推荐厂家
暂无
暂无
常见的真核细胞翻译的起动因子的功能 各种版本的教材和专著上写的常见的真核细胞翻译的起动因子的功能太乱了,我根据Michael B.Mathews, Nahum Soneberg,John W.B.Hershey,Translational Control onBiology and Medicine,Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2007, 整理了出来。1.eIF1:起始密码子的识别:(1)使不正确的密码子与反密码子配对解离并且correct parings in poor sequence contexts in P site,(2)介导40S亚基对于正确的AUG密码的辨识的相关反应。参与确保起始密码子选择的忠实性(与原核的IF3相似)。2.eIF1A:与原核生物的IF1功能相似,eIF1A可以占领真核细胞的核糖体A位(40S亚基),并使得40S亚基的一些结构域的相对位置发生变化。此外,eIF1A与eIF1还能够增强eIF3将80S核糖体解离为40S和60S亚基的活性。3.eIF2:携带(Met-tRNAi Met)与40S亚基结合,形成三元复合体(40S complex),eIF2有GTPase活性。eIF2结合上的GTP水解为GDP+Pi的反应由eIF5介导,结合上eIF2的GDP与GTP交换反应由eIF2B介导。4.eIF2B:结合在eIF2的GDP更换为GTP的反应由eIF2B催化,否则eIF2B上的GDP掉下来换上GTP的过程非常缓慢。5.eIF3:有依赖性RNA的(RNA independent)解离80S核糖体为40S和60S亚基的活性,此活性可被eIF1A加强,部分地被eIF1增强。eIF3能够结合到60S亚基的内表面的平台部位(platform),并且锁住40S亚基到达18Sr RNA元件(18r RNA属于40S亚基的通道),18Sr RNA元件位于40S亚基与60S亚基的内部接触面(inter subunit),并且象一座桥一样连接40S亚基中的B2b和B2d。eIF3的另外功能:促进mRNA的结合与核糖体40S亚基的结合。6.eIF4F:eIF4A,Eif4E和eIF4G各一个分子组成一个完整的eIF4F分子。7.eIF4A:RNA helicase,使mRNA去除二级结构,其本身是较低的非持续性的螺旋酶(nonprocessive helicase),其酶活性能够被eIF4B所活化。也可以认为eIF4B是eIF4A的cofactor,eIF4B可能是增加了eIF4A与mRNA的亲合性而增加了eIF4A的RNA螺旋酶活性。8.eIF4B:与eIF4A共同行使RNA螺旋酶活性,去除mRNA的二级结构。9.eIF4E:真核mRNA的5'-帽子的结合蛋白。10.eIF4G:连结eIF4E与PAB。11.eIF5:与eIF2结合时会增强eIF2的GTPase活性,eIF5也是核糖体依赖性的GTPase。eIF5的GAP功能对40S亚基与60S亚基的结合是一个必需的先决条件(prerequisite),至少在细胞内是如此,因为敲除了酵母细胞eIF5基因会削弱翻译起并且引起48S前起始复合物(PTCs)的堆积。12.eIF5B:有GTPase活性,eIF5B结合上GTP但未水解时,会占领核糖体40S亚基的A位。eIF5B的功能与原核的eIF2近似,eIF5B有很弱的结合Met-tRNAi Met活性。13.eIF6:亚单位解聚,结合于60S亚单位。参考:Michael B.Mathews, Nahum Soneberg,John W.B.Hershey,Translational Control onBiology and Medicine,Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2007, P113, P91-P94, P100-P101, P103, P110-P111, P116, P104-105, P114, P250-P251, P253-254,P319。
[font=宋体]在生物学和医学研究中,真核细胞培养是一项至关重要的技术。然而,这一过程中常常会遇到各种挑战和问题,这些问题可能会影响细胞的生长、繁殖和功能。本文将探讨真核细胞培养中常见的几个问题,并提供相应的解决方案,以帮助研究人员更好地掌握细胞培养技术,提高实验效率。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]细胞培养不贴壁[/font][/b][/font][font=宋体]可能原因[/font][font=宋体]①胰蛋白酶消化过度[/font][font=宋体]②支原体污染[/font][font=宋体]③培养液中无贴壁因子[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]解决方法[/font][font=宋体]① 缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度[/font][font=宋体]② 分离培养物,检测支原体[/font][font=宋体]③ 清洁支架和培养箱[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]培养液[/font][font=Calibri]PH[/font][font=宋体]变化过快[/font][/b][/font][font=宋体]可能原因[/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]CO2[/font][font=宋体]张力不对[/font][/font][font=宋体]②培养瓶盖拧得太紧[/font][font=宋体][font=宋体]③[/font][font=Calibri]NaHCO3[/font][font=宋体]缓冲系统缓冲力不足[/font][/font][font=宋体]④培养液中盐浓度不正确[/font][font=宋体]⑤细菌、酵母或真菌污染[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]解决方法[/font][font=宋体][font=宋体]① 