【飞诺美色谱】血浆中 6 种儿茶酚胺类物质的 LC-MS 分析

嗜铬细胞瘤及副神经节瘤 (PPGL) 是一种能够引起内分泌性高血压的少见神经内分泌肿瘤,在 普通高血压门诊中患病率为 0.2% - 0.6%,在儿童高血压患者中为 1.7%。PPGL 患者的主要临床表 现为儿茶酚胺 (catecholamine ,CA) 类物质分泌增多,进一步导致高血压及心、脑、肾血管并发症 和代谢性改变,在经准确诊断后,可通过手术治疗,属于一种可治愈的继发性高血压。
CA 是一类含有儿茶酚和胺基的神经类物质,是人体内重要的神经递质和激素,包括肾上腺素(E)、去甲肾上腺素 (NE) 和多巴胺 (DA)。CA 在儿茶酚 -O- 甲基转移酶 (COMT) 的作用下生成变肾 上腺素类物质(metanephrines,MNs),主要包括甲氧基肾上腺素 (MN)、甲氧基去甲肾上腺素 (NMN) 和 3- 甲氧酪胺 (3-MT)。在《嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗的专家共识 (2020)》中,推荐:诊断 PPGL 的实验室检查首选血浆游离或尿液甲氧基肾上腺素 (MN)、甲氧基去甲肾上腺素 (NMN) 浓 度测定;建议:可同时检测血或尿 NE、E、DA 及其他代谢产物 3-MT 等浓度以帮助诊断。
样品制备
预处理:
取 350 μL 血浆,加入 10 μL 标准品溶液及 10 μL 内标溶液,涡旋震荡 1 min,加入 350 μL 50 mM 乙酸铵溶液,涡旋震荡 1 min,待净化。
固相萃取 (SPE):
前处理耗材:Cleanert PWCX 96 Well Microplates (5 mg/mL) 货号:WC00501-MW
活化:依次使用 200 μL 甲醇,200 μL 25 mM 乙酸铵溶液进行活化。 上样:将预处理的样品全部上样。
淋洗:依次使用 400 μL 25 mM 乙酸铵溶液,400 μL 乙腈进行淋洗。 洗脱:使用 100 μL 5% 甲酸乙腈溶液对孔板两次洗脱。
氮吹复溶:将 2 次洗脱溶液涡旋并在 37℃下氮吹,然后使用 100 μL 初始比例流动相复溶,并 涡旋 1min 后进样检测。
液相条件
色谱柱:Kinetex F5
规格:3.0×100 mm ,2.6 μm 货号:00D-4723-Y0
流动相:A:含甲酸的水溶液
B:含甲酸的甲醇,梯度洗脱 流速:0.4 mL/min
柱温:40℃
质谱条件
电离方式:电喷雾离子源,正离子
检测方式:多反应监测 (MRM)
离子源温度 (TEM):500℃
雾化气 (Gas1):60 psi
辅助气 (Gas2):40 psi
气帘气 (Gurtain Gas):30 psi
电喷雾电压:1500V


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