摘要：本实验根据 GB 5009.185-2016 建立了山楂卷中展青霉素的前处理方法，采用 Cleanert®
PAX 结合高效液相色谱的检测方法，对山楂卷中的展青霉素进行了测定。样品经提取和酶
解处理后，用 Cleanert® PAX 进行净化，Venusil HLP C18(5 µm，4.6 × 250 mm)色谱柱进行
检测，外标法定量。结果表明，当展青霉素加标量为 0.1 mg/kg 时，回收率为 105.6%，能够
满足检测要求。
关键词：山楂卷；展青霉素；Cleanert® PAX；Venusil HLP C18
样品信息
表 1. 展青霉素样品信息
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪。
试剂材料
甲醇、乙腈、乙酸乙酯均为色谱纯；乙酸、乙酸铵为分析纯；
5 mmol/L 乙酸铵溶液：称取 0.38 g 乙酸铵，加水溶解并定容至 1000 mL；
乙酸溶液：取 10 mL 乙酸，加入 250 mL 水中，混匀；展青霉素标准溶液：乙腈溶解；
果胶酶：10000 U/g；
Cleanert® PAX，500 mg/6 mL（P/N：AX5006）。
样品制备
样品提取
称取 1 g 已均质好的山楂卷样品，加入 10 mL 水和 75 µL 果胶酶，涡旋混匀
1 min，室温避光放置过夜后，加入 10 mL 乙酸乙酯，涡旋混合 2 min，6000 r/min
离心 5 min，取上层乙酸乙酯层至 100 mL 鸡心瓶中。剩余水相再加入 10 mL 乙
酸乙酯提取一次，合并两次乙酸乙酯提取液，在 40℃旋蒸至干，以 5 mL 乙酸溶
液溶解残留物，超声 1 min，待净化。
样品净化
将 Cleanert PAX 小柱依次用 6 mL 甲醇，6 mL 水活化平衡，将待净化液全
部转移至小柱上，弃去流出液，再用 6 mL 乙酸铵溶液，6 mL 水淋洗小柱，弃去
流出液并抽干小柱 15 min。加入 8 mL 甲醇洗脱，收集流出液并在洗脱液中加入
20 µL 乙酸，置于 40℃氮吹至剩余 200 ~ 300 µL，用 5%乙腈水溶液定容至 1
mL，涡旋 30 s 溶解残留物，过 0.22 µm 尼龙针式过滤器过滤，待检测。
实验条件
色谱条件
色谱柱：Venusil HLP C18，5 µm，4.6 × 250 mm；
流动相 A：水，B：乙腈；
柱温：40℃；
流速：1.2 mL/min；
进样量：100 µL；
波长：276 nm
梯度条件：见表 1。
表 1. 梯度条件
实验结果与讨论
实验结果
由表 2 可知，采用 Cleanert PAX 结合高效液相色谱的方法检测山楂卷中展
青霉素，加标回收率为 105.6%，能够满足检测要求。由图 1 ~ 图 3 可知，用 Venusil
HLP C18 检测山楂卷的加标样品，分离效果良好。
表 2. 山楂卷展青霉素加标回收实验结果(n=3，添加水平 0.1 mg/kg)
实验讨论
本实验参照国标方法用 PAX 150 mg/6 mL 做山楂制品中的展青霉素，经标
样过柱发现此规格的小柱使用国标方法，仅能吸附 50%的目标物，故加大小柱规
格至 500 mg/6 mL，回收率能够满足检测要求。
本实验采用高效液相色谱检测，由于山楂制品的杂质较多，普通的 C18 色
谱柱对杂质和目标物的分离并不理想，后改用极性嵌合的 HLP C18 色谱柱，发
现分离度有很大改善，目标物能和杂质分离。但国标中山楂制品是用 LC-MS/MS
检测的，所以本报告中的检测方法仅供参考，也可以按照国标的方法使用
LC-MS/MS 检测。
实验谱图
图 1. 0.1 µg/mL 展青霉素标准溶液色谱图
图 2. 山楂卷基质空白色谱图
图 3. 0.1 mg/kg 山楂卷基质加标色谱图
结论
本实验建立了山楂卷中展青霉素的前处理方法，用 Cleanert® PAX 结合高效
液相色谱对加标量为 0.1 mg/kg 的样品进行了测定，加标回收率为 105.6%，RSD
小于 10%，可以满足检测要求，且净化效果良好，方法稳定。说明 Cleanert® PAX
可以用于山楂卷中展青霉素的检测。
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