按培养液中[/font][font=Calibri]NaHCO3[/font][font=宋体]浓度增加或减少培养箱内[/font][font=Calibri]CO2[/font][font=宋体]浓度,[/font][font=Calibri]2.0g/L[/font][font=宋体]到[/font][font=Calibri]3.7g/L[/font][font=宋体]浓度[/font][font=Calibri]NaHCO3[/font][font=宋体]对应[/font][font=Calibri]CO2[/font][font=宋体]浓度为[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]%到[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]%[/font][/font][font=宋体][font=宋体]② 改用不依赖[/font][font=Calibri]CO2[/font][font=宋体]培养液。松开瓶盖[/font][font=Calibri]1/4[/font][font=宋体]圈[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③ 加[/font][font=Calibri]HEPES[/font][font=宋体]缓冲液至[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]到[/font][font=Calibri]25mM[/font][font=宋体]终浓度[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④ 在[/font][font=Calibri]CO2[/font][font=宋体]培养环境中改用基于[/font][font=Calibri]Earle[/font][font=宋体]’[/font][font=Calibri]s[/font][font=宋体]盐配制的培养液,在大气培养环境中培养改用[/font][font=Calibri]Hank[/font][font=宋体]’[/font][font=Calibri]s[/font][font=宋体]盐配制的培养液[/font][/font][font=宋体]⑤ 丢弃培养物或用抗生素除菌[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]细胞生长缓慢[/font][/b][/font][font=宋体]可能原因[/font][font=宋体]①更换了不同培养液或血清[/font][font=宋体]②试剂保存不当[/font][font=宋体]③培养物中有少量细菌或真菌污染[/font][font=宋体]④培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]解决方法[/font][font=宋体]① 比较新培养液与原培养液成分[/font][font=宋体]② 比较新血清与旧血清支持细胞生长实验[/font][font=宋体]③ 增加起始培养细胞浓度[/font][font=宋体]④ 换入新鲜配制培养液,让细胞逐渐适应新培养液[/font][font=宋体]⑤ 补加谷氨酰胺或生长因子[/font][font=宋体]⑥ 用无抗生素培养液培养,如发现污染,丢弃[/font][font=宋体]⑦ 用抗生素除菌[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]细胞培养时死亡[/font][/b][/font][font=宋体]可能原因[/font][font=宋体][font=宋体]①培养箱内无[/font][font=Calibri]CO2[/font][/font][font=宋体]②培养箱内温度波动太大[/font][font=宋体]③细胞冻存或复苏过程中损伤[/font][font=宋体]④培养液渗透压不正确[/font][font=宋体]⑤培养液种有毒代谢产物堆积[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]解决方法[/font][font=宋体][font=宋体]① 检测培养箱内[/font][font=Calibri]CO2[/font][/font][font=宋体]② 检查培养箱内温度[/font][font=宋体]③ 取新的保存细胞种[/font][font=宋体]④ 检测培养液渗透压[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]注意:大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为[/font][font=Calibri]260[/font][font=宋体]–[/font][font=Calibri]350mOsm/kg[/font][font=宋体]。加入额外试剂如[/font][font=Calibri]HEPES[/font][font=宋体]或药物都有可能影响培养液渗透压。