流式细胞测定仪

InvitrogenTM AttuneTM NxT，快速且不堵的流式细胞仪！突破传统流式50年技术瓶颈，创新的声波聚焦技术助力流式新发现！Invitrogen Attune NxT流式细胞仪是一款全新的台式流式细胞分析仪，采用创新的声波聚焦技术，在保证高精确度的同时可以10倍极速上样；仪器配置灵活，最高可达4激光14色，可满足各种实验方案和实验室预算要求。Attune NxT流式细胞仪具有以下优势：专利声波聚焦技术，实现极速精准上样；专业防堵塞，大细胞、粘细胞轻松上；稀有细胞超灵敏高通量分析，全血样本免洗免裂解；顶级平顶光斑激光器，无需调光路；配置可达4激光16参数，模块化设计，可现场升级；可配备自动化工作站，实现24小时无人值守上样。什么是声波聚焦？Attune NxT流式细胞仪采用超声波 (超过2 MHz) 和流体动力学双重聚焦模式，将样本细胞沿液流的中心轴汇聚成一条直线。声波聚焦基本不受进样速率的影响，这使细胞能够强聚焦于激光检测点，与样本-鞘液的比率无关，所以可以在极高的样本通量下实现高精度分析。此外，Attune NxT利用注射泵进样系统进行上样，无需绝对计数微球即可实现细胞绝对计数——可最大程度地降低成本，缩短样本制备时间。相比之下，采用单纯流体动力学聚焦的流式细胞仪最高进样速度受限，而且提高流速会增大样本核心流的宽度、细胞重合率升高，使得检测信号的CV值变大。稀释样本，但不影响数据质量裂解红细胞 (RBC) 会造成待测细胞的损失和损伤。极高的样本采集速率（高达1,000 μL/分钟）使得Attune NxT流式细胞仪能够提供免洗免裂解的实验方案，最大程度地避免细胞损失，简化样本制备过程。该特性尤其适用于那些浓度较低的样本，诸如海水、脑脊液 (CSF)、干细胞及细胞数量较少的稀释样本，这些样品分析的采集时间通常较长。采用Attune NxT流式细胞仪，即便是稀释样本，亦可快速采集，且不影响数据质量。可以对诸如小鼠血液和骨髓等难以采集的样本、细针抽吸样本或低细胞产量的样本直接进行荧光标记然后稀释上样，无需洗涤或进行红细胞裂解。在高样本采集速率下可轻松实现采集——您可在四分钟内运行至多4 mL样本。这种样本制备过程不会造成样本损失，且可对所有珍贵样本进行全面检测。快速检测稀有细胞少量细胞群体的分析需要多次采集才能获得准确且值得信赖的结果，这导致其采集时间较长。Attune NxT流式细胞仪的样本运行速率比其他流式细胞仪快10倍——高达1,000 μL/分钟，每次运行能采集2 x 107个细胞，可以快速且准确地检测稀有细胞，且不影响数据质量。在各种进样速率下保证同样的精度和灵敏度Attune NxT流式细胞仪可以在您需要时提供更高的灵敏度。即便是在1,000 μL/分钟的高进样速率下，您也可以维持精确的聚焦。声波聚焦提供的精确聚焦使研究人员能够获得更小的CV值，更好地检测弱荧光信号和背景，从而减少差异，改善信号分离效果 。最大程度地减小数据差异细胞周期分析是必须精确检测多个细胞群体之间的荧光强度差异的实例之一。采用Attune NxT流式细胞仪，不论样本进样速率如何变化，都可以最大程度地减小结果的差异。即使采用高流速上样，也可以获得相同的实验结果 。符合您的规格标准的软件Attune NxT软件采用直观且易于使用的界面，能提供强大的数据采集和分析功能。您可以方便地建立、自定义并保存实验供将来研究之用。自动进行补偿，并可根据补偿指南进行设置。分析软件为数据分析效率最大化设计，其对较大的数据组的刷新速度快 (高达2,000万次/样本)，当您作出调整时，能够立即显示于数据曲线上。软件采用独特的工具简化了实验设置，包括利用滤光片配置管理器进行试剂选择。您可以从预置或定制试剂下拉菜单中选择试剂，根据仪器上的优化通道匹配适当的试剂，然后应用于曲线标志。服务与支持Attune NxT流式细胞仪可享受全球技术支持和服务项目。我们致力于提供个性化的服务，自从您向我们的销售代表购买Attune NxT仪器之日起，仪器可终生享受服务。Attune NxT流式细胞仪可享受一年的全面服务计划，包括：? 综合培训 (每台仪器2位用户)? 应用和分析支持? 全球技术服务? 预防性维护应用领域 ? 癌症 ? 免疫学? 侧群细胞分析 ? 人类间充质干细胞 ? 细胞周期分析 ? 细胞增殖 ? 免疫分型 ? 海洋样品分析 ? 微生物学? 植物研究 ? 磷酸化蛋白检测

