溶菌酶是一种天然蛋白质,具有抑菌、消炎和抗病毒等功能。而蛋清中的溶菌酶含量较高,很多商品的溶菌酶都是从蛋清中提取的,广泛应用于医药制剂、食品防腐和生物工程等领域。
根据GB/T 25879-2010,测定鸡蛋蛋清中溶菌酶含量的方法为:分光光度法。
1.试剂配制
氯化钠溶液:称取氯化钠0.9g,溶解于蒸馏水中,定容至100mL。
溶菌酶标准工作液:称取溶菌酶标准品(优级纯,活力在20000U/mg左右),0.5000g,以氯化钠溶液定容至1000mL,得到500μg/mL溶菌酶标准工作液,于4℃密封保存,一周内使用。
2.绘制标准曲线
准备5个25mL容量瓶,采用opus电子瓶口分配器(20mL款)的stepper模式,设置5个分液体积分别为1、2、3、4、5mL,排气泡后进行分液,将此5个体积的溶菌酶标准工作溶液分别加入5个容量瓶中,以氯化钠溶液释至刻度,混匀,用10mm石英比色皿比色,以氯化钠溶液为参比溶液,在波长281nm处依次测定各标准工作液的吸光度,以溶菌酶标准工作液浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线,并求出标准曲线回归方程。
3.试样测定
鸡蛋蛋清用4层纱布过滤,用Miragen电动移液器移取过滤试样1mL,用氯化钠溶液稀释定容至100mL,混匀,避免起泡沫。再用Miragen电动移液器吸取5mL蛋清的氯化钠溶液,1310g离心5min,取上清液,按照绘制标准曲线的操作步骤,在波长281nm处测定试样溶液的吸光度。平行测定三次,取结果的算术平均值,由标准曲线回归方程计算试样溶液中溶菌酶的浓度。
实验室移取几微升到几毫升的液体,一般采用移液器(手动和电动两种)。手动移液器需要手转旋钮调节数值,手指按压和回松进行排液和吸液。Miragen电动移液器,数值靠设定或选定,电机控制活塞运动。而且吸液和排液可分次数且各段体积可调,分液程序可储存,可实现单吸多排、多吸单排等效果,具有步骤少、更稳定、调数快、模式多等诸多优势。
赫施曼opus电子瓶口分配器精度可达万级,一次装液可完成相同或不同体积的连续分液,搭配Miragen电动移液器,非常适合做标准曲线,适用各种需要分液和配制标准曲线的实验室、生产线,应用广泛。
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