斑马鱼

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  • 高内涵——更快更高的斑马鱼成像与分析方案
    斑马鱼是一种广泛使用于科研与药物研发的模型系统,由于其与人类疾病表型的相似性而广受欢迎。许多基于成像的实验可用来测定斑马鱼的表型变化,但是图像的手动采集和分析非常繁琐且耗时。这些过程的自动化会大大提高通量及数据质量。在这里,我们展示了Operetta CLS™ 和Opera Phenix™ 如何进行高通量的斑马鱼的成像和表型分析、筛选,使您能够专注于数据评估而不是数据生成。自动检测高分辨率图像-轻松锁定斑马鱼用普通显微镜对96孔板中的斑马鱼进行定位与成像非常耗时的。Harmony® 高含量分析软件融合了PreciScan™ 智能图像采集工具,集成低倍率预扫描工作流程,图像分析,更高的放大倍率重新扫描,可完全实现自动化,以减少采集时间和无效的数据量,并显著加快分析速度。斑马鱼的明场成像,通过PhenoLOGIC™ 人工智能使图像分割变得容易(图1和图2)。通过机器自学习在微孔板中自动检测斑马鱼通过智能图像识别提高检测通量通过自动水浸镜头获取高分辨率共聚焦图像使用Harmony® 成像和分析软件简化与流程化图像分析图1:自动定位:使用Harmony中的PhenoLOGIC功能对斑马鱼自动定位。A-5X明场预扫描。B-PhenoLOGIC经过鼠标点击培训区分鱼(绿点)和背景(红点)C-以PhenoLOGIC为基础的鱼类识别,使用形状进一步优化,过滤去除较小的错误识别的地区。图2:PreciScan预扫描定位下一步高倍镜扫描的区域以20x(1.0 NA水浸镜头)扫描预扫描的定位区域。Z轴共聚焦50层的最大投影。700张图像的采集时间提供。自动准确地确定形态特征Harmony® 成像与分析软件可以轻松检测荧光强度,形态和纹理的变化。示例(图4)显示单个荧光染料可用于识别不同的身体部分。根据宽度识别头部与脊柱。等效椭圆用于描述脊柱的形状并估计其曲率。尾轴(图5)以类似的方式,自动检测尾部曲率。图4:单一荧光染料,计算确定斑马鱼头部/尾部比例图5:尾轴的自动检测。在3D图像中,依旧看到细节Harmony软件提供了3D图像的可视化样品的工具, Opera Phenix和Operetta CLS高内涵分析系统提供从1.25x到63x的各种放大倍数,63x并配备自动水浸镜头,提高灵敏度,减少深层样本成像中的光学畸变。图6:斑马鱼尾部血管3D重构图7:表达GFP和RFP的个体红细胞点击下载该方案完整版资料:https://www.instrument.com.cn/netshow/sh100168/down_913430.htm
  • 国内外大型药企追捧斑马鱼新药筛选平台
    可别小看这几厘米长的小不点,斑马鱼基因与人类基因同源性高达85%,信号传导通路基本相似。这意味着在其身上做药物实验所得到的结果在多数情况下也适用于人体。“比如癫痫、关节炎、脂肪肝、癌症等常见人类疾病模型,都可以通过斑马鱼进行新药筛选。”据环特生物科技有限公司负责人介绍,目前斑马鱼可以承接的新药筛选人类疾病模型达30多种。   在杭州环特生物科技公司的一间显微注射室里,记者目睹了药物筛选的大致过程。玻璃器皿中放着几条出生一天多的斑马鱼幼鱼,在显微镜的放大下,这些幼鱼的器官活动、血液流动在旁边连接的电脑上清晰可见。根据委托方的要求,这位工作人员分别往它的肾脏和肝里注册一种新药剂。因为斑马鱼的胚胎和幼鱼是透明的,实验时很容易观察到各种环境有毒物质、药物对其体内器官的影响。几秒钟后,两个器官起了点反应。“还要观察一段时间,整个过程会照相或者摄影记录,等到反应明显后,通过特殊仪器分析然后提交研究报告,最后挑选出最安全、有效的候选药物。”这位工作人员表示。   和老鼠等其他实验动物相比,斑马鱼筛选实验周期非常短,能够在1天到一周内完成,而老鼠实验通常要1个月以上时间。此外,实验费用也非常低,斑马鱼筛选实验每条每天耗费小于0.01美元 因为个体小,实验所需化合物用量仅为鼠类实验的1/100到1/1000。   综合各种优势,让环特生物科技有限公司的斑马鱼新药筛选平台名声鹊起,成立不到一年,目前委托的国内外大型药企就有20多家,包括先声制药、格兰素史克等,国内的很多医药类学术院校、科研机构也纷至沓来。这个平台的服务范围还在扩大,环保产业,农业、食品、营养保健品、美容护肤品等各个领域纷纷冲着斑马鱼而来,签订各种高科技服务外包协议和意向。
  • 微塑料,让淡水斑马鱼也很“受伤”
    微塑料广泛存在于水体、空气、土壤等环境中,被形象地称为“水中的PM2.5”,对人类健康和自然环境造成危害。记者22日从云南农业大学了解到,该校动物科学技术学院研究团队以斑马鱼为模式动物,在微塑料对淡水鱼黏膜免疫毒性效应研究方面有了新发现。据悉,这是目前为数不多的关于微塑料对淡水鱼黏膜免疫毒性效应方面的研究成果,相关论文发表在最新一期国际期刊《光化层》上。聚乙烯是全球消耗最高的塑料类型之一。在我国高原地区,由于紫外线较强,塑料易发生光降解成为微塑料;同时微塑料与水环境中重金属等污染物之间复杂地相互作用,还可在各营养级之间富集传递。云南农业大学副教授高宇团队通过以斑马鱼为模式动物研究发现,聚乙烯微塑料可改变肠道优势微生物群丰度,增加了肠黏膜的感染概率;同时,聚乙烯微塑料激活肠免疫网络通路,产生黏膜免疫球蛋白。研究示意图 云南农业大学供图通过分析鱼类鳃、皮肤和肠道等主要的黏膜器官,高宇等人发现聚乙烯微塑料主要在鱼类肠道中富集,并随粪便排出。微塑料颗粒不断地摄入排出,并不断摩擦肠壁,使得肠道肌层变薄,加剧了肠黏膜损伤,引发肠道炎症。“肠道作为宿主黏膜免疫和消化吸收的主要器官,定植有复杂的共生菌群。聚乙烯微塑料暴露,降低了斑马鱼肠道杯状细胞的比例。”高宇介绍,与此同时,肠道微生物多样性指数也显著提高。他们发现,微塑料的摄入,使斑马鱼肠道优势微生物变形杆菌门和放线菌门的相对丰度显著增加,而梭杆菌门的相对丰度降低。在为期7天、1000微克每毫升聚乙烯微塑料暴露条件下,不动杆菌属、邻单胞菌属、黄杆菌属和假单胞菌属等肠道机会致病菌的相对丰度则出现不同程度升高。“在硬骨鱼类中,免疫球蛋白在黏膜免疫中发挥着重要作用。”高宇说,在上述极端情况下,斑马鱼肠道黏膜免疫相关基因的表达与邻单胞菌属的相对丰度呈正相关,也就是说微塑料可使斑马鱼肠道黏膜免疫系统发生损伤。超过7天后,肠道炎症或可进一步加剧。同时,斑马鱼作为小型鱼类,是其他鱼类等动物的食物,所携带的微塑料或可在食物链循环中造成新的损害。

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  • 【原创大赛】斑马鱼的研究现状