生命科学的研究已进入了细胞组学的研究，科学家们渴求探究细胞深层次和综合性信息，既提供细胞群体的群体信息，也关注个体细胞的差异，既能看到细胞表型的特点，更能研究细胞的功能，但目前的流式细胞技术已无法满足科学家们的应用需求。Merck Millipore公司2012年推出的FlowSight多维全景流式细胞仪第一次实现了从群体到个体，从表型到功能的综合细胞分析，引领流式细胞技术进入了崭新的时代。 FlowSight是下一代专家级流式细胞仪FlowSight是一款体积小巧，但是功能强大的下一代专家级流式细胞仪。该系统革命性地设计提高了信噪比以及荧光检测的灵敏度。标配12个检测通道，除了传统荧光强度信息，还能获得&ldquo 每个细胞&rdquo 的明场、暗场以及10个荧光图像。FlowSight可以最多配置四根激光管（405, 488, 561, 642 nm），并加配785nm激光器专用于SSC信号检测，同时还可配置96孔板自动上样系统（AutoSampler）。FlowSight具有低于10MESF的超高检测灵敏度，特别对于弱信号的检测，有明显的优势。 FlowSight突破传统流式局限，实现圈门不再靠猜FlowSight与其他传统流式细胞仪不同之处在于它带来了每个细胞的真实图像。对于每个细胞，它能够生成12张图片。所获得的图片能够鉴别来自细胞质、细胞膜和细胞核的荧光。您只需点击散点图中的每个点或直方图中的每个点，即可查看与之对应的细胞图片。因此使用者再也不用靠猜测来判断设门是否准确。在FlowSight中，设门后，使用者可以通过观察所设门内外的细胞图片来确认设门是否准确。 FlowSight拓展了流式细胞技术的应用范围，获得前所未有的深入的细胞信息1. 细胞周期细化分析FlowSight可以将细胞周期分析和有丝分裂细胞分析结合起来。如下图所示，研究人员利用FlowSight对THP-1细胞周期进行分析（如下图左图所示），通过观察每个时期的细胞图片，FlowSight不仅可以分析细胞的G0/G1,S,G2/M期，还可将M期细分为分裂前期，中期，晚期，末期，获得最全面的细胞周期数据。 2. 八色免疫分型免疫分型通常用来鉴别血细胞亚群。FlowSight最多能够同时检测10色荧光，最大程度地满足研究者的实验需求。在这个例子中，研究人员用抗CD45, CD14, CD16, CD19, CD3, CD4和 CD123的抗体以及DAPI染料对细胞进行标记。通过一系列设门分析，他们鉴别了以下细胞类群： (A) CD3+ T细胞, CD4+ 辅助T细胞 (B) CD16+ 粒细胞 (C) CD19+ B 细胞 (D) CD14+ 单核细胞 (E) CD123+ pDC/嗜碱性粒细胞. 3．NFkB核转位研究NF-&kappa &beta 作为一种广泛存在的转录因子，被激活由胞浆转入胞核，从而参与炎症反应、免疫反应、细胞凋亡、肿瘤发生等。可以将细胞核和NF-&kappa &beta 分别用DAPI和FITC染色，FlowSight可观察每个细胞是否发生 NF-&kappa &beta 核转位，并量化分析NFkB核转位程度以及发生核转位细胞的比例。FlowSight革命性地光路设计，实现独特应用FlowSight系统平台也是由液流系统，光学系统和电子系统等三大部分组成。液流系统将样本细胞悬液和系统鞘液注入流动室中，使细胞在鞘液流的约束下聚焦在液流的中心，逐个流过检测窗口。光学系统中光源照射通过检测窗口的细胞，从而产生光信号。光源分为两种，其一用于产生明场细胞图像，另一种是用于产生荧光细胞图像的激光器。