方案摘要
方案下载| 应用领域 | 农/林/牧/渔 |
| 检测样本 | 畜牧 |
| 检测项目 | 动物疫病>牛病, 猪病, 其他 |
| 参考标准 | GB/T 18935-2018 |
用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫O型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体定量检测。
口蹄疫液相阻断ELISA实验
用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫O型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体定量检测。
一、实验仪器与耗材：
1、 24道多功能移液工作站（十二板位）
2、 FDT-300A-1-TSF 30Oμl吸头一盒
3、 ICF-PS-96U-S 96孔U型底孔板1块
4、 96孔酶标板1块
5、 4道储液槽1个
6、 废弃盒1个
7、 血清样本
8、 PBST溶液
9、 病毒抗原
2、 实验步骤
96孔酶标板检测20份样品布局图
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
A | S1 1:16 | S2 | S3 | S4 | S5 | S6 | S7 | S8 | S9 | S10 | +1:32 | -1:4 |
B | 1:32 | 1:64 | 1:8 | |||||||||
C | 1:64 | 1:128 | ||||||||||
D | 1:128 | 1:256 | ||||||||||
E | S11 1:16 | S12 | S13 | S14 | S15 | S16 | S17 | S18 | S19 | S20 | 1:512 | 病毒抗原对照 |
F | 1:32 | 1:1024 | ||||||||||
G | 1:64 | 1:2048 | ||||||||||
H | 1:128 | 1:4096 |
第一步，分装PBST溶液
1、 用24道多功能移液工作站取10个吸头，将75μl PBST溶液分两次加入酶标板的A1-A10、E1-E10，将吸头退至废弃盒。
2、 取1个吸头将50μl PBST溶液加入A11、E11、A12和B12，将吸头退至废弃盒。
3、 取11个吸头加50μl PBST 溶液加入B1-H11。将吸头退至废弃盒。
第二步，血清样本稀释
1、 取检血清在第1~10列，从1:4(即A1~A10孔75ul PBST加25μl被检血清)稀释至1:512;
第三步，阳性对照稀释
1、在第11列稀释阳性对照血清，从1:2(即A11孔50μl PBST加50μl阳性对照血清)稀释至1:256;
第四步，阴性对照稀释
1、 A12~B12孔稀释阴性对照血清，从1:2稀释至1:4;
第五步，分装病毒抗原
1、 将病毒抗原用PBST稀释至工作浓度，以50u /孔的量加入到被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内。
2、 E12~H12孔为病毒抗原对照孔，仅加入100m/孔稀释至工作浓度的病毒抗原。
第六步：
将抗原抗体混合液从U型反应板上按次序转移至巴包被口蹄疫O型免抗的ELISA板上，504L/孔，封板，37℃温育60分钟。
第七步：
用PBST连续洗板3~5次，拍千，按50y/孔加口蹄疫O型豚鼠抗体工作液(红色)，封板，37℃温育30分钟。
第八步：
同上洗板3~5次，拍干，按50u孔加免抗豚鼠IgG-HRP工作液(蓝色)，封板，37℃温有30分钟。
第九步：
同上洗板3~5次，拍干。将TMB底物A溶液和B溶液以1:1比例混匀，加入混匀后的底物溶液50u/孔，置37℃显色15分钟。
第十步：
显色反应结束后，加终止液504/孔，终止反应，在酶标仅上读取D450nm值。
文献贡献者
牙膏中微生物检验样品的采集、保存及供检样品制备
关于自动菌落计数仪在牙膏中菌落总数检验中的应用
fluidot自动移液工作站在食品维生素B12测定中的应用
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