    [align=center]斑马鱼的研究现状[/align][font=宋体][size=14px][color=black]斑马鱼([/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]Zebrafish[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black])作为新一代应用于药物活性检测的模式生物,目前其药理模型已基本成熟并广泛应用于医药药理研究。斑马鱼作为生物模型而被广泛应用于药物筛选,并成为研究心血管促生和抑制作用模型[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][1][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]。斑马鱼在医药药理研究过程中,可用来研究器官发育和疾病模型,是常见的模式生物之一,斑马鱼的胚胎在肉眼观察下呈透明状,而且斑马鱼在染色剂或荧光标记下都可通过显微镜观察其体内器官。当斑马鱼用作生物模型检测活性成分的药理作用时,斑马鱼的药物用量少。斑马鱼在药物活性筛选时,其生长周期短,耗时少,效率高。在活性检测实验中,斑马鱼的实验操作简便。在受精后[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]48[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]小时后,斑马鱼的背动脉与轴静脉之间形成简单的循环网。在受精后[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]72[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]小时后,斑马鱼体内形成管脉系统,肠下静脉血管[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black](SIVs)[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]初步形成[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][2][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]。李艳[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][3][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]等研究发现丹红注射液对斑马鱼节间血管具有明显的再生功能,对血管损伤具有明显的修复保护作用。该实验建立了研究血管新生干预作用的可靠实验方法。梁爱华[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][4][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]研究发现斑马鱼的有些突变具有与人类疾病相似的临床症状,可作为先天性铁粒幼红细胞性贫血、骨髓再生障碍等血液性疾病模型和心肌收缩不良、心律不齐等心血管疾病模型。魏易洪[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][5][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]等通过实验研究证明人参水煎液在较低浓度下可促进[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]VRI[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]模型斑马鱼节间血管([/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]ISVs[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black])增长,较高浓度的人参水煎液则会出现相反的毒副作用,建立节间血管([/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]ISVs[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black])抑制模型,并证明其方法的可行性。[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]斑马鱼作为生物模型而被广泛应用于药物筛选,并成为研究心血管促生和抑制作用的主要模型之一。其繁殖生长周期短,子代数量多,可同时大规模检测不同样品。运用斑马鱼大规模快速比较药物含量高低,体现其模式生物的筛选作用,同时也能为研究心脑血管药物活性评价提供一定的参考。运用斑马鱼作为大规模快速比较药物含量高低的模式生物筛选药物的药理作用,大大提高了检测效率。[/color][/size][/font]参考文献[font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][1] WesterfieLd M. The zebrafish book:aguide for the Laboratory use of zebrafish[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]([/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]Daniorerio[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black])[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][ M ]. Oregon: University of Oregon Press, 2007.[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][2] KimmeL CB. Genetics and earLy deveLopmentof zebrafish[J]. Trends in genetics, 1989, 5 ( 8 ):283-288.