真菌酶定仪

[size=18px][b][font=宋体] 真菌毒素是真菌产生的次生代谢产物，是生物毒素的一类，具有较高的生物毒性，如致癌、致畸和肝肾毒性等。早在[/font]11[font=宋体]世纪欧洲圣像画中就有关于真菌毒素引起中毒的描述，[/font]1960[font=宋体]年英国[/font]10[font=宋体]万多火鸡因食用被黄曲霉毒素污染的饲料而死亡的事件，真菌毒素才被大家重新认识。[/font][font=宋体] 因其具有较高的生物毒性，如摄取一定量被真菌毒素污染的食品会对人民群众的身体健康造成极大的危害。同时，真菌毒素超标也是限制我国农产品出口的极大的障碍。近年来，真菌毒素导致的食品安全问题受到了国内和国际相关组织的高度关注，其对食品的污染也被世界卫生组织列为食源性疾病的重要来源，受污染的食品也会随着人畜食物链的演进影响到环境安全。[/font][font=宋体] 植物源性食品，如大米、小麦粉、植物油、蔬菜、水果等，均是人们日常生活必备的食物来源，且是主要来源，同时这些植物源性食品中有很大一部分容易受到真菌毒素的污染，如小麦粉容易受到黄曲霉毒素[/font]B1[font=宋体]、赭曲霉毒素[/font]A[font=宋体]、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇等的污染，且这种污染是我们用肉眼不可区分的，且一种食物可能会受到多种真菌毒素的污染。同时，食品中真菌毒素的限量标准也在不断降低。而目前植物源性食品中真菌毒素的检测方法多为针对某一种或某一类真菌毒素的检测，且多以液相色谱[/font]-[font=宋体]荧光检测器检测为主。[/font][font=宋体][b][font=宋体] 为确保植物源性食品的安全，近年来世界各国聚焦威胁植物源性食品安全的主要风险来源，不断建立相关限量及检验检测技术标准，相继开展风险评估工作，当然，对于真菌毒素的研究也在其中。[/font][font=宋体] 目前研究显示，对于植物源性食品主要涉及的真菌毒素种类为黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素[/font]A[font=宋体]、伏马毒素、[/font]T-2[font=宋体]毒素等。相关限量标准也一直备受各国关注，对于限量标准的制定和修订也一直没有间断。我国在二十世纪八十年代初制定了食品中黄曲霉毒素[/font]B1[font=宋体]的限量要求，后陆续对黄曲霉毒素[/font]M1[font=宋体]、展青霉素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇制定了限量要求，到[/font]2005[font=宋体]年，整合形成[/font]GB 2761-2005[font=宋体]《食品安全国家标准[/font][font=宋体]食品中真菌毒素限量》标准，并于[/font]2011[font=宋体]年和[/font]2017[font=宋体]年分别进行了修订，依据公众健康风险和膳食暴露水平对部分食品类别的部分毒素的限量进行了调整，但伏马毒素和[/font]T-2[font=宋体]毒素尚未规定限量标准，国际上除苏联规定[/font]T-2[font=宋体]毒素在粮食中的限量外，其他国家未查询到相关限量要求。[/font][/b][/font][/b][font=宋体][b][font=宋体] [b]目前，真菌毒素的检测技术主要有免疫分析法、仪器分析法和薄层色谱法。免疫分析法主要有连接酶吸附法、胶体金染色法和同位素放射法，主要是利用生物体中的抗原细胞和抗体细胞，在真菌毒素污染后两者的反应发生变化，导致含量变化，进而通过标记抗原或抗体，通过标记物的变化判断毒素的种类与数量。仪器分析法主要有经典仪器法和新型仪器法，经典仪器法目前主要采用高效液相色谱法和高效液相色谱-串联质谱法，不同种类的真菌毒素通过液相色谱柱进行分离，根据不同毒素的性质差异选择不同的检测方式；新型仪器法主要有红外线光谱检测技术、高光谱成像检测技术和电子鼻检测技术。[/b][/font][/b][/font][/size]

