【仪电分析】食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定-液相色谱法

【仪电分析】食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定               液相色谱法

苯甲酸、山梨酸和糖精钠是常用的食品添加剂，也是衡量食品卫生质量的重要指标。苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用，糖精钠是合成甜味剂，甜度比蔗糖甜300-500倍。GB2760-2016《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定，超范围或者超限量使用都是违法的。GB5009.28-2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定，有高效液相色谱法和高效气相色谱法，其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。

本方案参考GB 5009.28-2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》中第一法：液相色谱法，该法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定。

一、方法原理

样品经水提取，高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，采用液相色谱分离、紫外检测器检测，外标法定量。

二、主要仪器及试剂

a. 高效液相色谱仪：LC220，配备紫外检测器；

b.自动进样器：AS2000；

c.色谱柱：C18柱，4.6 mm×250 mm，粒径为5 µm；

d.分析天平；

e.涡旋振荡器；

f.离心机；

g.超声波发生器；

h.苯甲酸、山梨酸、糖精钠水溶液混合溶液：ρ=1000mg/L；

i.氨水；

j.亚铁氰化钾；

k.乙酸锌；

l.无水乙醇；

m.正己烷；

n.甲醇：色谱纯；

o.乙酸铵：色谱纯；

p.甲酸：色谱纯。

三、实验方法

3.1 参考色谱条件

3.2 标准系列的制备

3.2.1 苯甲酸、山梨酸和糖精钠（以糖精计）混合标准中间溶液（200mg/L）)：分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液各10.0mL于50mL容量瓶中，用水定容。于4 ℃贮存，保存期为3个月。

3.2.2 苯甲酸、山梨酸和糖精钠（以糖精计）混合标准系列工作溶液：分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液0mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL，用水定容至10mL，配制成质量浓度分别为 0 mg/L、1.00 mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0mg/L、100mg/L和200mg/L的混合标准系列工作溶液。临用现配。

3.3 样品制备

3.3.1 样品准备

取多个预包装的饮料、液态奶等均匀样品直接混合；非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆；固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀；奶酪、黄油、巧克力等采用50 ℃~60 ℃加热熔融，并趁热充分搅拌均匀。取其中的200g装入玻璃容器中，密封，液体试样于4 ℃保存，其他试样于-18 ℃保存。

3.3.2 试样提取

a. 一般性试样

准确称取约2 g（精确到0.001 g）试样于50 mL具塞离心管中，加水约25 mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，将水相转移至50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声5min，于8000r/min离心5 min ，将水相转移到同一50 mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀。取适量上清液过0.22 pm滤膜，待液相色谱测定。

注：碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂。

b. 含胶基的果冻 、糖果等试样

准确称取约2 g（精确到0.001 g）试样于50 mL具塞离心管中，加水约25 mL，涡旋混匀，于70℃水浴加热溶解试样，于50℃水浴超声20 min，之后的操作同2.2.1。

c. 油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样

准确称取约2 g（精确到0.001 g）试样于50 mL具塞离心管中，加正已烷10 mL，于60 ℃水浴加热约5 min，并不时轻摇以溶解脂肪，然后加氨水溶液（1+99）25 mL，乙醇1 mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20 min，冷却至室温后，加亚铁氰化钾溶液2 mL和乙酸锌溶液2 mL,混匀，于8 000 r/min 离心5 min，弃去有机相，水相转移至50 mL容量瓶中，残渣同3.3.2（a）再提取一次后测定。

四、实验结果

4.1 标准工作曲线

苯甲酸、山梨酸和糖精钠的标准工作曲线如图1-图3所示，其中苯甲酸线性回归方程为：y=27240.5x，相关系数r为0.9998。山梨酸线性回归方程为：y=53259.5x，相关系数r为0.9995。糖精钠线性回归方程为：y=17221x，相关系数r为0.9998。

  图1 苯甲酸标准工作曲线

图2 山梨酸标准工作曲线

 图3 糖精钠标准工作曲线

4.2 混合标准溶液图谱

浓度为100mg/L的混合标准溶液的色谱图如图4所示：

图4 混合标准溶液色谱图

4.3 样品色谱图

某气泡饮料的色谱图如图5所示：

图5 气泡饮料样品色谱图

某维生素饮料的色谱图如图6所示：

图6 维生素饮料样品色谱图

4.4 结果计算

公式：

式中：

X——试样中待测组分含量，单位为克每千克（g/kg）；

ρ——由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

V——试样定容体积，单位为毫升（mL）；

m——试样质量，单位为克（g）；

1 000——由mg/kg转换为g/kg的换算因子。

结果保留3位有效数字。

4.5 实际样品测试结果

取某饮料样品，按照样品前处理步骤，对处理好的样品进行上机测定，测试结果未检出。