[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][3] [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]李艳[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]刘晓金[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]王平[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black],[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]等[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]丹红注射液对斑马鱼促血管作用的研究[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][J]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]中华中医药杂志[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], 2016, 31 ( 06 ): 2270-2273.[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][4] [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]梁爱华[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]斑马鱼一种可用于中药药效和毒性筛选的鱼类模型[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][J]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]中国中药杂志[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black],2009, 34 ( 22 ):2839-2840[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][5] [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]魏易洪[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]周忠焱[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]朱灵妍[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black],[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]等[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]人参水煎液对斑马鱼血管生长作用[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][J]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]辽宁中医药大学学报[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], 2017, 19 ( 04 ) : 8-10.[/color][/size][/font]

  • 【金秋计划】北桑寄生总黄酮对硫代乙酰胺诱导斑马鱼急性肝损伤的保护作用

    [font=宋体]急性肝损伤([/font]acute liver injury[font=宋体],[/font]ALI[font=宋体])是由无肝病或患有肝病但处于稳定状态的人员在受到长期熬夜、大量酗酒、肝脏缺血缺氧及药物中毒等因素所致[/font][sup][color=black][1-2][/color][/sup][font=宋体]。随着医学技术的发展,越来越多的研究者发现[/font]ALI[font=宋体]的发生发展与炎症反应、氧化与抵御氧化系统失衡及铁死亡等密切相关[/font][sup][color=black][3-5][/color][/sup][font=宋体]。肝脏损伤进一步恶化,会发展为更为严重的衰竭[/font][sup][color=black][6-7][/color][/sup][font=宋体],诱发机体免疫能力下降、血糖含量异常、脂质代谢紊乱等异常现象累及其他器官损伤。目前,[/font]ALI[font=宋体]的临床防治主要采用保肝药物进行治疗,严重者会选择肝脏替代治疗[/font][sup][color=black][8-10][/color][/sup][font=宋体]。 现代研究发现很多中药及有效成分在防治肝病领域表现出较好的前景[/font][sup][color=black][11-14][/color][/sup][font=宋体]。灯盏花素可以降低[/font][font=宋体]丙氨酸氨基转移酶[i][/i][/font][font=宋体]([/font]alanine aminotransferase[font=宋体],[/font]ALT[font=宋体])、[/font][font=宋体]天冬氨酸[/font][font=宋体]氨基转移酶[/font][font=宋体]([/font]aspartate aminotransferase[font=宋体],[/font]AST[font=宋体])和丙二醛([/font]malondialdehyde[font=宋体],[/font]MDA[font=宋体])水平,提高[color=var(--weui-LINK)]抗氧化剂[i][/i][/color]超氧化物歧化酶([/font]superoxide dismutase[font=宋体],[/font]SOD[font=宋体])的活性,有效调节核因子[/font]E2[font=宋体]相关因子[/font]2[font=宋体]([/font]nuclear factor-erythroid 2-related factor 2[font=宋体],[/font]Nrf2[font=宋体])信号通路,减轻酒精引起的肝损伤[/font][sup][color=black][15][/color][/sup][font=宋体]。