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]黑胶虫污染[/font][/b][/font][font=宋体]黑胶虫污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现,尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]感染黑胶虫细胞的表现:[/font][font=宋体]①细胞培养时生长的旺盛,小黑点会越来越少,反之则多[/font][font=宋体]②可以穿透滤膜,也可以通过细胞培养箱空气进行污染[/font][font=宋体]③换掖冲洗后也无多大作用[/font][font=宋体][font=宋体]④低倍镜下观察为黑色点状,高倍镜([/font][font=Calibri]400X[/font][font=宋体])下作不规则布朗运动[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]解决方法[/font][font=宋体]① 体外细胞培养时更换好一点的血清[/font][font=宋体][font=宋体]② 如果是贴壁细胞的话,可用无菌的[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]洗几次,可一定程度上缓解。若是悬浮的话,可以向其中少加一点滋养细胞(从小鼠腹腔内取的巨噬细胞),加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有一定作用[/font][/font][font=宋体]③ 在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打,冲洗干净后再加入细胞培养液,坚持天天洗,细胞传代时加生理盐水再离心一次,稍微加大接种密度,一段时间后,黑胶虫数目会显著减少[/font][font=宋体][font=宋体]④ 环丙沙星[/font][font=Calibri]+[/font][font=宋体]哌拉西林,各[/font][font=Calibri]10ug/ml[/font][font=宋体],选择片剂,[/font][font=Calibri]1.5[/font][font=宋体]一盒[/font][font=Calibri]/6[/font][font=宋体]片,每片含环丙沙星[/font][font=Calibri]0.25g[/font][font=宋体],磨成粉,[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]溶解,稀释到适当浓度,过滤,[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]度保存。哌拉西林用的注射粉剂,[/font][font=Calibri]2.5g/[/font][font=宋体]瓶,溶解到相应浓度,加入[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]和培养基中,可以观察到黑胶虫数量明显减少[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]蛋白表达[/b][/url]详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]
2024年4月8日,安捷伦宣布与世界顶级公共研究型大学加利福尼亚大学圣地亚哥分校 合作成立“安捷伦细胞智能卓越中心( Agilent Center of Excellence in Cellular Intelligence ) ”,联合推动科学创新研究。该座安捷伦卓越中心(Center of Excellence,简称CoE)位于加利福尼亚大学圣地亚哥分校医学院,将推动安捷伦与加州大学圣地亚哥分校以及其他机构和行业合作伙伴之间的协作与创新。卓越中心将成为该地区学术界和制药/生物制药研究人员的交流中心,为各项研究提供重要的分析仪器,以及教育、培训和应用开发机会。安捷伦总裁兼首席执行官Mike McMullen表示:“这一重要举措有助于我们更好地从细胞层面理解疾病机制,并推动更好的方法学开发用以编辑和工程化细胞,来治疗疾病、增强免疫力,并最终创造出新型生物产品。”这座卓越中心将利用安捷伦仪器,包括细胞分析和质谱解决方案,为一项宏伟的跨学科计划提供支持。该研究项目名为“破译真核细胞智能(Decode Eukaryotic Cellular Intelligence)”,旨在揭示真核细胞对复杂且不确定环境的感知、决策和应对方式,从而了解其对健康和疾病的影响。加州大学圣地亚哥分校医学和细胞与分子医学教授,同时身兼上述研究项目的创始人Pradipta Ghosh博士表示:“我们很高兴能与安捷伦合作,在圣地亚哥分校成立安捷伦细胞智能卓越中心。这将推动我们对生命基本原理和生物复杂性起源的理解。”该项目的理论基础是一项假说 ,即真核细胞作为深度强化学习(Reinforcement Learning,简称RL)实体,利用生物智能的互连开关回路来适应环境并得以生存。该项目结合了实验、计算和理论方法,旨在解码这些开关回路的分子和细胞机制,并探索其对健康和疾病产生的影响。加利福尼亚大学圣地亚哥分校自创校伊始,就孕育了一种敢于冒险、勇于追求合作和创新的文化。该校成立于 1960 年,在一代又一代敢于打破常规、挑战世俗并重塑传统观念的杰出学者的带领下,以创造更美好的世界为使命。创始人在创校时只提出了一个标准,那就是始终追求与众不同,因此自该校成立之初,创新就已成为常态。加利福尼亚大学圣地亚哥分校是全球顶尖的公共研究机构,也是全美学生申请人数最多的机构之一。[来源:仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]