【飞诺美色谱】分子排阻色谱法分析EGFP IVT mRNA聚集体

艾杰尔飞诺美

2024/07/03 18:36

TA的动态

概述

mRNA聚集体检测是指使用特定的分析技术来识

别、量化并表征mRNA分子在生产或存储过程中可能

形成的聚集体。mRNA（信使核糖核酸）是一种单链

RNA分子，它携带遗传信息，指导细胞合成特定的蛋

白质。在mRNA疫苗或药物的生产过程中，mRNA分子

可能会因为多种因素（如温度变化、pH值波动、物理

或化学应力等）而形成聚集体。

聚集体的存在可能会影响mRNA的稳定性、活性

以及最终的疫苗或药物效果。因此，检测mRNA聚集

体对于确保产品质量、安全性和有效性至关重要。

本应用采用全新推出的Biozen dSEC-7建立了一种

分析mRNA聚集体的方法，并评估加热处理对聚集体

的影响。通过分子排阻色谱法（SEC-HPLC）研究人员

可以更好地理解和控制mRNA聚集体的形成，从而优

化mRNA疫苗和药物的生产工艺，提高产品质量。

致谢

本应用特别感谢云舟生物科技（广州）股份有限公司提

供此次样品，云舟生物以其卓越的产品和服务，为科研

工作者以及相关企业提供了宝贵的支持，他们提供的样

品不仅质量上乘，而且种类繁多，能够满足不同研究需

求。

关键词

mRNA；dSEC-7；聚集体

实验部分

3.1仪器、试剂与材料

3.1.1主要仪器设备

Agilent1260

3.1.2试剂材料

磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、Tris、乙酸

钠为分析纯，超纯水

3.1.3样品

EGFP IVT mRNA（998 nt），浓度为1129 ng/μL;

3.2色谱条件

色谱柱：Biozen dSEC-7（4.6×300 mm, 3 μm,

700 Å）；P/N: 00H-4789-E0

流动相：如下所示

流速：0.3 mL/min

柱温：30 ℃；

波长：260 nm；

上样量：1 μL

梯度方法：等度

3.3结果与讨论

3.3.1不同盐浓度对分离的影响

比较了在相同浓度PB缓冲液下，三种不同氯化

钠浓度对该mRNA聚集体分离的影响，发现并不是盐

浓度越高，分离越好，最优氯化钠浓度为100 mM，

分离度能接近1.5。

3.3.2 不同盐流动相对分离的影响

保持其他条件不变的情况下，对比不同种类盐

对该mRNA聚集体分离的影响，采用的是较低浓度的

Tris加乙酸钠体系和最优磷酸盐体系，发现在不同体

系下，聚集体的形式是不同的，分离度也是有差别

的。

3.3.3不同流速对分离的影响

在15 mMTris+15 mM乙酸钠 PH=7低盐流动相体

系下，优化分离，从表3数据可以看出，当降低流速

时，分离度更好，也能接近1.5。

3.3.4热处理前后对比

当使用70°高温加热mRNA 5min后，mRNA会变

性，聚集体会转变为单体形式，实验发现，当加热

处理后，聚集体响应明显降低，同时主峰响应明显

增加。

结论

对以上数据分析，结果表明，无论是在常规SEC

分析的磷酸盐体系下，还是较低浓度的Tris缓冲盐

体系，dSEC-7对于大小在1000 nt左右的mRNA样

品聚集体表现出了较好的分离趋势，基本能达到

基线分离，而且在上样量较少的情况下，也能达

到一个很好的响应，原因在于dSEC-7采用了优异

的孔控制技术以及BioTiTM生物惰性硬件。通过该实

验的研究，确定了dSEC-7在分析mRNA分子及其

聚集体场合有很好的实际应用。

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