【飞诺美色谱】鱼肉中硝基咪唑类药物的分析方法

艾杰尔飞诺美

2024/04/07 17:23

摘要：本实验建立了鱼肉中 5 种硝基咪唑类药物残留的前处理方法，采用 Cleanert ® C18 小柱结合液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）对鱼肉中的 5 种硝基咪唑类药物进行了测定。样品经甲醇︰丙酮=3 ︰1 （V/V）溶液提取，再经饱和氯化钠和乙酸乙酯液液萃取，Cleanert ® C18 小柱净化，以 5 mmol/L乙酸铵和甲醇为流动相进行梯度洗脱，LC-MS/MS 进行检测，外标法定量。结果表明，当加标量为1.0 µg/kg 时，回收率在 90% ~ 110%之间，能够满足检测要求。

关键词：硝基咪唑；Cleanert ® C18；LC-MS/MS；鱼肉

前言

硝基咪唑类(nitroimidazoles)药物具有抗原虫和抗厌氧菌活性，临床上主要用于治疗畜禽的厌氧菌感染和防治各种原虫病。体内外毒理试验证实，硝基咪唑类药物具有致畸、致突变和致癌作用。因此我国农业部规定禁止甲硝唑、地美硝唑作为饲料添加剂用于食品动物，禁止洛硝达唑用于所有食品动物的任何用途。本文通过对前处理方法的优化，建立了鱼肉中 5 种硝基咪唑类药物同时测定的分析方法。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

AB SCEIX API 4000 + 液相色谱串联质谱仪。

试剂材料

甲醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、乙酸铵均为色谱纯；氯化钠为分析纯；实验用水为超纯水；

5 种硝基咪唑类药物混合标准工作溶液：羟甲基咪唑、2-甲硝咪唑、甲硝唑、洛硝达唑、羟基二甲硝咪唑：甲醇溶解；

Cleanert ® C18 固相萃取小柱：1000 mg/6 mL。

样品制备

样品提取

称取均质好的鱼肉样品 20 g 置于 250 mL 具塞锥形瓶中，加入 10 g 硅藻土与样品充分混匀，再依次加入 5 mL 饱和氯化钠溶液水溶液和 70 mL 甲醇︰丙酮=3︰1（V/V），高速均质 3 min。将提取液转移至离心管中，于 10000 r/min 条件下离心 5 min，将上清液转移至 250 mL 浓缩瓶中，剩余残渣用甲醇︰丙酮=3︰1（V/V）重复提取两次，合并提取液。将提取液用 40℃旋蒸至只剩余水相，转移至分液漏斗中，加入 50 mL 饱和氯化钠和 25 mL 乙酸乙酯，振摇 3 min，静置分层，收集乙酸乙酯相，水相再用 20 mL乙酸乙酯重复提取 2 次，合并乙酸乙酯相。再经约 3 g 的无水硫酸钠脱水，收集于浓缩瓶中，40℃旋蒸至近干，加入 5 mL 甲醇溶解残渣，并用 0.45 µm Nylon 针式过滤器过滤，待净化。

样品净化

将 Cleanert ® C18 小柱用 5 mL 甲醇活化平衡，将上述待净化液全部上样于小柱上，收集流出液，再用 10 mL 甲醇洗脱小柱，收集流出液，合并两次流出液，于 45℃下旋转蒸发至干，用流动相定容至 1 mL，待检测。

基质混合标准工作溶液

取高浓度硝基咪唑混合标准溶液，用空白样品基质溶液稀释成 0.02 µg/mL 的基质混合标准工作溶液。

实验条件

色谱条件

色谱柱：Venusil MP C18，3 µm，100 Å，3.0 × 50 mm

流动相：A相-5 mmol乙酸铵溶液，B相-甲醇

柱温：30℃

进样量：5 µL

梯度洗脱条件(见表1)

表1. 液相色谱梯度洗脱条件