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免疫共沉淀实验原理及详细步骤
Insp_3dd89f61
2024/10/26
私聊
综合仪器讨论
?
免疫共沉淀实验
(Co-Immunoprecipitation,简称Co-IP)?是一种用于研究蛋白质之间相互作用的方法。其基本原理是通过抗体特异性地识别目标蛋白质,利用抗原-抗体反应将目标蛋白及其相互作用蛋白一起沉淀下来,从而分析它们之间的相互作用。
实验原理
免疫共沉淀实验的核心是通过抗体来特异性识别候选蛋白质。首先,将靶蛋白的抗体通过亲和反应连接到固相基质上(如
琼脂糖珠
),再将待筛选蛋白质加入反应体系。在固体基质和抗体的共同作用下,能够与靶蛋白发生相互作用的蛋白质被分离出来?。
详细步骤
?
细胞裂解
?:将待研究的细胞在非变性条件下裂解,以保留细胞内蛋白质的天然状态和相互作用。
?
抗体结合
?:将靶蛋白的抗体预先固定在固体基质(如琼脂糖珠)上,然后将细胞裂解液加入反应体系。
?
蛋白质复合物沉淀
?:通过离心或微膜过滤法,将蛋白质复合物沉淀到固体基质上。能够与靶蛋白发生相互作用的蛋白质会被一起沉淀下来。
?
洗涤
?:去除非特异性结合的蛋白质,确保沉淀下来的主要是与靶蛋白相互作用的蛋白质。
?
洗脱和检测
?:将沉淀下来的蛋白质复合物从固体基质上洗脱下来,通过
Western Blotting
(
免疫印迹
)等方法检测目标蛋白及其相互作用蛋白的存在。
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