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【原创】关于参比溶液选择的研究

初学者&九点虎

2007/09/03

紫外可见分光光度计（UV）

关于参比溶液选择的研究

原来只是按部就班的做,从来没有细致考虑过这些问题,还好这次论坛整理帖子,顺便也给了我一次全面学习的机会,看看书,查查资料,整理整理,写的东西,我觉得挺有意思的,而且这类文章不象正式发表的文章,我想说什么就说什么,不用注意语言用词,不用注意格式,反而正式发表的文章给我感觉象八股文,让我难受,所以最近也没有写正式文章出来,论坛上的这类文章倒整理了不少.哈哈,废话不说了,开始讨论参比溶液的选择问题.
原来,这类问题研究的少,因为原来双光束的仪器不是很多,而现在高级仪器越来越多,这就是一个不容忽视的问题了.还有相当一部分人把参比和空白混淆,其实这两个概念真的挺晕的,之前我也晕了好久.
1原理
当一束平行光通过均匀的液体介质时,光的一部分被吸收,一部分透过溶液,还有一部分被器皿表面反射.假设入射光强度为I0(其实我不喜欢这么表示,还要弄下标,麻烦,可是很多书上都这么些,哎,没办法),吸收光强度为Ia,透射光强度为It,反射光强度为Ir,
(其中a表示absorption吸收,t表示transmittance透射,r表示reflection反射,嘿嘿,方便记忆,还顺便学几个单词,写论文有用)
则I0=Ia+It+Ir (1)
在分析过程中,被测溶液和参比溶液一般是分别放在同样材料和厚度的吸收池中(地球人都知道,又废话了),让强度为I0的单色光分别通过两个吸收池,再测量透射光的强度.所以反射光的影响可以相互抵消.(但是又有新的问题了,如果这样的话,那以前的单光束仪器岂不一直存在着反射光的影响,这个问题我想发个帖子单独讨论)
所以(1)式就被简化了:
I0=Ia+It (2)
透射光的强度 It与入射光的强度I0之比称为透射比,用T表示,那么,又有公式出现了,不过很简单:
T=It/I0 (3)
当然还有T和A的公式,大家都知道,我这里就不说了.
以上说了半天,就为说明一个问题,参比可以消除由于吸收池壁及溶剂对入射光的反射和吸收带来的误差.
2参比溶液的原则
既然有这好处,那下来吸收池里装什么就成了问题的关键,有好多中情况,有的我试验过,有的由于条件限制没有试验,如果有不对的地方,别拍我啊.
2.1当试液和显色剂都没有颜色时,可以用去离子水作为参比溶液.
2.2当显色剂没有颜色,而被测试液中存在其他有色离子,可用不加显色剂的被测试液作为参比溶液.
2.1和2.2很常用,尤其是2.2.我当时做果酱中亚硝酸盐的时候就遇到过这个问题,当时也想了很多办法,活性炭脱色,过柱子,掩蔽等,最后还是觉得用参比比较好,有兴趣的可以参考一下我写的论文<<双光束分光光度法测定果酱中的亚硝酸盐>>,我会上传的.
2.3显色剂有颜色,可以选择不加试样溶液的试剂空白做参比.
2.4显色剂和试液都有颜色,可将一份试液加入掩蔽剂,将被测组分掩蔽起来,使之不再和显色剂作用,而显色剂及其他试剂均按试液测定方法加入,以此来做为参比溶液,这样就可以消除显色剂和一些共存组分的干扰.
2.5改变加入试剂的顺序,使被测组分不发生显色反应,可以此溶液作为参比溶液消除干扰.这个方法操作起来比较困难,我没试验过,因为我的显色剂一加进去就有颜色了.
3单光束分光光度计实现参比的方法
不知道这方法行不行,存在一定的问题,但是也有一定的参考价值.
制作一个参比溶液,用空白校完仪器后放入,测定其吸光度,然后在制作标准曲线和测定样品的时候,同时减去参比的吸光度.
例如,用空白校完仪器后,测定参比的吸光度为0.006,而样品测定吸光度为0.447,则带入标准曲线计算的实际吸光度为0.441.这样就扣除了参比对测定结果的影响.
有什么疑问或不对欢迎找我啊,大家共同探讨!!!

关于参比溶液选择的研究

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关于参比溶液选择的研究

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相关话题

tangldy

第1楼2007/09/03

2.5的用途还是很广的。

参比溶液的选择还有另外一种情况，在显色溶液中加入氧化剂、还原剂、络合剂等，使得显色物退色作为参比。

0

中国龙

第2楼2007/09/20

呵呵，我就是搞不清参比和空白的关系，才来这个版来学习学习，看到楼主的帖子学到不少东西，不过还是没有完全搞明白两个的关系。

楼主能否详细讲一下参比和空白的关系，主要是在应用中的作用上。

有劳了。

0

pwzj

第3楼2007/11/30

请问参比溶液的吸光度能知道吗？

0

初学者&九点虎

第4楼2007/11/30

简单的说,空白是为了消除试验过程中加入试剂带来了响应即吸光度
而参比主要是为了消除仪器如光源噪声等引起的响应
如果是单光束的仪器,就不能做参比
参比是对双光束而言的
wenxina 发表:呵呵，我就是搞不清参比和空白的关系，才来这个版来学习学习，看到楼主的帖子学到不少东西，不过还是没有完全搞明白两个的关系。

楼主能否详细讲一下参比和空白的关系，主要是在应用中的作用上。

有劳了。

0

初学者&九点虎

第5楼2007/11/30

可以啊
把它当样品去测就可以
pwzj 发表:请问参比溶液的吸光度能知道吗？

0

zhaoxinyan_2005

第6楼2010/01/14

哦我糊涂了那比色皿中装的到底是空白还是参比啊？

0

zhaoxinyan_2005

第8楼2010/01/14

我在读研二我现在正在测酶活性用分光光度计正遇到参比这个问题导致我不知道该怎么做了我想请教一下如果方便的话我给您打个电话或发邮件我的邮箱：zhaoxinyan_2005@126.com

0

4235lin

第9楼2010/05/14

我还不知道参比溶液由那么多类型和功能，我在测样品的时候，参比都只是装的蒸馏水，主要目的是用来使所用的比色皿吸光度一致，而空白溶液则是在做标准曲线的时候才做的，目的是用来扣除基体带来的干扰。

问个问题，单束光的不做参比吗？我们用的仪器都是单束的【光度计723、721】，一样做参比

0

初学者&九点虎

第10楼2010/05/14

好的，我已经站短你了，互相学习
zhaoxinyan_2005(zhaoxinyan_2005) 发表:我在读研二我现在正在测酶活性用分光光度计正遇到参比这个问题导致我不知道该怎么做了我想请教一下如果方便的话我给您打个电话或发邮件我的邮箱：zhaoxinyan_2005@126.com

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初学者&九点虎

第11楼2010/05/14

单光束也可以扣除背景的干扰，只是不能实时，也是可以做的，先放参比，后放样品就可以了
4235lin(4235lin) 发表:我还不知道参比溶液由那么多类型和功能，我在测样品的时候，参比都只是装的蒸馏水，主要目的是用来使所用的比色皿吸光度一致，而空白溶液则是在做标准曲线的时候才做的，目的是用来扣除基体带来的干扰。

问个问题，单束光的不做参比吗？我们用的仪器都是单束的【光度计723、721】，一样做参比

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