光源照射细胞产生的光信号被大数值孔径的物镜收集，然后通过光路系统传递到由二向色镜构成的滤光片堆栈（Dichroic Filter Stack）。光信号在这里被分成不同波段投射到TDI CCD的相应检测通道上，产生一个明场细胞图像，一个暗场细胞图像（Side Scatter，SSC）及至多10个不同荧光通道的细胞图像。FlowSight的光路系统能够自动调整焦距，并实时测定细胞运动速度，而其采用高端航空遥拍CCD进行信号采集，信噪比比PMT提高10-20倍，上述这些手段保证了系统采集到的细胞图像的质量和荧光信号的灵敏度。 综上，FlowSight多维全景流式细胞仪，采用革命性的技术，解决了传统流式细胞仪无法获得细胞个体信息的局限，真正让流式细胞仪睁开了&ldquo 眼睛&rdquo ，不仅可以对大量细胞进行统计学分析，而且还能观察细胞形态，极大地拓展了传统流式细胞仪的应用。虽然FlowSight是在2011年推出的，但是Amnis公司的下一代流式技术已经非常成熟，全球装机已经超过200台，超过300篇文献发表，其中大量Nature、Science和Blood等高水平文章。

NovoCyte Penteon是一台灵敏的流式细胞仪，具有5激光和多达30个荧光通道。它具有出色的灵敏度、分辨率、速度和灵活性。它还具有7.2 log的宽动态范围以及全自动补偿功能，让用户能够在同一实验中检测暗淡信号和明亮信号。在上一代智能化流式细胞仪基础上，提供了更强大的处理能力，以适应更高端的使用需求。搭载自动上样系统NovoSampler Q，兼容40管流式管架、 24/48/96/384孔板等多种上样方式，还可以整合到不同的实验室自动平台。简便及友好的NovoExpress 软件，在数据获取、分析及报告方面带来更可期待的用户体验。仅限研究使用。不可用于诊断目的。- 5激光30荧光通道- 超凡灵敏度和分辨率- 软件功能强大，支持数据边获取边分析- 智能化设计，操作无需人工值守，简化工作流程- 高通量检测自动完成- 10^7.2宽动态范围检测，无需电压调节- 高速收集，最高可达100,000次/秒- 准确的体积法绝对计数功能，无需计数微- 优异的散射光分辨率，可检测小至100nm的颗粒具有流体反馈控制机制始终保持非常稳定的流速。在各种样品流速下具有出色的稳定性，可在不同的操作条件下提供一致的结果。新版NovoExpress，继续保留传统的优秀功能之外，提供了更多高级分析方法：- 细胞周期分析模块：除了之前的Watson Pragmati算法之外， 又新增了Dean Jet Fox（DJF）分析模型。为G1，S和G2 / M的定量拟合、以及其他参数（如CV's和G2 / G1 比率）的量化提供了更多选择， 尤其适合药物处理后的不规则周期分析。- 细胞增殖分析模型：自动分析细胞增殖，快速识别细胞分裂代数，并计算增殖指数，便于定量。- 热图数据显示：用户定义参数的颜色，方便快速查看并同时比较多个样品。 应用领域：- 癌症/免疫学- 药物及疗法开发- 病毒感染研究- 疫苗开发- 细胞生物学- 干细胞- 微生物学/水生生物学- 植物学性能指标：激光器数量5激光器配置UV/紫色/蓝色/黄色/红色荧光通道30工作原理：无与伦比的光电检测器硅光电倍增管 (SiPM) 是基于硅基底的固态半导体器件，具备光子能级灵敏度，动态范围为 7.2 个数量级，是一款具有光子计数功能的紧凑检测器。NovoCyte Penteon 设计中的创新光学器件包含 30 个独立的 SiPM，可收集并处理来自每个荧光通道的信号。出色的散射光分辨率，可检测小颗粒NovoCyte Penteon 散射光检测光学系统和信号处理电子器件经过优化，可以分辨粒径小至 0.1 µ m 的颗粒。凭借这种优异的分辨率，可轻松识别和分析血小板、细菌和各种亚微米颗粒。高重现性和稳定性NovoCyte Penteon 和 NovoCyte Quanteon 的液路系统专为提供高性能而设计。NovoCyte Penteon 和 NovoCyte Quanteon 拥有其他流式细胞仪无法比拟的液路一致性和稳定性。