[/font][font=宋体]秦皮甲素能够降低四氯化碳([/font]carbon tetrachloride[font=宋体],[/font]CCl[sub][color=black]4[/color][/sub][font=宋体][color=black])[/color][/font][font=宋体]引起的小鼠肝脏中纤维沉积现象,减少[/font]AST[font=宋体]、[/font]ALT[font=宋体]及胆红素([/font]total bilirubin[font=宋体],[/font]TBil[font=宋体])的含量,下调透明质酸酶([/font]hyaluronidase[font=宋体],[/font]HAase[font=宋体])、[/font]III[font=宋体]型前胶原([/font]procollagen type III[font=宋体],[/font]PCIII[font=宋体])和层黏连蛋白([/font]laminin[font=宋体],[/font]LN[font=宋体])的水平,并改善肝组织炎症与脂质空泡[/font][sup][color=black][16][/color][/sup][font=宋体]。因此,从天然药用植物探索抗[/font]ALI[font=宋体]活性物质仍然是目前临床防治[/font]ALI[font=宋体]的有效途径。[/font] [font=宋体]北桑寄生[/font][i]Loranthus tanakae[/i] Franch. et Sav.[font=宋体]是桑寄生科桑寄生属落叶灌木[/font][sup][color=black][17][/color][/sup][font=宋体],寄生对象为栎属、桦属、李属等树木,在中国、日本、韩国、朝鲜等均有分布[/font][sup][color=black][18][/color][/sup][font=宋体]。现代研究表明北桑寄生中含有糖类、甾体皂苷类、黄酮类等次生代谢物[/font][sup][color=black][19][/color][/sup][font=宋体]。其中黄酮类化合物在北桑寄生药材中含量丰富(约[/font]10.58%[sup][color=black][20][/color][/sup][font=宋体])。目前,北桑寄生的药理活性研究较少,还尚未见北桑寄生在治疗[/font]ALI[font=宋体]方面的研究报道。课题组前期研究显示,北桑寄生总黄酮([/font]total flavonoids of [i]L. tanakae[/i][font=宋体],[/font]LTF[font=宋体])具有良好的抗氧化作用,可以促进脂多糖诱导的[/font]RAW264.7[font=宋体]细胞中[/font]Nrf2[font=宋体]转录活性,抑制炎症反应的发生[/font][sup][color=black][21][/color][/sup][font=宋体]。因此,本研究利用硫代乙酰胺([/font]thioacetamide[font=宋体],[/font]TAA[font=宋体])建立斑马鱼[/font]ALI[font=宋体]模型,对北桑寄生中黄酮类化合物的保肝活性进行研究,以期为北桑寄生的药理研究提供科学依据。[/font] [b][color=#ffffff][back=#7a4442]1 [font=黑体]材料[/font][/back][/color][/b]1.1 [font=黑体]动物[/font]AB[font=宋体]野生型斑马鱼品系、[/font]CZ320[font=宋体]肝脏荧光标记斑马鱼[/font]Tg[font=宋体]([/font][i]-1.7apoa2:GFP[/i][font=宋体])和[/font]CZ59[font=宋体]中性粒细胞荧光标记斑马鱼[/font]Tg[font=宋体]([/font][i]lyz:DsRED2[/i][font=宋体])由山东第一医科大学斑马鱼中心提供。斑马鱼养殖在昼夜交替周期为[/font]14 h/10 h[font=宋体]的循环系统中,水温控制在([/font]28[font=宋体]±[/font]1[font=宋体])℃,[/font]pH[font=宋体]值与盐浓度分别维持在[/font]7.4[font=宋体]、[/font]0.004%[font=宋体]左右,每日饲喂[/font]2[font=宋体]次丰年虾,[/font]1[font=宋体]次普通饲料。[/font][b][/b]1.2 [font=黑体]药品与试剂[/font]LTF[font=宋体]为本实验室自制[/font][sup][color=black][22][/color][/sup][font=宋体];芦丁对照品(质量分数≥[/font]98%[font=宋体],批号[/font]153-18-4[font=宋体])购自西安瑞林生物科技有限公司;[/font][i]N[/i]-[font=宋体]乙酰半胱氨酸([/font][i]N[/i]-acetylcysteine[font=宋体],[/font]NAC[font=宋体],质量分数≥[/font]98%[font=宋体],批号[/font]616-91-1[font=宋体])、油红[/font]O[font=宋体]粉末(批号[/font]1320-06-5[font=宋体])购自上海源叶生物有限公司;[/font]TAA[font=宋体](批号[/font]62-55-5[font=宋体])购自美国[/font]Sigma-Aldrich[font=宋体]公司;[/font]ALT[font=宋体]试剂盒(批号[/font]C009-2-1[font=宋体])、[/font]AST[font=宋体]试剂盒(批号[/font]C010-2-1[font=宋体])、[/font]MDA[font=宋体]试剂盒(批号[/font]A003-1-1[font=宋体])、[/font]SOD[font=宋体][color=var(--weui-LINK)]试剂盒[i][/i][/color](批号[/font]A001-3-2[font=宋体])、过氧化氢酶([/font]catalase[font=宋体],[/font]CAT[font=宋体])试剂盒(批号[/font]A007-2-1[font=宋体])购自南京建成生物工程研究所;还原型谷胱甘肽([/font]reduced glutathione[font=宋体],[/font]GSH[font=宋体])试剂盒(批号[/font]BC1175[font=宋体])、活性氧([/font]reactive oxygen species[font=宋体],[/font]ROS[font=宋体])试剂盒(批号[/font]CA1410[font=宋体])购自北京索莱宝科技有限公司;[/font]BCA[font=宋体]蛋白定量试剂盒(批号[/font]P0012[font=宋体])购自碧云天生物技术有限公司;苏木素[/font]-[font=宋体]伊红([/font]hematoxylin-eosin[font=宋体],[/font]HE[font=宋体])染液套装(批号[/font]G1003[font=宋体])购自武汉赛维尔生物科技有限公司;其他试剂均为分析级别。