【飞诺美色谱】血浆中Mk-4和Mk-7的测定

概述
在动物体内具有生物活性的是维生素K2,而维生素K1和 维生素K3都要转化为维生素K2才能起作用。三种维生素    K的形式都在肝中转化成维生素K2, 并和胃肠微生物合 成的维生素K2一起被吸收利用。维生素K2是一系列含有    2-甲基-1, 4-萘醌母核及C3位带有数目不等的异戊二烯 结构单元的萜烯侧链化合物的统称,根据萜烯侧链上碳 元素的数目,可分为K2(10) 、 K2(20) 、 K2(35) 、 K2(40)等。 维生素K2(35)则为萜烯侧链上有35个碳元素的维生素K2; 维生素K2(35)亦称为甲萘醌-7,这是根据其萜烯侧链上 有7个异戊二烯侧链命名的。维生素k2包括几种不同的 形式, 人类饮食中最常见的维生素k2形式为甲萘醌 - 4(mk4)和甲萘醌-7(mk7)。
关键词
MK-4; MK-7; Peptide-4-W; Kinetex F5; LC-MS/MS
化合物信息
表1.化合物信息
名称
CAS号
分子量
MK-4
863-61-6
444.6
MK-7
2124-57-4
649.0
实验部分
3.1仪器、试剂与材料
3.1.1主要仪器设备
液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX Triple
QuadTM5500),配有电喷雾离子源(APCI);
孔正压装置(Agela Cleanert M96); 氮吹浓缩仪(Agela Cleanert V96)。
3.1.2试剂材料
96孔板: Peptide-4-W
屈臣氏蒸馏水, 甲醇、甲酸 、 乙醇均为色谱 级。
3.1.3样品基质
EDTA抗凝大牛血浆
3.2样品前处理方法
预处理: 200 µL血浆加入800 µL甲醇涡旋, 10000g/5min 离心取上清,待净化;
活化: 96孔板依次使用 1mL甲醇、1mL水活 化;
上样: 加载预处理后的血浆至活化后孔板; 淋洗: 使用1mL水淋洗孔板;
洗脱:用500 µL乙醇洗脱2次,涡旋混合,待检 测。
3.3仪器检测条件
3.3.1色谱条件
色谱柱: Kinetex F5(3.0×50 mm, 2.6 μm, 100 Å); P/N: 00B-4723-Y0
流动相A相: 0.1%甲酸水溶液;
流动相B相: 0.1%甲酸甲醇溶液; 速: 0.6 mL/min;
温: 40 ℃; 进样量: 15 μL; 梯度程序见表2:
表2. 梯度条件
时间 (min)
流速 (mL/min)
B (%)
0
0.6
20
0.5
0.6
20
1.5
0.6
100
3.8
0.6
100
4.2
0.6
20
3.3.2质谱条件
离子源类型: 电喷雾离子源(APCI+)
扫描方式: 多反应监测正负离子模式(MRM) 喷雾针电压: 5500 V
离子源温度: 500 ℃
加热器(GS1): 60 psi
辅助加热气(GS2): 60 psi 气帘气(CUR): 40 psi
碰撞气(CAD): 10 psi
为获得较好的稳定性和灵敏度,各化合物监测 离子对的去簇电压(DP)和碰撞电压(CE), 目标化合物定量离子对以及内标监测离子对等 参数均需经过系统优化。本案例参数仅供参考 不具备法律效力。
表3. 化合物定性、定量离子和质谱分析参数
3.4结果与讨论
由表4可知,MK-4 、MK-7在外标法模式下相对 标准偏差RSD小于10%可以满足分析需求。
表4. 加标回收实验结果
化合物
外标法相对回收率%
RSD %  ( n=8)
MK-4
120
7.3
MK-7
40
9.5
3.5实验谱图
                                                     图1. 血浆MK-4 5ng/ml加标回收色谱图
添加图片注释,不超过 140 字(可选)
结论
本实验建立了血浆中MK-4、 MK-7的检测方法。


阅读3次
关注
最新动态

相关产品

当前位置: 艾杰尔飞诺美 动态 【飞诺美色谱】血浆中Mk-4和Mk-7的测定

关注

拨打电话

留言咨询