β-酪蛋白主要分为两种, 即A1和A2 β-酪蛋白。这 两种β-酪蛋白由209个氨基酸组成, 分子量在24000左 右, 两者仅体现在第67位氨基酸的不同,A1型在该位 置上结合了一个组氨酸,A2型结合的却是脯氨酸。正是 这个在分子结构上的微小差异,导致了代谢产物的不同。 由于A1与A2 β-酪蛋白在色谱分离上有一定的难度,并 且牛奶样本基质也对目标物造成一定的干扰。
β-酪蛋白; A1和A2; Biozen Intact XB-C8; LC-UV;
高效液相色谱Agilent 1260,二元泵; 3.1.2试剂材料
三氟乙酸 、乙腈为色谱纯;屈臣氏蒸馏水; 3.1.3样品
色谱柱: Biozen Intact XB-C8(4.6×150mm, 3.6μm); P/N:00F-4766-E0;
流动相: A:0.1%三氟乙酸 水; B: 0.1%三氟乙酸
流 速: 0.6mL/min; 柱 温: 55 ℃;
结论经过色谱柱筛选与流动相体系优化,使用Biozen Intact XB-C8在三氟乙酸体系下,β-酪蛋白A1和A2的 分离度可以达到1.36,且A2牛奶样本中的杂质对目标 化合物没有干扰,杂质已分离在前端出峰; 优化流动 相初始比例至有机相34%时,A1和A2的分离度可以达到1.69,但是此时A2中有少量其他形式酪蛋白被分离 出来; 经过质谱鉴定和与客户标准品确认,该标准品 为β-酪蛋白标准品, 除A1A2外还有其它形式, 但 A1A2占多数 。