[/font]1.3 [font=黑体]仪器[/font]BO-IR[font=宋体]型组织研磨破碎仪(山东百欧医疗科技有限公司);[/font]HC-2518R[font=宋体]型高速冷冻离心机(中佳有限公司);[/font]DK-98-II[font=宋体]型电热恒温水锅(天津市泰斯特仪器有限公司);[/font]SpectraMaxABS[font=宋体]型酶标仪([/font]CMax Plus Molecular Devices[font=宋体]公司);[/font]HPG-280BX[font=宋体]型恒温培养箱(东联电子技术开发有限公司);[/font]IX83[font=宋体]型倒置荧光显微镜(日本[/font]Olympus[i][/i][font=宋体]公司);[/font]GL224I-ISCN[font=宋体]型万分之一天平(德国[/font]Sartorius[font=宋体]公司);斑马鱼养殖设备(上海海圣生物实验设备有限公司);[/font]JB-P5[font=宋体]型包埋机(武汉俊杰电子有限公司);[/font]CRYOSTAR NX50[font=宋体]型冰冻切片机(赛默飞世尔科技有限公司)。 [/font][b][color=#ffffff][back=#7a4442]2 [font=黑体]方法[/font][/back][/color][/b]2.1 [b]LTF[/b][font=黑体]含量检测[/font][font=宋体]配制芦丁对照品溶液,绘制回归方程。称取实验室自制的[/font]LTF[font=宋体],配制成质量浓度为[/font]1 mg/mL[font=宋体]的溶液,使用三氯化铝[/font]-[font=宋体]醋酸钠溶液显色,利用回归方程计算[/font]LTF[font=宋体]的含量[/font][sup][color=black][22-23][/color][/sup][font=宋体]。[/font]2.2 [b]LTF[/b][font=黑体]耐受浓度筛选[/font][font=宋体]将成熟健康的[/font]6[font=宋体]月龄斑马鱼以[/font]1[font=宋体]∶[/font]2[font=宋体]或[/font]2[font=宋体]∶[/font]2[font=宋体]的雌雄比放入产卵缸中,待自然产卵后,收集透明胚胎,用循环系统中的养鱼水清洗[/font]2[font=宋体]次,洗去粪便与杂质,转移至干净的培养皿,添加含有少量亚甲基蓝溶液的养鱼水,放置于[/font]28 [font=宋体]℃恒温培养箱内孵育[/font]3 d[font=宋体]。将受精后[/font]3 d[font=宋体]([/font]3 d post fertilization[font=宋体],[/font]3 dpf[font=宋体])健康[/font]AB[font=宋体]幼鱼转移到[/font]12[font=宋体]孔板中,每孔放入[/font]30[font=宋体]尾幼鱼,设置对照组和[/font]LTF[font=宋体]([/font]25[font=宋体]、[/font]50[font=宋体]、[/font]100[font=宋体]、[/font]200[font=宋体]、[/font]400[font=宋体]、[/font]800 μg/mL[font=宋体])组,各孔为[/font]4 mL[font=宋体]体系,对照组加入含[/font]0.1%[font=宋体]二甲基亚砜([/font]dimethyl sulfoxide[font=宋体],[/font]DMSO[font=宋体])的养鱼水,给药组加入不同质量浓度的[/font]LTF[font=宋体]药液,记录各组幼鱼生存情况,绘制生存曲线。[/font]2.3[b]LTF[/b][font=黑体]对[/font][b]TAA[/b][font=黑体]诱导的斑马鱼肝损伤的影响[/font]2.3.1 [font=宋体]斑马鱼荧光肝脏分析[/font] [font=宋体]选取具有荧光标记的[/font]3 dpf Tg[font=宋体]([/font][i]-1.7apoa2:GFP[/i][font=宋体])转基因斑马鱼幼鱼于[/font]6[font=宋体]孔板内,设置对照组、模型组、阳性药[/font]NAC[font=宋体]([/font]10 μmol/L[font=宋体])组和[/font]LTF[font=宋体]([/font]12.5[font=宋体]、[/font]25.0[font=宋体]、[/font]50.0 μg/mL[font=宋体])组,每孔[/font]15[font=宋体]尾。对照组给予斑马鱼养殖水,模型组加入[/font]7 mmol/L TAA[font=宋体]溶液,各给药组给予[/font]7 mmol/L TAA[font=宋体]和相应药物,给药处理[/font]72 h[font=宋体]。给药结束后,斑马鱼用三卡因麻醉,置于载玻片上,使幼鱼两眼重叠,用荧光显微镜采集同一体位图像,使用[/font]Image J[font=宋体]软件统计幼鱼的荧光肝脏面积。[/font]2.3.2 [font=宋体]斑马鱼体长与卵黄囊吸收延迟的面积统计[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,使用[/font]Image J[font=宋体]软件测量幼鱼的体长与卵黄囊吸收面积。[/font]2.3.3 HE[font=宋体]染色[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,将幼鱼固定后用石蜡包埋,制作切片,进行[/font]HE[font=宋体]染色,最后用中性树胶封片。