1.1ER Positive Mode 校正

1) 在硬件配置Hardware Configure 菜单下Active 激活质谱仪和注射泵；

2) 点击

，确认压力在0.4~1.1×10^-5torr之间

3) 点击左边导航栏Navigation Bar 的Tune and Calibrate进入调谐模式，点击

，点击

进入ready状态；

4) 双击Mannul Tuning，进入手动调谐模式；

5) 打开PosEnhRes.dam文件

6) 进ESI Tuning Mix 1:100 solution，Stringe Pump Method,勾上use（

），先以大流速（如30μl/min）跑1min，点击Start Syringe，开针泵，稳定后改为5μl/min的流速；

7) 用MCA方式采集50 Cycles , 以表1的scan rate 依次校正，Fill time 的设置也见表1 ，右键Open file，点击任一质谱峰，右键list

8) Data，切换到Calibration Peak list，按表1 看Intensity 、Peak width、Mass shift（<=0.1 amu）各项指标是否符合；

表1

Scan rate (Da/s)	Fill time (ms)	Mass 118.087 Da		Mass 922.010 Da
Scan rate (Da/s)	Fill time (ms)	Peak width	Intensity(cps), (50 MCA scans)	Peak width	Intensity(cps), (50 MCA scans)
50	2.0	<0.20	>=3.2×10⁶	<0.11	>=2.0×10⁷
250	0.2	<0.20	>=5.6×10⁶	<0.20	>=3.2×10⁷
1000	0.05	<0.35	>=7.2×10⁶	<0.35	>=2.8×10⁷
10000	0.05	<0.65	>=2.4×10⁷	<0.65	>=6.8×10⁷
20000	0.05	<0.75	>=1.6×10⁷	<0.75	>=5.6×10⁷

9) 如果不符合表1的指标，优先通过自动校正”进行调节优化，具体步骤详见“4.3 离子阱自动校正”；

10) 还可以参照《5500 Service Guide》Page 72-74的步骤，对仪器的Trap Amplitude（AF3）和Exit Barrier Voltage（EXB）进行优化；

11) 当Intensity和Peak width的指标符合后，点击任一质谱图，点击

（Callibrate From Spectrum）, 出现MassCallibration options窗口，在Standard项选择Aglient ESI Turing Mix POS，查看Reference中各个离子的质荷比是否是118.087、322.049、622.029、922.010，不是的话Edit，各项参数都符合后，点击

；

得到一个校准结果图，看所有的点是否在红线范围内，是的话，点击update，优化结束，不是的话，点击update，再重新打一次质谱；

12) 达到指标后，更新数据，不保存方法。

3.1.2 ER negative Mode 校正

1）打开NegEnhRes.dam文件；

2）进ESI Tuning Mix 100:1 solution以5μl/min 的流速；

3）用MCA方式采集50 Cycles , 以表2的scan rate 依次校正，Fill time 的设置也见表2 ，右键Open file，点击任一质谱峰，右键list Data，切换到Calibration Peak list，按表2 看Intensity 、Peak width、Mass shift（<=0.1 amu）各项指标是否符合；

表2

Scan rate (Da/s)	Fill time (ms)	Mass 431.982 Da		Mass 601.978 Da
Scan rate (Da/s)	Fill time (ms)	Peak width	Intensity(cps), (50 MCA scans)	Peak width	Intensity(cps), (50 MCA scans)
50	2.0	<0.11	>=4.8×10⁷	<0.11	>=4.8×10⁷
250	0.05	<0.20	>=8.0×10⁶	<0.20	>=1.2×10⁷
1000	0.05	<0.35	>=4.4×10⁷	<0.35	>=5.6×10⁷
10000	0.05	<0.65	>=1.2×10⁸	<0.65	>=1.6×10⁸
20000	0.05	<0.75	>=1.0×10⁸	<0.75	>=1.2×10⁸

4）如果不符合表2的指标，优先通过自动校正”进行调节优化，具体步骤详见“4.3 离子阱自动校正”；

5）还可以参照《5500 Service Guide》Page 72-74的步骤，对仪器的Trap Amplitude（AF3）和Exit Barrier Voltage（EXB）进行优化；

6）当Intensity和Peak width的指标符合后，点击任一质谱图，点击

（Callibrate From Spectrum）, 出现MassCallibration options窗口，在Standard项选择Aglient ESI Turing Mix NEG，查看Reference中

各个离子的质荷比是否是112.985、431.982、601.978，不是的话Edit，各项参数都符合后，点击

；得到一个校准结果图，看所有的点是否在红线范围内，是的话，点击update，优化结束，不是的话，点击update，再重新打一次质谱；

7）达到指标后，更新数据，不保存方法；

3.2 Enhanced Product Ion (EPI) Mode 校正

3.2.1打开EPI.dam文件；

3.2.2 参数的设置可以参考表3；

表3

Parameter	Value
Product of	609.2(or as calibrated)
Mass Range(Da)	165 to 615
Q1 Resolution	Unit
Collision Gas(CAD)	12
Declustering Potential(DP)	80 to 140
Collision Energy(CE)	40 to 65
Number of scans to sum	1
Trap fill time(ms)	0.05
Scan rate(Da/s)	1000,10000,20000

