艾滋免疫

默克独创Erenna® 单分子免疫检测平台，采用专利单分子检测技术，突破蛋白检测极限，创领生物标志新发现，助力疾病研究再创新。由于激光的聚焦效应，会形成一个非常狭小的检测空间“爱里斑”，这个空间集中了多达84%的激光能量，能够最有效地照射和激发单个荧光分子。SMC™ 单分子检测技术会依次检测通过“爱里斑”区域的单个荧光信号，峰高超过阈值的荧光信号会被统计为数字信号，并将检测到的数字信号进行汇总，显著地提高了检测灵敏度。Erenna® 平台在检测每一个样品时，都会获得三套数据：检测事件（Detected Events, DE），事件光子含量（Event Photons, EP），以及总光子含量（Total Photons, TP）。检测事件指的是在一定检测时间段之内得到的所有高于阈值的信号的数目，这些信号可以是单个分子在爱里斑中产生的，也有可能是几个分子同时进入爱里斑时形成的。事件光子含量指的是在所有的检测事件中，检测器测到的总光子含量。总光子含量为在整个检测过程里面，检测器所收集到的所有光子的含量，高于阈值和低于阈值的信号都会被统计。根据标准品浓度，我们可以使用上述三套检测数据得到三条标曲。其中检测事件标曲在低浓度条件下能很好地反映样品的浓度变化，因为这时一般是单个分子进入爱里斑，检测事件的数据与样品浓度有非常好的一致性。但随着样品浓度的提升，此时越来越多的情况下有几个分子同时进入爱里斑，检测事件就不能准确反映浓度变化了，而此时事件光子含量标曲能接过“接力棒”，测定样品的浓度并在溶液的浓度特别高时。Erenna® 单分子免疫检测平台可以根据不同实验条件灵活选择孵育形式。Erenna® 平台提供严格质控的已验证试剂盒。产品参数：

超高灵敏蛋白检测 助力揭示微妙生物学事件当蛋白的检测与差异表达对您的科研发现意义重大，那么选择一个值得信赖的超高灵敏度检测平台将极大程度加速研究进程，确保数据可靠性。 日益精准的研究和药物研发需要平台具备更为灵敏的靶标检测与更高通量的样本检测能力。默克生命科学全新推出的SMCxPRO™单分子免疫检测平台，突破常规免疫检测极限极大地提升检测灵敏度，引领生命科学研究领域蛋白质定量检测进入----飞克级时代！平台优势? 超高灵敏度(fg/mL)? 快速读取分析? 精巧时尚设计? 磁珠反应制式? 超过600种的抗体对验证实现大动态范围检测体液样本蕴含着最为直接和丰富的生物标志物信息，但相对于人工样本而言，也是检测起来最为困难的样本。体液样本有着非常复杂的特性，不同个体的同一标志物表达水平呈现巨大的差异。即使是同一种生物标志物，也在不同的时间能出现几十倍乃至几百倍的表达量变化。例如正常个体和发生细胞因子风暴个体的IFN-γ标志物含量可产生2000-3000倍的差异。开创性的科学工作需要新的检测技术能够适用于不同浓度条件的样本，也就是要求具备大的动态检测范围，这一点已经成为生物标志物检测技术的重要要求。SMCxPRO™实现了高灵敏度，大动态范围4 logs的检测。SMC™ 技术应用1. 改变了生物标志物的传统认识肌钙蛋白cTnl是心脏病领域经典的生物标志物。cTnl的检测被用来判断冠心病、心衰等心脏疾病的发生，同时也帮助医生进行预后评估。正常人血液无法通过ELISA有效测得cTnl指标，因此一般认为这种因子在正常人中并不存在。而SMC™技术通过基于磁珠孵育条件的单分子检测，能够实现低至0.4pg/mL的检测灵敏度。研究发现，在350例健康的男性和女性个体中，几乎所有个体血液中的cTnl都可被精确检测，并且99%个体的表达水平都在10.19pg/mL以下，而市售其他所有检测试剂盒都无法达到10pg/mL以下的检测能力。大多数个体的实测值在1-2pg/mL之间，远远超出了传统方法的检测范围。在一项长达12年的连续研究中，cTnl的价值被彻底地重新定义。研究者在12年前检测了正常个体的cTnl, 并且根据本底表达水平的差异将被测者分为4组。在随后12年的临床追踪中，发现本底表达cTnl较高的个体倾向于较高的累积心脏病发病率，而本底表达丰度低于1.06pg/mL的个体12年后心脏病的累积发病率极低。研究揭示cTnl本底表达水平可影响多年后心脏病事件发病率。2. 全新生物标志物的发现阿尔茨海默症是严重的神经疾病，全球有多达5000万阿尔茨海默症患者。人类已经发现一些重要的蛋白可能会参与到这种疾病，并且可以作为判断疾病的重要标志物。寻找合适的生物标志物用于早期诊断对于防治阿尔茨海默症十分关键。Aβ蛋白造成的淀粉样蛋白沉淀和tau蛋白造成神经纤维缠结，会在最早出现认知损失症状的10-15年前开始，这段时间也被称为阿尔茨海默症潜伏期（preclinical-Alzheimer Disease）。如果能在这个时期尽早确认疾病的出现，将为医学干预和治疗争取非常宝贵的治疗期。因此，要求有更好的生物标志物能够在早期进行诊断。通过SMC™单分子免疫检测平台，研究者自主开发出了VILIP（Visinin-like protein-1）的超高灵敏度检测技术，并且证实VILIP在阿尔茨海默症造成的神经细胞损失方面是非常有效的生物标志物。3. 助力全新单抗药物开发IL-13是重要的细胞炎症因子，与IL-13信号通路相关研究发现青壮年的哮喘很多是由于IL-13信号通路所造成，因而IL-13被认为是一种很重要的成年哮喘诱发因素。