概述
本实验为自建方法。使用Cleanert PEP-2固相萃取柱净
化技术结合示差的检测方法对来样蛋白调味粉基质中木
糖、果糖、阿拉伯糖及葡萄糖等进行了测试。样品经水
提取,Cleanert PEP-2固相萃取柱净化,Venusil Honey
NH2(4.6×250mm 5μm)液相色谱柱进行检测,采用
外标法定量。结果表明,空白添加水平的相对回收率在
90%~120%,能够满足检测要求。
关键词
木糖;果糖;阿拉伯糖;葡萄糖;Venusil Honey NH2
化合物信息
实验部分
3.1仪器、试剂与材料
3.1.1主要仪器设备
超高效液相色谱仪(Thermo Ultimate 3000),配
有示差检测器;
3.1.2试剂材料
Cleanert PEP-2:150mg 6ml/30pk
Cat:PE1506-2
微孔滤膜:0.22 μm MCE滤膜
实验用水为屈臣氏水;乙腈为色谱纯试剂;乙
酸锌、亚铁氰化钾为分析纯。
3.1.3标准溶液配制
1.标品:由客户提供。
2.标准工作液:称量0.50g各种糖标品于50mL离
心管中,加40mL水配置成浓度为12.5mg/mL标
准工作液。
3.1.4溶液配制
1. 22%乙酸锌:称取11g乙酸锌于50mL容量瓶
中,加1.5mL冰醋酸,用水配置到刻线。
2. 10.6%亚铁氰化钾:称取5.3g亚铁氰化钾于
50mL容量瓶中,用水配置到刻线。
3.2样品前处理方法
称量:称取样品1 g置于15mL刻度离心管中;
提取:加入5mL水,混匀溶解,再加入0.5mL乙
酸锌溶液和0.5mL亚铁氰化钾溶液,涡旋混匀
1min,超声30min,后8000 r/min离心5 min。
(空白用水代替,吸取1mL标准工作液加入5mL
水,混匀后按照提取步骤操作)
活化:Cleanert PEP-2小柱使用前依次用6mL乙
腈、6mL水活化;
收集:上清液全部上样,接收流出液,加0.5mL
水淋洗小柱,同样接收淋洗流出液,负压抽干
小柱,用水定容至6.5mL。
过滤:定容液过0.22μm MCE 水相滤膜,上机待
测。
3.3仪器检测条件
3.3.1色谱条件
色谱柱:Venusil Honey NH2 4.6×250mm
5μm;
CAT No:VN852505-H
流动相:乙腈:水=75:25;
流 速:1.0 mL/min;
柱 温:60 ℃;
进样量:10 μL;
等度洗脱
3.4结果与讨论
3.4.1标准曲线的制备
本 实 验 为 单 点 定 量 。 精 密 吸 取标 准 工 作 液
(12.5mg/mL) 800 μL 于棕色进样小瓶中,加水至1mL
既得浓度为10mg/mL,待上机。
3.4.2方法准确度
本实验选择1.923mg/mL加标,计算回收率结
果,由表2可得,4种糖空白添加浓度的回收率在
90%~120%;本实验色谱图见图1~图6。本案例数据
仅供参考不具备法律效力。
3.4.3讨论
本实验试验了不同固相萃取柱,结果发现C18填
料的小柱无论填料量大小回收均在70%以下,不适合
作为本实验的净化小柱,而PEP小柱回收率在60%~90%
之间,不符合要求。而PEP-2 150mg小柱空白加标回
收率在 90%~120% , 符 合 要 求 。 所 以 选 择 PEP-2
150mg小柱来做为净化柱。
同时实验验证了不同水相滤膜PEFE/L、MCE、
PES、RC及有机相滤膜NY对4种糖的吸附作用,实验
发现除RC滤膜有假阳性反应,其余滤膜均不吸附4种
糖。
3.5实验谱图
图5.样品2-1 RI图
结论
本实验为自建方法。使用Cleanert PEP-2固相萃取
柱净化技术结合示差的检测方法对来样蛋白调味粉基质
中木糖、果糖、阿拉伯糖及葡萄糖等进行了测试。样品
经水提取,Cleanert PEP-2固相萃取柱净化,Venusil
Honey NH2(4.6×250mm 5μm)液相色谱柱进行检测,
采用外标法定量。结果表明,空白添加水平的相对回收
率在90%~120%,能够满足检测要求。
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