2020版《中国药典》 板蓝根颗粒中鸟苷、尿苷、腺苷的测定

2021/06/23   下载量： 1 次

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应用领域 制药
检测样本 中药配方颗粒
检测项目 限度检查
参考标准 2020版《中国药典》

板蓝根颗粒样品基质比较复杂，按照20版药典方法测定含蔗糖和不含蔗糖两种板蓝根颗粒样品时，会发现柱寿命短，尿苷理论塔板数较低不易达到药典要求，能明显看到第一针和第二针存在理论塔板数差异，不稳定等问题。 为此，大曹技术中心尝试对柱温、流速、梯度条件进行微调，最终能够得到良好的分离结果。

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2020版药典 板蓝根颗粒中鸟苷、尿苷、腺苷的测定

 

板蓝根颗粒样品基质比较复杂，按照20版药典方法测定含蔗糖和不含蔗糖两种板蓝根颗粒样品时，会发现柱寿命短，尿苷理论塔板数较低不易达到药典要求，能明显看到第一针和第二针存在理论塔板数差异，不稳定等问题。

 

为此，大曹技术中心尝试对柱温、流速、梯度条件进行微调，最终能够得到良好的分离结果。

 

2020版药典方法

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由于药典条件中梯度初始比例只有3%，为保证色谱柱的稳定使用，我们选择了能够在纯水系流动相中使用的CAPCELL PAK C18 AQ S3色谱柱进行分析。

 

2020版药典方法测定结果

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图1 含蔗糖样品分析色谱图

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图2 不含蔗糖样品分析色谱图

 

尿苷能够达到近10min保留时间，样品中尿苷理论塔板数分别为23440和23028，均满足药典要求的10000以上。

 

对于含蔗糖样品能够与基质基本分离，但在不含蔗糖样品中鸟苷附近存在基质干扰。

 

因此，我们尝试对柱温、流速、梯度进行微调，能够得到良好的分离结果。

 

温度调节

 

分别使用35、30（药典条件）、27、25℃进行分析比较，发现鸟苷出峰位置与前后杂质出现峰序变化，其中35℃时与后面杂质分离较好，与前面小杂质峰未得到基线分离。

 

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图3 不同柱温下的对比结果

 

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图4 35℃柱温下单标对比结果

 

流速调节

 

在35℃柱温下，我们尝试将流速由0.8ml/min调整至0.7ml/min后，能够达到鸟苷前后杂质能够得到分离，分离度分别为1.658和2.076。尿苷同样能够与其后杂质良好分离，分离度1.897，理论塔板数22137，满足药典大于10000的要求。

 

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图5 35℃柱温下，流速由0.8ml/min调整至0.7ml/min后对比结果

 

梯度条件调节

 

在35℃柱温下，对梯度条件进行微调，将20min处有机相比例分别设定为8%、10%（药典条件）、12%进行比较，其中在12%变化时，鸟苷前后杂质能够得到分离，分离度分别为1.652和2.009，同时尿苷与后面杂质分离度也能够达到2.005，理论塔板数21176，符合药典要求。

 

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图6 梯度调节对比结果

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图7 梯度调节后局部放大图

 

HPLC Conditions

色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6mm i.d.×250mm

流动相：A:水  B:甲醇

           B% 3%(0min)-> 3%(3min)->12%(20min)->70%（40min)-

>3%（40.1min）->3%（50min）

流  速：800 µL / min

温  度：35°C

检  测：UV 254nm

进样量：5 µL

样  品：对照品：尿苷20µg/mL、鸟苷20µg/mL、腺苷25µg/mL （5%甲醇溶

解）样品：取1.4g样品，加入5%甲醇至10mL，超声5min溶解后，

10000rpm/min离心5min后，过0.22µm滤膜

 

综上所述，对于板蓝根颗粒样品的分析，可使用CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6mm i.d.×250mm色谱柱完成，尿苷的理论塔板数能够达到药典要求2倍以上，分离良好。本实验共进样30针以上，未见理论塔板数出现明显变化，稳定性良好。

此外，颗粒剂实际样品的成分复杂，特别是不含蔗糖样品中含有糊精、淀粉等不溶性辅料较多，建议在超声溶解后先进行离心后再过滤，或多次过滤直至溶液完全澄清（0.22µm滤膜），以免微量的不溶物堵塞色谱柱筛板，造成柱效的较快下降。同时色谱柱需定期使用高比例有机相进行冲洗。

同时，也由于中成药成分复杂，部分基质受到流动相条件影响大，在不同仪器系统上可能出现分离不同的情况（本实验室使用岛津20A二元高压泵系统），建议客户可根据仪器上的实际分离情况，进行梯度或柱温的微调，以获得更好分离结果。

 


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文献贡献者

三耀精细化工品销售（北京）有限公司
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