方案摘要
方案下载应用领域 | 农/林/牧/渔 |
检测样本 | 饲料 |
检测项目 | 营养成分>维生素 |
参考标准 | GB/T 18397-2014《预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法》 |
泛酸又叫维生素B5,是一种水溶性维生素,在饲料工业用作维生素添加剂,提高动物对病原体的抵抗力。还能调节蛋白质、碳水化合物及脂肪的代谢,保持皮肤和黏膜,改善毛发(或羽色)色泽以及预防疾病的发生,特别是对家禽家畜及鱼科类动物生长发育、脂肪的合成和分解,对泛酸的需求是必不可少的。 本方法适用于复合预混料饲料、维生素预混合饲料中泛酸的测定。参考标准GB/T 18397-2014《预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法》。
【仪电分析】预混合饲料中泛酸的测定-高效液相色谱法
泛酸又叫维生素B5,是一种水溶性维生素,在饲料工业用作维生素添加剂,提高动物对病原体的抵抗力。还能调节蛋白质、碳水化合物及脂肪的代谢,保持皮肤和黏膜,改善毛发(或羽色)色泽以及预防疾病的发生,特别是对家禽家畜及鱼科类动物生长发育、脂肪的合成和分解,对泛酸的需求是必不可少的。
本方法适用于复合预混料饲料、维生素预混合饲料中泛酸的测定。参考标准GB/T 18397-2014《预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法》。
一、方法原理
维生素预混料用流动相提取,试液注入高效液相色谱柱,用紫外检测器在200nm处测定,外标法计算泛酸的含量。
二、主要仪器及试剂
a. 高效液相色谱仪:L220,带紫外检测器;
b. 超声波水浴;
c. 自动进样器;
d. 离心机(3000 r/min);
e. 电子天平;
f. 样品筛。
三、实验方法
3.1 色谱参考条件
色谱柱:C18,4.6 mm×250 mm×5μm;
进样量:10 μL;
流动相流速:1.0 mL/min;
柱温:室温;
波长:200 nm;
3.2 流动相配制
将50 mL的乙腈加入到950 mL 0.05%磷酸溶液中混匀。
3.3 泛酸标准工作液配制
将20 mg泛酸钙(泛酸=0.920×泛酸钙)标准物溶于50 mL棕色容量瓶中,用流动相定容,使该标准储备液中泛酸的浓度为368 μg/mL。置4 ℃冰箱保存,可保存期3个月。
分别准确吸取0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL、20 mL于50 mL容量瓶中,用流动相定容至刻度,得到浓度为3.68 μg/mL、7.36 μg/mL、14.72 μg/mL、36.8 μg/mL、73.6μg/mL、147.2 μg/mL的标准泛酸工作液。
3.4 试样溶液的制备
称取维生素混合饲料0.10 g,精确至0.0001 g,置于50 mL棕色容量瓶中,加入20 mL流动相,在超声波提取器中超声提取15 min(中间旋摇一次以防样品附着瓶底),取适量溶液离心后取上清液,过滤,滤液过0.45 μm(或0.20 μm)滤膜,再用流动相稀释5倍,待上机。
测定:取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入高效液相色谱仪,根据保留时间按定性,外标峰面积法定量。
四、实验结果
4.1 泛酸工作曲线
泛酸工作曲线见图1:
图1 泛酸工作曲线
4.2 标样色谱图
浓度为73.6 μg/mL的泛酸标准工作液色谱图见图2:
图2 泛酸标准工作液谱图
4.3 预混料实际样品色谱图
样品色谱图见图3:
图3 样品色谱图
4.4 数据计算
平均峰面积:S=(S1+S2+S3)÷3=(757783.688+774184.813+773599.375)÷3=768522.625
样品溶液中含泛酸浓度:y=0.00017X-1.7579=128.89 μg/mL
0.1 g样品中含泛酸的质量:m=y×5×20=12.889 mg
该饲料中泛酸含量:w=128.89 g/kg
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