【仪电分析】雨生红球藻粉中虾青素的测定-液相色谱法

2022/02/17   下载量: 0

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应用领域 农/林/牧/渔
检测样本 其他
检测项目 理化分析>其他
参考标准 GB/T31520-2015 红球藻中虾青素的测定 液相色谱法

虾青素是海洋生物体内主要的类胡萝卜素之一,具有许多重要的生物学功能,可作为维生素A原,抗氧化性强于β -胡萝卜素和维生素E,虾青素能清除体内由紫外线照射产生的自由基、抑制多不饱和脂肪酸的氧化、调节免疫功能改善视力、加速色素形成以及抗肿瘤等。

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【仪电分析】雨生红球藻粉中虾青素的测定-液相色谱法

虾青素是海洋生物体内主要的类胡萝卜素之一,具有许多重要的生物学功能,可作为维生素A抗氧化性强于β -胡萝卜素和维生素E,虾青素能清除体内由紫外线照射产生的自由基、抑制多不饱和脂肪酸的氧化、调节免疫功能改善视力、加速色素形成以及抗肿瘤等。

一、方法原理

用甲醇-二氯甲烷(体积比3:1)的混合溶剂,在恒温水浴振荡器中振荡后低温下离心,重复2-3次,收集上清液,以色谱峰的保留时间定性,外标法定量。

二、主要仪器试剂

a. 高效液相色谱仪LC220

1645071273(1).jpg

 

b. 针式过滤器;

c. 电子天平;

d. 高速冷冻离心机;

e. 水浴恒温振荡器;

f. 虾青素标准品;

g. 甲醇:色谱纯;

h. 二氯甲烷:分析纯。

三、实验方法

3.1 参考色谱条件

色谱柱

C18250mm×4.6mm×5μm

 速

1.0 mL/min

 长

478nm

 温

30

进样量

20μL

流动相

甲醇

3.2 标准溶液配制

a. 准确称取10.0 mg虾青素标准品用甲醇-二氯甲烷体积比为3:1溶剂定容于100 mL的棕色容量瓶中制得100mg/mL虾青素储备液,密封冷藏备用。

b. 6个洁净的1ml容量瓶,预先加入适量的甲醇-二氯甲烷体积比为3:1溶剂,然后分别加入10μL20μL40μL60μL80μL100μL虾青素标准储备液配制成虾青素浓度分别1μg/mL2μg/mL4μg/mL6μg/mL8μg/mL10μg/mL标准系列,参考的色谱条件进样以虾青素的质量浓度为横坐标峰面积为纵坐标绘制线性回归方程,由色谱工作站处理数据得到的回归方程。

3.3 样品预处理

用二次蒸馏水将雨生红球藻粉样品水洗3次后冷冻干燥,称取5 g已除去水分的藻粉于具塞三角瓶中,加入甲醇-二氯甲院(体积比为3:1)的混合溶剂50 mL,同时加10颗玻璃珠,最后将三角瓶外罩褐色塑料薄膜,放入40℃的水浴恒温振荡器中振荡30min,提取液在低温下离心20 min,将上清液转移至另一三角瓶中。重复以上的提取步骤2~3次,直至藻粉中的色素基本提取完全,藻粉沉淀呈土灰色。收集所有的上清液,混合,低温冷藏待测。

四、实验结果

4.1 标准工作曲线

虾青素的标准工作曲线如图1所示:

 

1645071312(1).jpg

 1 虾青素标准工作曲线

4.2 标准样品色谱图

浓度为10mg/L的虾青素标准溶液的色谱图如图2所示:

1645071360(1).jpg

 2 浓度为10mg/L的虾青素标准溶液色谱图

4.3 实际样品测试

取某样品经前处理,测试结果未检出。


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