【飞诺美色谱】氘代同位素内标测定鱼贝类肌肉中β-雌二醇残留 GC-MS 法

艾杰尔飞诺美

2024/04/02 16:15

1. 样品处理

1.1 匀质和提取

取鱼贝类肌肉组织,用家庭用搅拌器制样后于-18℃冷冻保存备用。准确称取 5 g 试样于 50 mL 离心管中，加入100 µL 内标标准工作溶液及 5 mL 乙酸钠缓冲溶液，用匀质器以 18000 r/min 匀质 2 次，每次 30s 后，加入 10 mL 乙腈，充分旋涡混合 1 min，室温下超声提取 15 min。取出离心管,以 10000 r/min于 4℃ 离心 10 min，上清液倒入另一离心管中。残渣中加入 10 mL 乙腈，按上述方法再提取一次，合并上清液。

1.2 净化

加入 10 mL 正己烷,加塞剧烈振荡 1～2 min，以 10000 r/min 于 4℃ 离心 5 min，吸弃正己烷层，下层溶液用正己烷重复洗涤一次，合并离心后的溶液于鸡心瓶。加入 0.5 mL 正丙醇，于 45℃ 水浴条件下旋转蒸发至干。残渣中加入 1 mL 乙腈，超声波清洗瓶壁 1 min 后，吸至 5 mL 注射器中。再用 1mL 乙腈提取一次，合并溶液并经有机系针头过滤器过滤，再用水稀释至 10 mL。Cleanert ® C18 SPE 小柱置于 Qdaura ® 卓睿全自动固相萃取仪中，样品提取液转移至上样管中并设定操作程序如下：6 mL 甲醇、3 mL 0.1% 乙酸溶液和 3 mL 水活化，加样，3 mL 水淋洗，抽干小柱，最后用 9 mL 乙腈洗脱并接收 (以上操作流速为 1 mL/min) 接收液氮气吹干。

1.3 衍生化

在1.2 残渣中准确加入 100 µL MSTFA2DTE2TM IS 衍生化试剂，盖紧塞子并旋涡混合 1 min，在 60℃ 烘箱中反应 30 min，冷却至室温，于 48 h内进行气相色谱2质谱分析。进行标准溶液的衍生化时，先吸取雌二醇和内标标准工作溶液于去活样品反应瓶中，旋涡混合并氮气吹干，然后同上进行衍生化应。

2. 色谱条件

气相色谱柱：DA-5MS 毛细管柱(25 m×0.32 mm×0.52 µm);

程序升温：柱初始温度120℃ (2 min)---- 250℃(15℃/min)---300℃(5 min，5℃/min) ；

载气：He ( ≥ 99. 999%)；

进样口温度：250℃；

不分流进样 1 µL；

流速：1.0 mL /min；

离子源：EI 离子源

四极杆温度分别为 230℃ 和 150℃；

接口温度 280℃；

电离电压 70 Ev；

溶剂延迟 3 min；