概述
本实验以1%甲酸水和乙腈为流动相,使用Kinetex C8 (2.1×50mm 2.6μm)色谱柱对福美胂进行测试,出峰 可达要求。
关键词
Kinetex C8;福美胂
化合物信息
实验部分
3.1仪器、试剂与材料
3.1.1主要仪器设备
液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX API 5500+),配 有电喷雾离子源(ESI);
3.1.2试剂材料
实验用水为屈臣氏水;乙腈为色谱纯试剂;甲 酸为分析纯。
3.1.3样品
1. 样品:由客户提供;
2.上机液:精确称取福美胂标品3.0mg于棕色进 样小瓶中,用0.1%甲酸水-乙腈(2:8)定容到 1mL(3.0mg/mL);
3.2仪器检测条件
3.2.1色谱条件
色谱柱:Kinetex C8 2.1×50mm 2.6μm;
P/N:00B-4497-AN
流动相:A:1%甲酸水;
B:乙腈
流 速:0.50 mL/min;
柱 温:40 ℃;
进样量:10μL;
梯度程序见表2:
3.2.2质谱条件
离子源类型:电喷雾离子源(ESI)
扫描方式:多反应监测正离子模式(MRM+)
喷雾针电压:5500 V
离子源温度:550 ℃
加热器(GS1):55 psi
辅助加热气(GS2):55 psi
气帘气(CUR):25 psi
碰撞气(CAD):10 psi
为获得较好的稳定和灵敏度,各化合物监测离 子对的去簇电压(DP)和碰撞电压(CE),目 标化合物定量离子对参数经过系统优化,优化 信息参见表3。
3.3结果
3.4实验谱图
3.5讨论
通过实验发现福美胂在质谱上响应很低,配置 大浓度福美胂时才会有一个比较好的响应。上机配 置液选择时试验了0.1%甲酸水-乙腈(8:2)、纯乙腈、 0.1%甲酸水-乙腈(1:9)、0.1%甲酸水-乙腈(2:8)、 0.1%甲酸水-乙腈(3:7)等条件,发现溶解粉末状样 品时水相大于20%样品不溶解,而有机相占比高上样 会出现溶剂效应,所以选用0.1%甲酸水-乙腈(2:8) 作为溶液上机。
流动相选择时尝试水-乙腈、0.1%甲酸水-乙腈、
0.5%甲酸水乙腈、1%甲酸水-乙腈及2%甲酸水乙腈, 实验发现增加甲酸含量可以改善峰型,但2%甲酸水 会影响福美胂的响应,而1%甲酸水可以改善福美胂 峰型同时保证福美胂有一个很好的响应。
实验尝试了Venusil MP C18、Luna Omega C18、 Kinetex C18 、Kinetex F5、Luna C8及Kinetex C8,由 图(1~6)可知Kinetex C8在同样0.1%甲酸水条件下峰 型最好。之后通过调节甲酸含量,由图(7~10)可 知1%甲酸水可以提供很好的峰型。
以下为调节流动相甲酸含量质谱图
结论
本实验以1%甲酸水和乙腈为流动相,使用Kinetex C8(2.1×50mm 2.6μm)色谱柱对福美胂进行测试,出 峰可达要求。
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