在光学显微镜下采集图像,分析各组斑马鱼幼鱼肝脏组织病理状况。[/font]2.3.4 [font=宋体]油红[/font]O[font=宋体]染色[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,各组随机选取[/font]10[font=宋体]尾幼鱼,三卡因麻醉后,用[/font]4%[font=宋体]组织固定液于[/font]4 [font=宋体]℃[/font][font=宋体]固定[/font]12 h[font=宋体]。用[/font]PBS[font=宋体]洗净固定液,在摇床上分别以[/font]20%[font=宋体]、[/font]40%[font=宋体]、[/font]80%[font=宋体]、[/font]100%[font=宋体]的[/font]1,2-[font=宋体]丙二醇梯度脱水[/font]10 min[font=宋体]。然后,用[/font]0.5%[font=宋体]油红[/font]O[font=宋体]染液在水浴中避光染色[/font]1 h[font=宋体],再用[/font]100%[font=宋体]、[/font]80%[font=宋体]、[/font]40%[font=宋体]、[/font]20%[font=宋体]的[/font]1,2-[font=宋体]丙二醇依次脱水[/font]15 min[font=宋体],最后用[/font]PBS[font=宋体]清洗,在显微镜下采集肝脏区域图像,利用[/font]Image J[font=宋体]软件测定肝脏处的平均光密度。[/font]2.3.5 [font=宋体]斑马鱼匀浆蛋白浓度测定[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,各选取[/font]45[font=宋体]尾幼鱼,吸净水分,准确称定质量,按质量与体积[/font]1[font=宋体]∶[/font]9[font=宋体]的比例加入[/font]0.9% [color=var(--weui-LINK)]NaCl[i][/i][/color][font=宋体]水溶液,利用冷冻匀浆机进行研磨,离心后吸取上清,用[/font]BCA[font=宋体]试剂盒测定蛋白浓度。[/font]2.3.6 [font=宋体]斑马鱼肝功能指标测定[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,按“[/font]2.3.5[font=宋体]”项下方法制备[/font]10%[font=宋体]斑马鱼匀浆上清液,按试剂盒说明书测定[/font]AST[font=宋体]和[/font]ALT[font=宋体]活力。[/font]2.3.7 [font=宋体]斑马鱼体内[/font]ROS[font=宋体]水平检测[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,每组收集[/font]15[font=宋体]尾幼鱼,采用终浓度为[/font]10 μmol/L DCFH-DA[font=宋体]荧光探针,室温避光染色[/font]20 min[font=宋体],在荧光显微镜下观察并进行拍照,用[/font]Image J[font=宋体]软件统计平均荧光强度以指示[/font]ROS[font=宋体]水平。[/font]2.3.8 [font=宋体]斑马鱼体内氧化应激相关酶的测定[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,按“[/font]2.3.5[font=宋体]”项下方法制备[/font]10%[font=宋体]斑马鱼匀浆上清液,用上清液的蛋白质浓度进行归一化处理,测定[/font]CAT[font=宋体]、[/font]SOD[font=宋体]、[/font]MDA[font=宋体]、[/font]GSH[font=宋体]的含量。[/font]2.3.9 [font=宋体]中性粒细胞迁移数目统计[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药[/font]72 h[font=宋体]后,观察斑马鱼幼鱼中性粒细胞迁移情况,统计卵黄囊附近的中性粒细胞迁移数目。[/font]2.4 [font=黑体]数据学分析[/font][font=宋体]使用[/font]SPSS[font=宋体]数据编辑器与[/font]Graphpad Prism 8.0.1[font=宋体]软件进行数据分析及制图,多组数据之间比较采用单因素方差分析([/font]One way-ANOVA[font=宋体])和[/font]Duncan[font=宋体]法,各组数据用[/font][font=宋体]表示。 [/font][color=#ffffff][b][back=#7a4442]3 [font=黑体]结果[/font][/back][/b][/color]3.1 [b]LTF[/b][font=黑体]含量测定[/font][font=宋体]根据吸光度([/font][i]A[/i][font=宋体])值,计算得芦丁的回归方程为[/font][i]y[/i][font=宋体]=[/font]10.676 [i]x[/i][font=宋体]+[/font]0.039 5[font=宋体],[/font][i]R[/i][sup][color=black]2[/color][/sup][font=宋体]=[/font]0.999 2[font=宋体];线性范围为[/font]0.000 8[font=宋体]~[/font]0.056 0 mg/mL[font=宋体]。以芦丁为对照品,测得[/font]LTF[font=宋体]质量分数为[/font]98.06%[font=宋体]。[/font]3.2 [b]LTF[/b][font=黑体]对斑马鱼的耐受性考察[/font][font=宋体]将[/font]3 dpf AB[font=宋体]斑马鱼暴露在不同质量浓度的[/font]LTF[font=宋体]溶液中,每[/font]24[font=宋体]小时观察记录幼鱼的存活情况。如图[/font]1[font=宋体]所示,当[/font]LTF[font=宋体]质量浓度为[/font]50 μg/mL[font=宋体]及以下时,幼鱼未出现出明显的发育、形态、行为异常。随着[/font]LTF[font=宋体]质量浓度增大至[/font]100 μg/mL[font=宋体],有[/font]3.3%[font=宋体]幼鱼开始死亡。[/font]LTF[font=宋体]质量浓度大于[/font]200 μg/mL[font=宋体],少量幼鱼出现脊背弯曲与游泳转圈等异常行为,死亡现象较为明显。斑马鱼给予[/font]200[font=宋体]、[/font]400[font=宋体]、[/font]800 μg/mL LTF[font=宋体]处理[/font]24 h[font=宋体]的生存率分别达到[/font]83.3%[font=宋体]、[/font]20.0%[font=宋体]、[/font]0[font=宋体]。[/font]400[font=宋体]、[/font]800 μ

