【飞诺美色谱】去氢抗坏血酸分析报告

艾杰尔飞诺美

2024/06/14 16:41

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摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合蒸发光散射检测器，选择 Venusil® HILIC (5 μm，

100 Å，4.6 × 250 mm)色谱柱建立了去氢抗坏血酸的分析方法。结果表明：采用蒸发光散射检测器，

流动相为 0.1%甲酸︰乙腈=10︰90(v/v)，柱温为 30℃，进样量为 20 µL 时，测得去氢抗坏血酸峰型

较好，能够满足分析要求。

关键词：高效液相色谱法；蒸发光散射检测器；去氢抗坏血酸；Venusil® HILIC 色谱柱；

前言

抗坏血酸，是具有许多生物学功能的水溶性己糖衍生物，其分子中 2 位和 3 位碳

原子的两个烯醇式羟基极易解离，释放出 H+，而被氧化成去氢抗坏血酸。抗坏血酸和

去氢抗坏血酸在人体内形成可逆的氧化还原系统，此系统在生物氧化、还原作用及细胞

呼吸中起重要作用。

本实验使用Venusil® HILIC色谱柱采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合蒸发光散射

检测器，建立了去氢抗坏血酸的分析方法，以期为去氢抗坏血酸的分析提供参考。

表 1. 去氢抗坏血酸化学信息

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器；

试剂材料

实验用水为屈臣氏蒸馏水；乙腈、甲酸均为色谱纯试剂；

去氢抗坏血酸对照品：白色粉末，由某药业集团股份有限公司提供；

高效液相色谱柱：Venusil® HILIC；5 μm，100 Å，4.6 × 250 mm。

色谱条件

色谱柱：Venusil® HILIC；5 μm，100 Å，4.6 × 250 mm；

流动相：0.1 %甲酸︰乙腈=10︰90(v/v)；

流速：1.0 mL/min；

柱温：30℃；

进样量：20 µL；

检测器条件

检测器：ELSD；

雾化室温度：85℃；

载气：超纯氮气；

载气流量：2.0 ln/min

样品制备

称取去氢抗坏血酸对照品 5 mg，置 10 mL 样品瓶中，加入 5 mL 流动相超声溶解，

并稀释至刻度，摇匀，经 0.45 µm 滤膜过滤，取续滤液作为对照品储备溶液。分别量取

对照品储备液适量，加流动相稀释制成每 1.0 mL 中含去氢抗坏血酸 10 µg；20 µg；30 µg；

40 µg；50 µg 的溶液，作为对照溶液。

结果与讨论

本实验采用 Venusil® HILIC 色谱柱建立了去氢抗坏血酸的分析方法，由表 2 及下图

可知，流动相为乙腈和 0.1 %甲酸，等度洗脱时，对去氢抗坏血酸保留、峰形较好，可

满足检测要求。

表2.去氢抗坏血酸对照品溶液分析结果

图 1. Venusil® HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(10 µg/mL)

图 2. Venusil® HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(20 µg/mL)

图 3. Venusil® HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(30 µg/mL)

图 4. Venusil® HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(40 µg/mL)

图 5. Venusil® HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(50 µg/mL)

结论

本实验采用 Venusil® HILIC 色谱柱建立了去氢抗坏血酸的分析方法，根据实验结果

可知，采用蒸发光散射检测器，流动相为乙腈和 0.1 %甲酸，等度洗脱时，对去氢抗坏

血酸保留、峰形较好，可满足检测要求。

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