3.2.3 进Reserpine 6:1 solution (0.167pmol/μl)以5μl/min 的流速；

3.2.4 调整Scan rate 为1000 Da/s，同时，调整Q0 Trappingoff；

3.2.5 用MCA方式采集20 Cycles , 确认能找到以下四个片段：174.1、195.1、397.2、448.1 Da，以397.2 Da的片段为例，对照表4，看各项指标是否符合；

表4

Scan rate (Da/s)	Intensity of 397.2 Da (20 MCA)
Scan rate (Da/s)	Q0 Trapping off	Q0 Trapping on
1000	>=8.0×10⁵	n/a
10000	>=2.0×10⁶	>=6.4×10⁶
20000	>=8.0×10⁵	>=3.2×10⁶

3.2.6 如果不符合表4的指标，优化CE和DP值；

3.2.7 达到指标后，更新数据，不保存方法；

3.2.8 调整Q0 Trapping on,并且选择Center/Width为397.2Da，Scan Width 为30Da，如表5所示；

表5

Parameter	value
Center Mass (Da)	397.2
Scan Width (Da)	30

3.2.9 用MCA方式采集20 Cycles ,对照表4，看各项指标是否符合，如果不符合表4的指标，调整CE和DP值；

3.2.10 达到指标后，更新数据，不保存方法；

3.2.11 重复步骤4.2.2到步骤4.2.10，以10000 Da/s的Scan rate用MCA方式采集20Cycles；

3.2.12 重复步骤4.2.2到步骤4.2.10，以20000 Da/s的Scan rate用MCA方式采集20Cycles。

3.3离子阱自动校正

3.3.1 双击点击左边导航栏Navigation Bar 的Instrument Optimization进入自动调谐模式；

3.3.2 选择“Adjust instrument settings”，再点击“Next”，进入“Select a tuning mode”页面

3.3.3 选择“Approved Tuning”模式，再点击“Next”，进入“Select the Scan modes”，并如图 1所示选择相匹配的“Tuning Solution”（100× dilute Agilent）、“Polarity”以及需要校正的参数，再点击“Next”后进入图 2所示的页面，在该页面修改喷雾电压、Gas1、注射泵类型和流速等相关参数后，点击“Go”按钮，仪器开始进行自动校正，仪器在校正过程中的状态如图 3所示；

图1

图 2

图33.3.4校正自动完成后，会出现“Result Summary”的页面，点击“Finised”结束自动校正；3.3.5 自动校正的结果以优化的起始时间命名，默认保存在Project-“API Instrument”的“Data”文件夹下，可以进行查看；3.3.6 自动校正完成后，进入手动调谐模式，验证仪器状态是否符合各项指标；

相关话题

+关注

私聊

cxshui

第1楼2024/10/24

感谢分享！
请问离子阱自动校正的时候，用的调谐液还是稀释100倍的ES混合液吗？
现在ER校正找不到峰，提示响应太低，我用自动校正也找不到118的峰，感觉只能工程师上门了

+关注

私聊

zhangyongmei

第2楼2024/10/24

稀释10倍过后的调谐液吧！他们配了4500和5500的调谐液，我记得没有查那么多呀！而且自己稀释的时候你也要注意一下稀释的溶剂
cxshui(cxshui) 发表:感谢分享！
请问离子阱自动校正的时候，用的调谐液还是稀释100倍的ES混合液吗？
现在ER校正找不到峰，提示响应太低，我用自动校正也找不到118的峰，感觉只能工程师上门了

+关注

私聊

cxshui

第3楼2024/10/24

张老师有更详细的关于QTRAP功能的手动调谐和自动调谐资料吗？QTRAP5500我之前一直是拿来做三重四极杆用，常规的PPG调谐正负模式都没问题；只是最近才想着用Qtrap功能做做二级质谱，没有离子阱调谐的经验。
用的调谐液是从AB买的一整盒的那种，里面有ES Tuning MIX和相应的稀释溶剂，我是稀释了100倍去做ER Mode校正，发现找不到峰；然后还是用这个稀释100倍的调谐液去自动校正离子阱Instrument optimization，还是找不到峰，应该是离子阱哪里有问题，已报修了。
zhangyongmei(Insp_9a4dbcdf) 发表: 稀释10倍过后的调谐液吧！他们配了4500和5500的调谐液，我记得没有查那么多呀！而且自己稀释的时候你也要注意一下稀释的溶剂

+关注

私聊

zhangyongmei

第4楼2024/10/24

没有呢？我们差不多的，我们也是QTRAP，然后一直用来做包装材料的定量分析，没有用来做过定性，QTRAP如果要单独拿来做二级质谱定性的话是不是还要有库才行呀！你如果当做三重四级杆单独的去调谐没有问题，质谱那用该问题不大，可以咨询一下AB的工程师呢？
cxshui(cxshui) 发表: 张老师有更详细的关于QTRAP功能的手动调谐和自动调谐资料吗？QTRAP5500我之前一直是拿来做三重四极杆用，常规的PPG调谐正负模式都没问题；只是最近才想着用Qtrap功能做做二级质谱，没有离子阱调谐的经验。
用的调谐液是从AB买的一整盒的那种，里面有ES Tuning MIX和相应的稀释溶剂，我是稀释了100倍去做ER Mode校正，发现找不到峰；然后还是用这个稀释100倍的调谐液去自动校正离子阱Instrument optimization，还是找不到峰，应该是离子阱哪里有问题，已报修了。