有液相色谱测定维生素的方法吗，奶粉和饼干的前处理方法

AMAMFSJp0015维生素A 高效液相色谱法 定量



AM-AM-FS-Jp-0015

维生素A的高效液相色谱法定量测定



1.适用范围

本方法几乎适用于所有的食品中维生素A的测定。

2.主要试剂和仪器

2.1.主要试剂

无醛乙醇：在1L乙醇中加入5mL50%的KOH溶液及5gZn粉进行2h的回流后蒸馏之。除去初馏液和后馏液各10%；

无水Na2SO4：将无水Na2SO4在120℃的温度下加热2h后，在干燥器中放冷、保存；

维生素A醇：维生素A乙酸酯碱化后可得维生素A醇。计算出其国际单位IU（或μg），用时进行调制；

维生素A醇标准溶液：用异丙醇制备浓度为5IU/mL、25IU/mL、50 IU/mL的维生素A醇溶液。用时进行调制。

2.2.仪器

碱化用150mL褐色烧瓶；

分液漏斗：(250～300)mL, 褐色；

蒸馏用烧瓶：250mL，褐色，梨型；

高效液相色谱仪：带有荧光检测器。

3.过程简述

3.1.试验溶液的调制

准确称取 (20～30)IU(6～9μg) 维生素A于碱化烧瓶中，加入30mL的乙

醇和1mL的10%的邻苯三酚乙醇溶液，充分搅拌后，加入3mL90%（W/V?）KOH溶液，连接好回馏冷却器，在沸腾的水浴中进行30min碱化。快速冷却至室温后，加入30mL的水，移置于褐色的分液漏斗中。将烧瓶依次用10mL水、30mL石油醚清洗，洗液移置于褐色的分液漏斗中，充分振荡、摇匀、放置后，将水层移置于另一褐色的分液漏斗中，依次用30mL石油醚萃取2次，合并萃取液，用10mL的水清洗一次，再依次用50mL水清洗3次，进一步每次用50mL水清洗至酚酞指示液无色为止。

将分液漏斗中的石油醚层加无水Na2SO4进行脱水后，移至褐色烧瓶中，进

一步每次用10mL石油醚清洗残留的Na2SO4两次，洗液移至烧瓶中。将石油醚醚萃液在（40～45）℃条件下进行减压蒸馏，其残留物中加入异丙醇溶解，取1mL（VmL）作为试验溶液。

3.2.高效液相色谱条件：

色谱柱：ODS(4.6mmi.d×250mm)

移动相：乙醇:水（95:5）

流  速：0.5mL/min

检测器：荧光检测器（激发波长340nm，发射波长460nm）

3.3.定量：将20μL（υμL）的试验溶液注入色谱柱中，取维生素A醇的峰高。

3.4.作工作曲线：在同样的色谱条件下，分别取5IU/mL, 25IU/mL, 50IU/mL的维生素A醇

标准溶液20μL，注入色谱柱中，以各浓度所对应的峰高作工作曲线。

4.结果计算

通过工作曲线求出υμL中维生素A醇的IU单位数（或μg）[S[IU(μg) ]],利用下式计算100g试料中维生素A的IU单位数（或μg）。

试料为油脂的情况下：

100g试料中维生素A的量[IU(μg) ]=

S[IU(μg) ] ×[V(mL) ×1000/υ(μL) ]×[100/试料取样量（g）]

将油脂从试料中提取出的情况下：

100g试料中维生素A的量[IU(μg) ]=

S[IU(μg) ] ×[V(mL) ×1000/υ(μL) ]×[100/试料取样量（g）] ×X/100

X：试料中油脂的百分数

5.来源：

    《卫生试验法•注解》2000版  日本药学会编