《化妆品安全技术规范（2015年版）》修订新增 —海克替啶的质谱确证

《化妆品安全技术规范（2015年版）》修订新增 —海克替啶的质谱确证

海克替啶的质谱结果确证方法为2015版《化妆品安全技术规范》中新添加的防腐剂检测方法（4.5），该项目将自2021年5月1日起正式开始实施。

海克替啶

使用色谱柱：CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6 mm i.d.×100 mm

1.标准品分析结果

《技术规范》中要求使用2.7 μm，4.6 mm i.d.×100 mm规格色谱柱，在0.45 mL/min流速下进行分析，我们按照该方法，对海克替啶标准品进行分析，结果下图所示。

结果谱图：

HPLC Conditions ：

色谱柱：CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6 mm i.d. × 100 mm

流动相：

 A：5 mmol/L 乙酸铵-水溶液  B：5 mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液

B% 5% (0 min) -> 5% (1 min) -> 60% (3 min) -> 95% (6 min) -> 95% (12 min) -> 5% (12.1 min) -> 5% (18 min)

流速：0.45 mL/min（最大压力15.18MPa）

温度：30 °C

检测：AB SCEIX QTRAP 5500；ESI；Positive；喷雾电压5500 V，离子源温度500 ℃，

浓度：20 ng/mL（溶剂甲醇）

进样量：2 µL

结果中，海克替啶具有良好的保留和峰形，其在液质检测中响应值高，基线噪声小，但容易残留，进样分析时需要降低样品浓度。另外样品溶剂影响质谱响应，使用有机试剂更有利于得到高的响应值和好的峰形。

根据信噪比计算定量限（S/N=10）为1.95 ng/mL，检出限（S/N=3）为0.58 ng/mL。

2.加标样品测定结果

我们将化妆水按照《技术规范》中样品处理方法进行处理后，未检出含有海克替啶。

由于样品中未检测出海克替啶，我们在样品中加入标准溶液后进行分析，结果如下图所示。

HPLC Conditions ：

色谱柱：CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6 mm i.d. × 100 mm

流动相：

A：5 mmol/L 乙酸铵-水溶液  B：5 mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液

B% 5% (0 min) -> 5% (1 min) -> 60% (3 min) -> 95% (6 min) -> 95% (12 min) -> 5% (12.1 min) -> 5% (18 min)

流速：0.45 mL/min

温度：30 °C

检测：AB SCEIX QTRAP 5500；ESI；Positive；喷雾电压5500 V，离子源温度500 ℃，

浓度：10 ng/mL（溶剂甲醇）

进样量：2 µL

加标样品处理：称取1.0g化妆水置于10mL具塞比色管中，加入100µL 1µg/mL标准溶液，加入8mL甲醇，涡旋30s后超声20min，用甲醇定容至10mL。混匀，取少量溶液10000 r/min高速离心5min，过0.22μm有机相滤膜，待测。

使用色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d.×100 mm

1.标准品分析结果

考虑《技术规范》中使用色谱柱为一般液相规格（内径4.6 mm），我们也使用了对应的质谱规格色谱柱（内径2.0 mm）作为补充分析，将色谱柱规格调整为2.0 mm i.d.×100 mm，流速则调整为0.4 mL/min，得到标准品分析谱图如下图所示。

结果谱图：

HPLC Conditions ：

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d. × 100 mm

流动相：

A：5 mmol/L 乙酸铵-水溶液   B：5 mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液

B% 5% (0 min) -> 5% (1 min) -> 60% (3 min) -> 95% (6 min) -> 95% (12 min) -> 5% (12.1 min) -> 5% (18 min)

流速：0.4 mL/min（最大压力15.59MPa）

温度：30 °C

检测：AB SCEIX QTRAP 5500；ESI；Positive；喷雾电压5500 V，离子源温度500 ℃，

浓度：20 ng/mL（溶剂甲醇）

进样量：2 µL

结果表示，使用CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d.×100 mm色谱柱，同样可以得到良好峰形。

根据信噪比计算定量限（S/N=10）为1.41 ng/mL，检出限（S/N=3）为0.42 ng/mL。

2. 加标样品测定结果

我们也在该色谱柱及上述实验条件下对加标样品溶液进行了分析，结果下图所示：

结果谱图：

HPLC Conditions ：

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d. × 100 mm

流动相：

A：5 mmol/L 乙酸铵-水溶液       B：5 mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液

B% 5% (0 min) -> 5% (1 min) -> 60% (3 min) -> 95% (6 min) -> 95% (12 min) -> 5% (12.1 min) -> 5% (18 min)

流  速：0.4 mL/min

温  度：30 °C

检  测：AB SCEIX QTRAP 5500；ESI；Positive；喷雾电压5500 V，离子源温度500 ℃，

浓  度：10 ng/mL（溶剂甲醇）

进样量：2 µL

加标样品处理：称取1.0g化妆水置于10mL具塞比色管中，加入100µL 1µg/mL标准溶液，加入8mL甲醇，涡旋30s后超声20min，用甲醇定容至10mL。混匀，取少量溶液10000 r/min高速离心5min，过0.22μm有机相滤膜，待测。

使用色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d.×100 mm

（调整梯度条件）

由于海克替啶在反相中具有良好的保留，我们也尝试调整梯度条件以缩短分析时间，梯度调整后，得到标准品和加标样品的分析谱图如下面两个谱图所示（上图为标准品，下图为加标样品）。海克替啶的保留时间由8.82 min缩短到6.27 min，可在10min内完成分析。

根据信噪比计算定量限（S/N=10）为2.62 ng/mL，检出限（S/N=3）为0.79 ng/mL。

结果谱图：

HPLC Conditions ：

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d. × 100 mm

流动相：

A：5 mmol/L 乙酸铵-水溶液  B：5 mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液

B% 20% (0 min) -> 20% (1 min) -> 95% (2 min) -> 95% (8 min) -> 20% (8.1 min) -> 20% (10 min)

流速：0.4 mL/min

温度：30 °C

检测：AB SCEIX QTRAP 5500；ESI；Positive；喷雾电压5500 V，离子源温度500 ℃，

浓度：标准溶液：20 ng/mL；加标样品溶液：10 ng/mL（溶剂甲醇）

进样量：2 µL

加标样品处理：称取1.0g化妆水置于10mL具塞比色管中，加入100µL 1µg/mL标准溶液，加入8mL甲醇，涡旋30s后超声20min，用甲醇定容至10mL。混匀，取少量溶液10000 r/min高速离心5min，过0.22μm有机相滤膜，待测。

综上所述，按照《技术规范》中分析方法，使用CAPCELL PAK系列色谱柱CORE C18 S2.7; 4.6 mm i.d.×100 mm和C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d.×100 mm色谱柱，均可以得到对海克替啶的良好分析结果。在C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d.×100 mm色谱柱上，调整梯度后可以缩短整体分析时间。