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[color=#333333]组织破碎提取法是在常温液体状态下利用高速破碎、高速研磨、高速搅拌和超分子渗透等技术,数分钟内对药材进行组织破碎、研磨至细微颗粒,通过细胞组织的破裂和组织外围溶剂的快速渗透与溶解,使药材组织细胞内的目标生物活性成分以最快的速度、最低的能耗、最大的收率迅速从细胞中解离出来进入溶剂体系中,实现药材组织细胞内外有效成分分子浓度的平衡,且不会破坏热敏成分、并达到快速绿色提取的效果。[/color]
条形酵母是将酵母通过小孔注入到装有液体氮的气罐中压缩制成的。将有1mm的筛子扣入到装有10-20 ml球状酵母的50ml破碎罐的顶部,经过离心破碎变成了2L的条状物。压力是由人工用60ml的自由活塞注射器注入罐内,条状可以在-80C°下被保存。 使用上海净信JXFSTPRP全自动样品快速研磨仪对酵母进行研磨,将不锈钢钢珠和样本分别装入研磨钢罐中,然后放入到用聚苯乙烯盒子盛放的液氮中,当预冷冻过程结束后,时间一分钟左右,或者直到原来沸腾的液体氮恢复平静,将破碎罐从液氮中取出,并要将破碎罐沾有的液体全部清理干净,以避免在破碎过程中发生爆炸。研磨钢罐最好用坩埚钳或大镊子夹取出来,而且通常要带经过冷冻的手套,冻伤以免。 研磨钢罐中酵母量不要太多,否则可能会研磨不充分,留有残渣,一般为研磨钢罐的1/3左右为宜,把刚从液氮中取出的钢罐安装在净信JXFSTPRP全自动样本快速研磨仪中,分5次进行研磨,设置频率55hz,20s,每次间隔都把研磨罐放入液氮中冷却。 在每次破碎后都要将破碎罐取下,放入到液氮中进行冷冻,当液氮不在沸腾时,可以将钢罐取出,破碎可以继续进行。 经过100秒的破碎后,我们通过显微镜观察可以发现95%的酵母已经达到破碎效果,用于下一步的实验过程。剩余的酵母可以储存,备用。研磨钢罐和钢珠都可重复利用,破碎罐和破碎球可以用温的乙醇清洗,放到干燥处贮存。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502051131_534361_2983531_3.jpg http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502051131_534362_2983531_3.jpg
1、高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度http://www.39kf.com/Txt2Img/ju.png此法适用于动物内脏组织、植物肉质http://www.39kf.com/Txt2Img/named.png子等。 2、玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机http://www.39kf.com/Txt2Img/iuy87612.png高,适用于量少和动物脏器组织。 3、超声波处理法:用http://www.39kf.com/Txt2Img/2008-9-13.png定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂,此法http://www.39kf.com/Txt2Img/kmmn675.png适用于微生物材料,用http://www.39kf.com/Txt2Img/datu.png肠杆菌制备各种酶,常选用50-100毫克菌体/毫升浓度,在1KG至10KG频率下处理10-15分钟,此法的缺点是在处理过程会产生大量的热,应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。 4、反复冻融法:将细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。 5、化学处理法:有些动物细胞,例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠(SDS)、去氧胆酸钠等细胞膜破坏,细菌细胞壁较厚,可采用溶菌酶处理效果http://www.39kf.com/Txt2Img/877667jkdkk.png好。 无论用哪一种方法破碎组织细胞,都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中,使大分子生物降解,导致天然物质量的减少,加入二异丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或减慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酥活力,但不是全部,还可通过选择pH、温度或离子强度等,使http://www.39kf.com/Txt2Img/jsdh766289sdmkxu.png些条件都要适合于目的物质的提取。