SMC™单分子免疫检测平台具备数倍乃至上百倍于高质量ELISA检测试剂盒的灵敏度，磁珠孵育系统达到了0.07pg/mL的超高检测灵敏度，实现了所有个体本底表达水平的检测，从而得到了血液中IL-13在治疗条件下的完整变化数据，提供了关键的临床证据。4. 新蛋白药物/治疗方法的免疫原性检免疫原性指的是抗原激发免疫反应的能力，也指抗原刺激机体后，机体免疫系统能形成抗体或致敏T淋巴细胞的特异性免疫反应的能力。免疫原性很多情况下是对机体有利的，例如疫苗产生的免疫反应。但是，在生物治疗过程中，对治疗性抗原（重组蛋白，单抗）的免疫反应是非常不利的，会产生细胞因子释放综合症cytokine release syndrome (CRS)，促炎症因子在治疗中被免疫细胞释放(例如TNF-α, IL-6, IL-8, IFN-γ, 等等)，或者是抗药性抗体产生 anti-drug-antibodies (ADAs) ，削弱治疗效果，对治疗产生反作用。SMC™其检测灵敏度可达到TNF-α:0.1 pg/mL ，IL-2:0.2 pg/mL，本底细胞因子水平: 100% 可被检测，提高了数据质量，并且可通过本底水平对样品进行分级。而其大动态检测范围能力可满足在CRS中炎症反应细胞因子剧烈变化，同时高通量的实验形式可检测大量实验样本，减小个体差异对结果的影响。

酶联免疫斑点技术(Enzyme Linked Immunospot Assay,ELlSPOT)是细胞免疫学研究中最敏感的检测方法之一，可以在单细做水平对抗体分泌细胞（ASC）及细胞因子（CK）分泌细胞进行检测。由于是单细胞水平检测，ELISPOT 比ELISA和有限稀释法等具有更高的灵敏性。能从20万-30万细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。并且该方法能够对抗原刺激后的活细验进行功能性检测，具有较高的特异性、直观可信度高，并且易操作，已被广泛用于分泌CK细胞检测或ASC测定中，在国内外免疫学界获得了广泛的应用。AID EliSpot Reader Classic酶联免疫斑点分析仪 德国艾迪（AID）是全球领先的专业研发并生产酶联斑点分析仪的厂商，最早在全球上市酶联斑点分析仪，自AID EliSpot Reader上市以来，已经有超过1500多家实验室正在使用AID的EliSpot Reader- 酶联免疫斑点分析仪。 AID EliSpot Reader硬件和软件完全符合欧盟CE 认证，FDA 21CFR part11规范、GMP/GLP标准。 AID EliSpot Reader Classic 主要配置：&bull 德国制造高分辨率科研级别相机，彩色CCD芯片，清晰捕捉微小斑点&bull QuadPack高精度电动载物台：全自动控制，精确位移，各孔自动居中&bull LED环形无影照明光源：照射均匀，可清晰分辨因孔侧壁反光造成的幻影现象，准确识别孔底边缘&bull 专业水准的电动光学镜头：镜头自动聚焦，自动曝光调节，保证清晰捕捉微小斑点&bull 独立高配置计算机系统：与分析仪独立，有效减少故障率，预装正版Win7及Office软件等&bull ELISPOT软件：全自动读板，自动计数分析；同步完成斑点图像扫描、斑点计数与结果分析； AID EliSpot Reader 软件功能： 斑点图像采集与计数：全自动读板，自动采集各孔图像；自动计算斑点数量和斑点相关信息如大小、面积、光密度等。内置不同因子参数设置，直接调用；CountAID 功能协助优化读数参数，并具有智能参数记忆功能。 结果分析：直接判断阴阳性检测结果；诊断模块AIDiagnostic，适用于临床诊断用ELISPOT实验的结果判读，单独输出每例病人斑点图像和结果报告；统计分析各孔斑点分布、对比免疫反应强弱、细胞因子分泌量化比较等。 数据输出与质控：可输出单孔图像、任意孔及整板图像；多种保存格式，Excel, Txt, PPT等；输出数据可自定义包含斑点数,SFU,光密度强度, Activities，斑点分布图表等；包含质控模块，操作历史自动记录，符合GLP规范。 Applications - 酶标ELISPOT应用文献 :Science 1998, 279: Quantitation of HIV-1–Specific Cytotoxic T Lymphocytes and Plasma Load of Viral RNA.Graham S.Ogg, Xia Jin,et al.Science 1998, 281: Identification of LFA-1 as a candidate autoantigen in treatment-resistant Lyme-Arthritis. Gross DM, et al.Nature 2005,433,887-892.Toll-like receptor 3 promotes crosspriming to virus-infected cells. Oliver Schulz1*,et al.Lancet 2005, 366: 1443-1451. Effect of BCG vaccination on risk of Mycobacterium tuberculosis infection in children with householdtuberculosis contact: a prospective community-based study. Ahmet Soysal,et al.Lancet 