斑马鱼相关的资料

斑马鱼相关的仪器

  • PsychoFish 是Mde GmbH 设计研发用于斑马鱼行为学观察和研究的仪器,其独特的力学设计、高分辨率视频采集系统及功能完善的分析系统为斑马鱼群体(群体凝聚力)和个体行为学(运动能力及趋势)的研究提供了有效手段,进而可用于评价斑马鱼神经、精神状态以及相关药物的药效分析等。PsychoFish 可用于成年斑马鱼(3 月龄)或幼年斑马鱼(1-2 月龄)群体凝聚力及个体运动能力及趋势两方面的研究。系统组成:其包含以下3 个组成部分1. 机械单元2. 图像采集系统3. 数据显示、存储、分析硬件/软件PsychoFish 系统有如下特点:1. 设计精巧,方便安装和拆卸;2. 126*50*125cm 铝制框架构成机械单元基座,稳定性高;3. 最多4 个10*20*5cm 大小斑马鱼池可被同时放置于基座进行实验;4. 基座表面为乳白色玻璃材质,保证其上方鱼池均匀的光线分布;5. 提供两种不同的照明方式:下方白色背景灯照明和上方下拉式照明,满足不同实验需求;6. 图像采集器包含前后双摄像头,置于机械单元铝制水平杆上,提供全方位的图像采集;7. KOMI 图像分析程序可从群体凝聚力和运动强度两方面分析采集到的图像,高效便利。数据处理及分析(1)斑马鱼群体凝聚力分析观测群里凝聚力时,需要考虑多方面的因素,包括空间需求、水深、个体数目或群体规模等,PsychoFish 建议在深度为2cm 的水中进行测试。测试时,位于机械单元水平杆上的前后摄像头可记录每一斑马鱼个体的运动情况,拍摄成一系列的图片,然后通过KOMI 程序进行分析即可。图片拍摄、鱼池尺寸和数目等参数可通过软件面板进行设置。 视频采集过程中,软件使用图解和数值计算的方式自动对采集的图像进行分析,得到各种评价斑马鱼群行为学的数据。软件识别图像中的斑马鱼个体并用白色十字标记,所有呈现于屏幕的斑马鱼个体可形成一区域多边形,多边形面积、斑马鱼个体间距等数据即可用于反映鱼群群体凝聚力大小。软件分析过程中,以下计算数据可输出至Excel 表格中: 多边形的面积 最长对角线长度 重心的坐标(相对于实验区域中点位置) 重心距离参照点的距离 个体间的距离:包括最近距离、最远距离、平均距离 鱼对之间的平均距离(2)个体运动能力及趋势分析个体运动能力测试建议水深2cm,最多四个鱼池同时测试。测试期间,机械单元上的摄像头可记录每个斑马鱼个体的运动情况,并保存一系列图片,通过对图片的识别和分析得到其运动能力和趋势数据。图片拍摄、鱼池尺寸和数目等参数可通过软件面板进行设置。 视频采集过程中,软件使用图解和数值计算的方式自动对采集的图像进行分析,得到各种评价斑马鱼群行为学的数据。软件识别图像中的斑马鱼个体并用彩色十字标记,被标记的斑马鱼个体以及其运动轨迹会呈现于分析窗口。同时,所有斑马鱼运动速度及路程也会被计算并输出至Excel 表格中。请关注玉研仪器的更多相关产品。如对产品细节和价格感兴趣,敬请来电咨询!
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  • 在心血管药物发现中,斑马鱼多用于模拟血栓形成、侧支血管发育、炎症、心肌病和心脏再生等过程。iWorx ZS-200 斑马鱼心电图记录和分析系统为使用这种经济高效的模型进行高通量、快速筛选化合物提供了一种理想的方式。LS-ECG LabScribe心电图分析模块提供一系列分析选项,包括T和QT段缩短和延长,这是心脏功能的关键指标。ZS-200 Zebrafish 系统为研究大分子量的心脏副作用提供了一种紧凑、易于使用和非侵入性的解决方案。产品主要特色:■ 通量高、速度高■ 性价比高、方法简单、快速、连续测量■ 占地面积小,可增加数据流量主要组成部分:IX-100F 采集器:优化用于记录来自斑马鱼的微伏ECG信号。将电极短路时,系统的系统噪声低至1微伏。斑马鱼 ECG 在 30-200 微伏之间,提供足够的信噪比,用于分析 ECG 信 号的不同成分。斑马鱼心电系统屏蔽室:斑马鱼屏蔽室为采集长度在1到2英寸之间的斑马鱼的心电图做过特殊的优化。三种心电电极:A 型电极相距 0.125 英寸( 3.2 毫米);B 型电极相距 0.150 英寸( 3.8 毫米);C型电极相距0.175英寸(4.45毫米);ECG 分析软件:分析模板包括准确描绘PQRST的开始,持续时间和振幅。还可以根据独特的ECG配置文件创建自定义模板,并将其保存下来供将来使用。其他功能还包括平均心跳、心跳分类和基于异常R-R间隔、心率、噪音和活动的离群值去除,以及轻松提取源数据,如图像或文本文件等平均数据的能力等。请关注玉研仪器的更多相关产品。如对产品细节和价格感兴趣,敬请来电咨询!
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  • 斑马鱼养殖系统广泛适用于科研、教学等领域,用于水中生物的培育、饲养、繁殖繁育。 尤其适合斑马鱼、爪蟾、文昌鱼等小型鱼类等水生生物的饲养; 淡水和海水均可适用; 整个系统具有自我净化和过滤系统,耐高盐度环境设计,可用于广泛的海、淡水鱼虾贝藻等生物的繁育饲养; 水槽单元尺寸可定制,可单独抽出,循环水量独立可控; 底架采用 304/316 不锈钢制作;型号:Z-A-S4,四层单面款式主要特点: 集成化的水生物养殖; 多级水处理系统; 自动控制,自由调节; 根据不同要求灵活搭配; 为斑马鱼提供纯净、安全的生存环境; 为科学研究提供适用、稳定的保障平台;主要配置: 根据需要,可以配置1.5升,3升,10升的斑马鱼水槽; 如:第四层放一排20个1.5L水槽,中间两层放12个3L的水槽,最下边一层放6个10升的水槽; 多聚碳材质水槽,拆卸方便,可叠加罗列; 四重过滤装置(机械式涤纶布过滤,生物流化床过滤,终端活性碳过滤,紫外线消毒过滤); 可选配自动盐分调节和纯水装置;请关注玉研仪器的更多相关产品。如对产品细节和价格感兴趣,敬请来电咨询!