粮食真菌毒素快速检测仪可以检测多种真菌毒素，包括但不限于黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素、T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酸等。这些毒素是粮食中常见的污染物，对粮食安全和人类健康构成严重威胁。粮食真菌毒素快速检测仪的使用，使得粮食收购、储藏、加工等现场可以快速准确地检测样品中真菌毒素的含量，为保障粮食安全提供了有效的技术支持。　　同时，这种检测仪不仅限于粮食的检测，还可以用于饲料及其原料、食用油脂、牛奶及其制品中的真菌毒素检测。它的操作简便，通常采用统一的乙醇水提取方法，一次提取就可以检测多种毒素项目，而且配备的热敏打印机能够自动打印检测结果，使得检测过程更为便捷高效。　　请注意，虽然粮食真菌毒素快速检测仪具有诸多优点，但在使用时仍需遵循相关操作规程，确保检测结果的准确性和可靠性。此外，对于涉及重大食品安全问题的疑虑，建议将样本送至专业实验室进行进一步的确认和详细分析。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404291015293617_3385_4214615_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

真菌毒素无处不在 真菌毒素的检测方法1 生物鉴定法生物鉴定法利用真菌毒素能够影响微生物、家禽、水生生物等的细胞代谢过程来鉴定真菌毒素的存在，根据对生物体产生的病变、异常或死亡等判定真菌毒素的危害，该方法对样品的纯度要求较低，该方法主要用于定性分析，专一性较差，灵敏度较低，一般只是作为其他分析方法的佐证。2 化学分析方法化学分析方法检测真菌毒素主要包括以下步骤：提取、脱脂、净化、分离和鉴定。早期常用的化学分析方法有薄层层析法（Thin Layer Chromatography, TLC）和柱层层析法（ColumnChromatography,CC）。在20世纪80年代，我国将TLC作为食品及饲料中黄曲霉毒素的标准测定方法（GB/T8381-1987），将样品经提取、净化和浓缩处理后，在薄层层析板上分离后，利用黄曲霉毒素在紫外照射下可发荧光的特性进行检测。张华报道的薄层层析法检测检测霉菌毒素的灵敏度为5μg/kg，方法的结果准确，重现性好，回收率为 85%-100%。用薄层层析方法己分离出黄曲霉毒素、杂色曲霉素、青霉酸和构巢曲霉素等。柱层层析在真菌毒素样品前处理过程中得到了广泛的应用，柱层层折常用的吸附剂有氧化铝、活性炭、硅胶、镁等，将吸附剂填充到管中形成固定相，将样品提取液上柱，用流动相洗脱，利用样品中不同物质在固定相和流动相中分配系数的不同，实现样品中不同物质的分离，进而进行检测。利用亲和力不同的溶剂和不同固定相的组合可以形成不同分离能力的层析柱。基于吸附剂进行前处理的柱层析分离技术对靶标物的选择性不强，近年来，基于免疫亲和层析技术的样品前处理在真菌毒素提取中应用逐渐广泛。免疫亲和柱是将真菌毒素特异性抗体通过一定方式偶联固定在载体基质上，装柱形成微柱，用于样品前处理。其工作原理是样品溶液中的真菌毒素在流经亲和柱时，载体基质上的抗体特异性的捕获样品溶液中的真菌毒素，使真菌毒素得到净化和富集，待上样完成后用高浓度的甲醇、乙腈等溶液洗脱，将真菌毒素释放出来，得到的洗脱液用于检测。3 仪器分析法仪器分析方法是对样品进行一定的提取、净化处理后，借助检测仪器设备对待测靶标物进定性、定量分析的技术。在真菌毒素的检测分析中，常用的方法有高效液相色谱法（HighPerformance Liquid Chromatography, HPLC）、超高效液相色谱法（Ultra HPLC，UHPLC）、高效液相色谱法与质谱联用方法（HPLC-tandem mass Spectrometry， HPLC-MS/MS）、气相色谱与质谱联用法、高效液相毛细管电泳方法等。HPLC 方法是 20 世纪 60 年代末在气相色谱基础上发展起来的一种以液体为流动相的新型谱技术，在真菌毒素的检测中常采用反向色谱法。近年来，在 HPLC 方法的基础上发展起来的UHPLC 和 HPLC-MS/MS 方法比 HPLC 方法具有更高的检测灵敏度和检测通量。基于HPLC 的方法广泛的被国内外实验室和检测机构作为真菌毒素确证性检测方法。