摘要:本实验根据 GB 23200.92-2016,采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱的方法,在多
反应监测(MRM)模式下建立了动物源性食品中五氯酚钠残留量的测定方法。样品中的五氯
酚钠经异丙醇提取,Cleanert PAX 固相萃取柱净化,Venusil MP C18 色谱柱(3.0 × 50 mm,
3 µm,100 Å)分离,5 mmol/L 乙酸铵水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱,外标法进行定
量。结果表明,五氯酚钠添加量为 2.5 µg/kg 条件下,猪肉基质回收率高于 80%,牛肉基质
回收率高于 70%,能够满足检测要求。
关键词:五氯酚;GB 23200.92-2016;Cleanert PAX;
样品信息
表 1. 五氯酚钠信息
实验部分
仪器、试剂与材料
试剂材料
色谱纯甲醇;分析纯氢氧化钠、分析纯异丙醇;色谱纯乙酸铵;色谱纯甲酸
固相萃取小柱:Cleanert PAX (60 mg/3 mL)
样品制备
溶液配制5%氨水溶液:量取 200 ml 浓氨水(25%),转移入 1000 mL 容量瓶,用水
定容至刻度,混合均匀。
4%甲酸甲醇溶液:量取 10 ml 甲酸,转移入 250 mL 容量瓶,用甲醇定容至
刻度,混合均匀。
2%甲酸甲醇水溶液:取一定量 4%甲酸甲醇溶液与水等体积混合均匀。
样品提取
称取 2 g 均质好的样品置于 50 mL 离心管中,加入 2 mL 纯净水,涡旋混合 ;
加入 400 µL 10 mmol/L NaOH,涡旋混合;加入 4 玻璃珠粒均质子及 5 mL 异丙
醇剧烈震荡 2 min,再次加入 5 mL 异丙醇剧烈震荡 2 min 后再次加入 5 mL 异丙
醇剧并烈震荡 2 min;并于 8000 rpm 条件下离心 5 min,取上清液备用。
样品净化
先将 Cleanert PAX (60 mg/3 mL)小柱分别用 5 mL 甲醇、 5 mL 水活化平衡
后,将上清液过柱,弃去流出液。依次用 5 mL 5%氨水、5 mL 甲醇、5 mL 2%
甲酸的甲醇水溶液淋洗,淋洗液完全通过小柱后,弃去流出液,用真空泵抽干固
相萃取柱 5 min 以上。以 5 mL 4%甲酸的甲醇溶液洗脱,洗脱液在 40℃条件下氮
吹干,用 1 mL 甲醇复溶,溶液以 0.22 µm PTFE-Q 滤膜过滤上样。
基质混合标准工作溶液配制
取高浓度五氯酚钠标准溶液,用空白样品基质溶液稀释成 5 ng/mL 的基质混
合标准工作溶液。
色谱条件
流动相:A 相:5 mmol/L 乙酸铵水溶液;B 相:甲醇;
流速:0.4 mL/min;
柱温:30.0℃;
进样量:20 µL。
梯度洗脱:见表2
表 2. 液相色谱梯度洗脱条件
质谱条件
离子源:电喷雾离子源
扫描方式:负离子扫描
电喷雾电压:-4500 V
雾化气压力:35 psi
气帘气压力:20 psi
辅助气压力:60 psi
离子源温度:550℃
采集方式:多反应监测(MRM)
Q1、Q3均为单位分辨率
质谱参数(见表3)
表 3. 五氯酚的质谱参数
实验结果
表 4. 猪肉基质五氯酚钠加标回收实验结果
表 5. 牛肉基质五氯酚钠加标回收实验结果
图 1. 5 ng/ml 五氯酚钠标准溶液色谱图
图 2. 猪肉基质空白色谱图
图 3. 2.5 µg/kg 猪肉基质加标色谱图
图 4. 5 ng/mL 猪肉基质标准溶液色谱图
图 5. 牛肉基质空白色谱图
图 6. 2.5 µg/kg 牛肉基质加标色谱图
图 7. 5 ng/mL 牛肉基质标准溶液色谱图
结果与讨论
均质后的组织存在遇到提取溶剂紧缩的情况,这给提取造成了难度,因此本
实验先将均质后样本吸水后再加入均质子,剧烈震荡后分步添加提取溶剂,避免
了提取不充分的情况。如果操作者希望能够缩短实验中异丙醇过柱时间,可以尝
试进行减压浓缩后过柱。由于时间的原因本实验未进行减压浓缩过柱测试。
使用有刻度的氮吹管时可参照国标的氮吹定容方式,但请注意校准氮吹管容
积。该方式能够显著缩短干燥周期,而且对回收率的提高可能会有所帮助。
结论
本实验根据 GB 23200.92-2016 建立了动物源食品中五氯酚残留量的
LC-MS/MS 检测方法。五氯酚存在与蛋白高比例结合的问题,本实验通过改变提
取溶剂与 pH 调节剂对于加标量为 2.5 µg/kg 的猪肉样品进行了检测,回收率高于
In te n s ity , c p s80%;加标量为 2.5 µg/kg 的牛肉样品进行了检测,回收率高于 70%;符合检测
标要求,固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好,说明本方法能够用于检测动
物源性食品中的五氯酚残留量。
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