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斑马鱼相关的耗材

  • 斑马鱼显微注射模具Zebrafish Microinjection & Transplantation Kit
    斑马鱼是发育与神经生物学研究的常用模型,科学家经常采用微注射方式将吗啡啉、质粒、RNA或蛋白质等物质引入早期胚胎。这种技术虽然相对简单,但时间是非常关键的要素。研究人员经常遇到小障碍延迟实验,导致胚胎发育超出预期阶段。虽然掌握显微注射需要练习和技巧,但使用以下工具,可以显著提高成功概率。这里介绍几个塑料模具,它们是专门为斑马鱼的研究而设计的。模具灌胶后翻转放在液体琼脂糖凝胶中。一旦琼脂糖凝固,手柄可以很容易地从琼脂糖中去除。胚胎很容易被移液到琼脂糖凝胶模具的凹槽中。通过“下降和倾斜”,将胚胎加入水中,然后去除多余的水。重复这个步骤,直到凹槽中充满了胚胎。模具的宽度和结构使胚胎能够自然对齐。模具套装:DJ-21模具---注射许多胚胎-多达1000。由琼脂糖凝胶中的模具制造的凹槽将使胚胎能够自对齐。KIT-79模具--幼虫注射。倾斜的脊在琼脂糖凝胶中形成完美的角度,然后使幼虫的微注射更容易进行。KAS-21--这个模具是为了降低微注射的速度而设计的,通过在你做微注射时转动培养皿。ET-21模具--卵裂球移植。产品选购:货号产品描述包装ZF-9000斑马鱼显微注射模具Zebrafish Microinjection & Transplantation Kit套
  • 双阶玻璃微量吸管拉长器PC-10配件
    双阶玻璃微量吸管拉长器PC-10配件是生产微量注射针和用于膜片钳实验的吸管的理想仪器配件,是全球领先的Micropipette Puller品牌。双阶玻璃微量吸管拉长器PC-10提供了可靠微量吸液管生产保障,生产的微量吸液管尖端尺寸范围是从一微米到十分之一微米。双阶玻璃微量吸管拉长器PC-10特点是Narishige公司专业生产微量注射针和用于膜片钳实验的吸管的工具。内置的电源十分稳定,每次加热线圈时都输送统一量的电流。稳定的电源输送确保每次生产是一致的,多次加热微型吸液管也是一致的。单次拉伸和两次拉伸操作的加热水平都可以进行调节,加热水平在一个高能见度的LED读数屏上显示。在提拉过程中,使用丙烯酸罩将微型吸液管从气流中屏蔽出来。该操作排除了可能会影响微管形状和尺寸的外部力量。提供两对重量(两轻和两重)用来调整拉力。配有一个备用加热器线圈(PC-10H),和一个内径1.0mm的玻璃微毛细管样品,样品内部是玻璃纤维(GD-1)。NARISHIGE正在使用这种更自动和全功能的微量吸管拉长器PC-10,取代旧的2006年停产的半自动PP-830。PC-10也是更老型号PB-7的替代物,还作为Sutter' s P-30的成本更低,功能更强大的替换品。事实上,Tritech公司使用微量吸管拉长器PC-10,拉动预先拉动的微细管针(见MINJ-PP),该微细管针是我们售卖产品,用于线虫,果蝇,非洲爪蟾,斑马鱼和转基因小鼠研究。双阶玻璃微量吸管拉长器PC-10规格配件GD-1玻璃毛细管带丝状物,备用加热器,电源线电源AC100V(+-5%), AC120V(+-5%), AC220V(+-5%), AC240V(+-5%)消耗功率约. 80W加热水平100 = 灯丝电压 2.5V重量约. 25g x 2, 约 100g x 2尺寸/重量W205 x D190 x H185mm, 6.0kg
  • 汽车玻璃光栅校正片
    现在提供一系列图形畸变检测玻片,主要是针对汽车玻璃工业的应用。汽车挡风玻璃的检测常常要满足英国标准协会BSI、德国标准DIN、欧盟标准。这些标准主要集中在玻璃的光学性能检测,例如角偏差、折射本领、光畸变等等。服从和满足这些标准对汽车玻璃的制造者来说非常重要。利用特殊图形的玻璃来产生特定的图像,然后进行分析生产的玻璃。我们提供的标准玻璃片50*50mm大小,玻璃片安装在焦距90mm投影仪上,投影的像距8m,形成斑马幕。倾斜一定角度的平行线来检测角偏差,水平平行线来检测折射本领,特别圆点矩阵来满足欧盟检测标准的要求。请联系海德公司获取详细信息。 订购信息:货号产品描述规格06B01200Dot matrix slide for testing to ECE Regulation 43个06B01201Horizontal 12mm Lines fro testing to DIN 52305个06B0120230°12mm lines个06B0120345°12mm lines for DIN 52305个06B0120430°1.5mm lines for BSI857:1967个06B0120530°2.5mm lines for DIN 52305个价格仅供参考,详情请电询

斑马鱼相关的试剂

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