我国食品安全国家标准 GB541337-2010 中规定免疫亲和层析净化液相色谱-串联质谱法和免疫亲和层析净化高效液相色谱法分别作为乳和乳制品中 AFM1测定方法。HPLC 方法具有灵敏度高、测定结果准确可靠、特异性好的特点，基于免疫亲和柱前处理的HPLC方法与化学分析方法和生物鉴定法相比，检测时间缩短，对复杂样品的处理能力更强。但是仪器分析方法也有其缺陷，需要使用大量的有机溶剂，依赖大型精密仪器，检测成本高，需要专业的操作人员，不能满足现场快速筛查的需求。4 免疫分析方法免疫分析方法起始于20世纪50 年代，继 60 年代竞争分析原理提出后取得了巨大的进步，成为生物分析的重要手段之一。免疫分析方法从本质上说属于一种特殊形式的试剂分析法，将抗体作为核心分析试剂，基于抗体与抗原的特异性结合反应，对待测靶标物，包括小分子化合物、大分子的酶、蛋白质等，进行定性和定量分析。抗体和抗原反应的典型特点是抗体能特异性识别抗原，并发生结合反应，这种反应是可逆的，抗体与抗原的专一性比一般分析试剂间专一性强。免疫分析技术已广泛的应用于临床分析检测、食品安全检测、环境污染检测领域。免疫分析技术最早出现的是放射免疫分析，由 Berson和 Yallow首次使用，该方法的灵敏度高、特异性好，但是其最大的缺点是分析过程引入放射性核素，对操作人员和环境造成危害和污染。4.1 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA）是在免疫酶技术基础上发展起来的免疫分析方法，于 1972 年由 Engvall 首次用碱性磷酸酯酶标记免疫球蛋白用于 IgG 的测定。现已广泛的应用于分析检测领域，检测对象包括疾病诊断中的大分子检测，食品安全检测中的小分子污染物检测。ELISA 方法的原理是将抗原或抗体与酶标记后形成酶标抗原或酶标抗体，既保持抗原、抗体的免疫活性，又具有酶活性，将待测物与酶标记抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面的抗体或抗原反应，洗涤去除未反应结合的物质，最后根据固相载体上酶的量与待测靶标物的对应比例关系进行定量分析。该方法根据反应模式的不同可分为夹心 ELISA 方法和竞争ELISA 方法，夹心 ELISA 方法主要用于检测大分子化合物，竞争 ELISA 方法主要用于检测小分子化合物。真菌毒素属于小分子物质，由于只有一个抗体结合位点，因此在真菌毒素的ELISA检测中常采用竞争分析模式。Wang等人建立了基于多克隆抗体检测AFM1的ELISA快速分析方法，对AFM1和 AFB1的检测灵敏度（IC50值）为分别为 0.014 和 0.02 ng/mL。Zhang等人研制了针对 OTA 的单克隆抗体，并用该抗体建立了间接竞争ELISA 方法测定谷物中的 OTA，方法的检出限为 0.15 ng/mL，灵敏度为 1.7ng/mL，检测范围为 0.55-6.75 ng/mL。Burmistrova 等人建立的基于单克隆抗体的 ELISA 方法在 ZEA 的检测中，检出限为 0.1 ng/mL，灵敏度为。4.2 免疫亲和方法免疫亲和方法主要用于样品的前处理过程中，主要利用抗体对待测物的专一识别特性，对待测物进行净化和浓缩，能够有效的去除样品基质干扰，提高检测灵敏度和准确性。基于免疫亲和柱的色谱分离方法被我国国家标准和国际标准定为真菌毒素检测的标准方法。免疫亲和柱常与其他检测方法联用，Li 等建立了基于免疫亲和柱的 ELISA 方法检测农产品复杂基质中的 OTA，结果表明在 OTA 添加样品检测中，经过免疫亲和柱处理后的 ELISA 检测回收率明显较未经亲和柱处理的方法回收率高。免疫亲和柱不仅可以用于样品前处理，还可直接在亲和柱上进一步反应进行定性或定量分析。Yu 等人基于免疫竞争反应原理建立了在免疫亲和柱上进行可视化检测 AFM1的方法，在样品上样完成后，再从亲和柱底端加入辣根过氧化酶（HRP）标记的 AFM1，洗脱后加入酶底物，进行显色，显色深浅与样品中 AFM1浓度成反比，根据显色深浅判别 AFM1的含量，该方法对 AFM1的灵敏度为 40 ng/L。Yuan等人基于免疫竞争原理，在凝胶上固定抗体后，制成免疫亲和柱，使其竞争性结合氯霉素和 HRP 标记的氯霉素，加入底物后显色，最终实现了对氯霉素的快速检测，方法的检出限为 1 ng/mL。4.3 [color=#0751