使用蠕动泵的其他仪器通常会受到液路脉动的影响，导致绝对细胞计数不一致和不准确。应用：凋亡分析细胞凋亡也称为细胞程序性死亡，是细胞调控自身死亡的过程，通过激活特定通路使细胞发生收缩、凝聚，并最终通过吞噬作用被清除。这与坏死细胞死亡形成鲜明对比，坏死细胞死亡时细胞失控死亡并裂解，可产生免疫反应异常激活等有害影响。因此，凋亡细胞以非常有序的方式死亡，可限制其对周围细胞和组织的破坏。多种方法可用于测定细胞死亡并区分其为凋亡还是坏死。NovoCyte 流式细胞仪具有自动补偿设置和宽荧光检测动态范围，可轻松对检测进行定量，无需调整 PMT 电压免疫表型分析免疫状态与疾病状态、治疗效率以及对疫苗等外部刺激的反应有关。免疫表型分析可快速识别候选细胞类型、亚类和功能。由于免疫细胞可能影响疫苗的免疫原性及其效能，因此监测多种免疫细胞群的频率以及特定细胞亚群（如单核细胞、NK 细胞、T 细胞和 B 细胞）的分化或活化状态至关重要。NovoCyte 流式细胞仪可同时定量分析多种白细胞，以便更好地了解患者的免疫状态并监测机体对传染病的免疫反应。细胞增殖细胞增殖是一种重要功能，是高度结构化的事件，如果不受控制，会导致疾病。我们可以通过绝对细胞计数或使用染料（例如 CFSE）测量增殖。当 CFSE 标记的细胞发生分裂时，染料在子细胞之间平均分配，随着染料的不断稀释，我们可以测量 CFSE 荧光随时间的损失。此外，还绘制染料的平均荧光强度 (MFI) 与细胞浓度随时间的变化曲线，以揭示两者之间的反比关系。这类分析方法通常用于观察 T 淋巴细胞活化的变化。图：使用 CFSE 测量 Jurkat T 细胞增殖。A) 使用 CFSE 标记 Jurkat T 细胞，并通过 NovoCyte 流式细胞仪分析细胞随时间的变化，以测定细胞分裂。每个峰值都对应于一个单独的时间点。B) 使用随细胞分裂产生的信号稀释，绘制绝对细胞计数与 CFSE 的平均荧光强度 (MFI) 随时间的变化曲线。细胞因子检测细胞因子是免疫细胞对病原体、自身免疫或治疗药物的激活反应所必需的小分子。细胞因子的信号传导可以调节基因调控、先天免疫反应和适应性免疫反应以及炎症。因此，测量细胞因子产生并确定细胞因子产生的来源对于深入了解免疫反应非常重要。基于微球的流式细胞术检测是测量细胞因子的高效方法，可以使用具有不同荧光强度的混合微球来测量单个样品中的多种可溶性分析物。细胞内蛋白质检测对细胞内蛋白质的检测和分析有助于细胞亚群和细胞过程的额外表征。为分析非细胞表面蛋白质，需要进行细胞固定和破膜。然而，许多磷酸特异性抗体与许多基于去垢剂的常用破膜方法（用于细胞内染色）不兼容。在确定磷酸特异性抗体的适宜固定和破膜方法时，需要特别注意。最常见的方法是用 1.5% 多聚甲醛固定，然后用 100% 甲醇破膜。虽然这种方法适用于多种抗体，但请注意，并非每种磷酸特异性抗体都适用。此外，在异质性样品中鉴定不同的细胞群，需要对表面蛋白连接的磷酸化蛋白进行染色。必须特别考虑这些表位对固定剂的敏感性，并采取相应预防措施，避免损害表位。因此，样品在固定前可能需要对特定的表面标记物进行染色细胞周期分析正常的人体细胞是含有恒定数量 DNA 的二倍体。在细胞分裂的过程中，DNA 合成导致总 DNA 含量翻倍，随后在有丝分裂后恢复正常的 DNA 含量。利用 NovoCyte 流式细胞仪，可以进行详细的细胞周期分析，了解肿瘤细胞分化、细胞转化以及细胞与化合物之间的相互作用。图：在 10 µ g/M MG132 或 500 µ g/M 5-FU 处理 16 小时后，使用 ACEA NovoCyte 流式细胞仪分析 A549 细胞的细胞周期分布。NovoExpress 内置的细胞周期分析模块中的图像显示了处于 G0/G1 期（绿色）、S 期（黄色）和 G2/M 期（蓝色）的细胞。与正常未处理的细胞相比，MG132 处理的细胞停滞在 G2/M 期，而 5-FU 处理的细胞停滞在 G0/G1 期。