方案摘要
方案下载| 应用领域 | 生物产业 |
| 检测样本 | 其他 |
| 检测项目 | |
| 参考标准 | DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此DNA克隆又称分子克隆，基因操作或重组 |
实验方法原理: 主要原理是通过电击法或CaCl2、RbCl(KCl)等化学试剂处理，使细胞膜的通透性发生暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。 因RbCl法制备的感受态细胞转化效率较高，本实验操作以此为例说明。
高效感受态细胞可用于质粒的转化。
DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此DNA克隆又称分子克隆，基因操作或重组
实验方法原理:
主要原理是通过电击法或CaCl2、RbCl(KCl)等化学试剂处理，使细胞膜的通透性发生暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。
因RbCl法制备的感受态细胞转化效率较高，本实验操作以此为例说明。
实验材料: 细胞样品
试剂\试剂盒: MnCl2 HEPES CaCl2 SOB 培养基 SOC液体培养基 液氮
仪器\耗材: 水浴锅 三角瓶 玻璃瓶 冷冻离心机 滤膜 离心管 称量天平
实验步骤:
一、LB培养基配制（固体培养基加2%琼脂粉）
酵母粉Yeast Extract 5g
蛋白胨Peptone/g 10g
NaCl 10g
水 1000ml
二、TFBI溶液配制
RbCl(氯化铷) 5 g
1 M KAc(醋酸钾) 12.3 ml
1 M CaCl2(氯化钙) 4.1 ml
1 M MnCl2(氯化锰，粉色) 20.5 ml
glycerol(甘油) 61.5g
0.1 M HAc(醋酸) 8 ml 调节pH至5.8
超纯水 补足至410ml
注：配制完成后用0.22μm滤膜过滤除菌。
文献贡献者
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