参考国标:农业部2086号公告-5-2014 饲料中卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇的测定 液相色谱-串联质谱法
前处理方法:Oasis HLB 200mg/6mL (P/N:WAT106202)
1、 样品提取 — 参考国标
准确称取饲料2g(预混合饲料1g)于50mL离心管中。加入0.1%甲酸-乙腈溶液10mL,涡旋1min,40度超声10min,9000rpm离心15min,收集上清液。残渣用0.1%甲酸-乙腈溶液10mL重复提取一次并合并提取液。精确量取5mL上述提取液在60度下氮吹至2mL,然后用4mL 0.1moL/L磷酸二氢钾充分溶解残余物,待净化。
2、 样品净化 HLB (200mL/6CC)
活化、平衡:3mL甲醇、3mL水
上样:将上述备用液过柱
淋洗:3mL 0.02mol/L 盐酸、3mL 5%甲醇
洗脱:5mL 甲醇
收集洗脱液后氮气吹干,用1mL 20%乙腈溶解后果0.22um 滤膜待上机
色谱质谱条件
色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18(150 mm,2.1 mm,1.7μm) (P/N:186002353)
柱温:30℃;
进样量:10 μL
流动相及参考梯度洗脱程序见下表。
时间(min) | 流速(mL/min) | 0.1%甲酸溶液(%) | 乙腈(%) |
0 | 0.3 | 95 | 5 |
1.0 | 0.3 | 95 | 5 |
2.0 | 0.3 | 60 | 40 |
3.0 | 0.3 | 60 | 40 |
3.1 | 0.3 | 95 | 90 |
质谱采用ESI+检测方式,多反应监测(MRM)。毛细管电压为3.4 Kv; 源温度为150℃;脱溶剂气温度为550℃;脱溶剂气流速为800L/hr;锥孔气流速为20 L/hr。脱溶剂气、锥孔气、均为高纯氮气。碰撞气为氩气。
定性离子对、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见下表。
被测物名称 | 定性离子对(m/z) | 定量离子对(m/z) | 锥孔电压(V) | 碰撞能量(eV) |
喹乙醇 | 264.2>212.3 | 264.2>212.2 | 16 | 15 |
264.2>177.1 | 20 |
饲料空白样品与喹乙醇标准品对比谱图
液相方法分析喹乙醇代谢物喹噁啉-2-羧酸(QCA)、3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)
参考国标:农业部781号公告-3-2006 动物源食品中3-甲基喹噁啉-2-羧酸和喹噁啉-2-羧酸残留量的测定 高效液相色谱法
前处理方法:使用Waters Oasis MAX 60mg/3mL (P/N:186001884)参考国标步骤
1、 样品提取 — 参考国标
称取肌肉样品5g于离心管中,加入8mL偏磷酸甲醇溶液,涡旋2min,在25度下6000rpm离心15min,取出上清液。然后重复提取一遍后合并两次上清液。向上清液中加入8mL乙酸乙酯,涡旋1min,4000rpm离心10min,取上层。再重复提取一遍后合并两次上清液。有机相中,加磷酸盐缓冲液6mL,涡旋1min,放置10min,使下层清晰,收集水相。然后再重复提取后合并,待净化。
2、样品净化 (MAX 60mg/3CC)
活化、平衡:3mL甲醇、3mL水
上样:备用液过柱
淋洗:3mL 0.05mol/L 氢氧化钠、3mL甲醇
洗脱:3mL 2%甲酸甲醇
收集洗脱液后氮气吹干,用500uL甲醇溶解后过0.45μm 滤膜待上机
仪器: Waters Alliance e2695
仪器方法:
流动相:1%甲酸水溶液+甲醇=60:40
色谱柱:XBrige C18 250mm×4.6mm,粒径5μm (P/N:186003117)
流速:1 mL
检测器:2998
紫外波长:320nm
进样量:20μL
柱温:30℃
3-甲基喹噁啉-2-羧酸和喹噁啉-2-羧酸分离图谱
来源于:沃特世科技(上海)有限公司(Waters)
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