2003 Apr 5 361(9364):1168-73. Comparison of T-cell-based assay with tuberculin skin test for diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection in a school tuberculosis outbreak. Ewer K, et al.Blood 2009,114: 4089-4098. Interleukin-21 restores immunoglobulin production ex vivo in patients with common variable immunodeficiency and selective IgA deficiency. Stephan Borte, et al. AID iSpot Reader荧光酶联免疫斑点分析仪（可见光/荧光双重检测功能的ELISPOT分析仪） AID iSpot Reader 主要配置：&bull 德国制造光学系统高分辨率科研级别相机，彩色CCD芯片，高品质成像，保证微小斑点及斑点晕的识别&bull 专业水准的电动光学镜头：镜头自动对焦，自动曝光调节，保证清晰捕捉微小斑点&bull 荧光照明系统：高能氙灯，激发效率高，波谱范围广250-1000nm，是最适合荧光成像的激发光源&bull 4-8位滤光片轮，全自动切换，至少标配FITC和Cy3荧光滤光片，其他波长可加配&bull 独立高配计算机系统：与分析仪独立有效减少故障率，配置实时更新&bull ELISPOT软件：全自动读板，自动计数分析；自动叠加不同荧光通道图像，找出共染色斑点（共分泌细胞） AID iSpot Reader 专利的软件功能及技术先进性： 专利的荧光图像Overlay技术保证多色因子共分泌斑点准确识别， 避免酶标双色检测中因不同细胞因子分泌量不均而引起的误判 全自动判读：iSpot对板上每孔的各种颜色荧光斑点分别成像，例如 检测FITC标记的IFN-γ分泌情况和Cy3标记的IL-2分泌情况，软件再自行将不同荧光图像叠加（Overlay），准确识别共分泌（IFN-γ&IL-2）细胞。整个过程全自动，无需人工干预；性能稳定, 兼容扩展性好：高能激发保证微弱荧光信号检测，窄带滤光片保证特异性信号检测，多色扩展只需加配滤光片；技术先进性：最早在全球上市酶联斑点分析仪，1996年发明《应用Elispot方法检测血液细胞活性》的专利；唯一拥有《以荧光滤光片为基础进行荧光多色ELISPOT的检测系统》的专利PCT/EP2008/009112‐FluoroAID；学术发表权威性：从荧光款2007年上市到现在，80% 荧光EliSpot应用SCI文献是由 发表的，被公认作荧光检测的最佳选择 ；国际认可度高：与牛津大学Oxford免疫学实验室密切合作开发是其用于结核的酶联斑点(T-Spot)诊断的专用工具；国际艾滋病、疫苗行动组织（IAVI）指定品牌；全球知名Elispot试剂盒开发实验室（如瑞典Mabtech）专用品牌。 Applications - 荧光ELISPOT应用文献 :Nature Medicine. 2013 Oct 19(10):1305-13. Cellular immune correlates of protection against symptomatic pandemic influenza.Saranya Sridhar, &Ajit Lalvani,et al.Infection, 2014 Jan. IGRA-positive patients and interferon-gamma/interleukin-2 signatures: Can the FluoroSpot assay provide further information? P. Bittel, et al.Journal of internal medicine, 2013. Decreased functional T lymphocyte-mediated cytokine response in patients withchemotherapy-induced neutropenia. ?hrmalm L., et al.Methods Mol Biol. 2012 792:77-85. Dual- and triple-color fluorospot. Ahlborg N, Axelsson B.ELISPOT 应用领域(Application):免疫学基础研究：T细胞和B细胞，Th0/Th1/Th2细胞转换分析疫苗研究：ELISPOT是检测和评价疫苗的细胞免疫的有效方法。国际上普遍采用ELISPOT方法监测HIV疫苗研究中的免疫应答反应，在国际艾滋病疫苗行动计划中，采用ELISPOT法对T细胞功能进行评价。药物筛选：化合物和药物免疫学反应的筛选感染性疾病诊断与研究：例如结核病的临床诊断，莱姆病、艾滋病等传染病的研究肿瘤免疫研究：已用于分析和评价在癌症病人中诱导肿瘤特异的T细胞的疫苗试验。治疗前后特异性细胞免疫应答水平的检测，可有效的评估治疗效果，对于治疗和用药提供重要的参考信息。自身免疫病研究：调整机体免疫调节功能，对自身免疫病的治疗揭供更有效的措施过敏研究：参与过敏机制的细胞因子研究，如IL-4移植免疫研究：移植中排斥反应的预测