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[size=4][color=#DC143C][font=黑体]同位素比质谱方法检测内源性类固醇雄烯二酮[/font][/color][/size]=========================================在所使用的禁用物质中,类固醇激素是较为普遍使用的一类药物。人体自身能合成与分泌的类固醇激素称为内源性类固醇激素,如攀酮。由于在检测方法上有一定难度,一些运动员选择使用内源性类固醇制剂以逃避兴奋剂检测。目前,兴奋剂检测实验室应用同位素比质谱分析方法检测内源性类固醇来源。13C和12C是碳元素在自然界中的天然同位素。有机化合物的来源不同,其同位素比(如13C与12C的比值)也不同。人体自身分泌的类固醇与相同化学结构的类固醇制剂的同位素比不同。应用同位素比质谱分析技术可以测定化合物13C与12C的比值,同位素比用δ(‰)值表示。根据仪器的分析流程和组成部分,本文方法称为[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]/燃烧炉/同位素比质谱([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/C/IRMS)方法。该方法在兴奋剂检测中的应用时间较短,文献方法较为繁琐,本文建立了快速灵敏的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/C/IRMS分析方法。-------------------------------------------------试验材料与方法1. 试剂和对照品试剂:β-葡萄糖醛酸酶,Sigma;其余均为国产分析纯试剂。对照品:睾酮(缩写T)、雄酮(缩写An)、本胆烷醇酮(缩写Etio)、5α-雄烷-3α,17β-二醇(缩写5α-diol)、5β-雄烷-3α,17β-二醇(缩写5β-diol)、孕二醇(缩写PD)购自Sigma公司。2. 样品两名健康志愿者,一名男性40岁,尿样为sample 1;一名女性38岁,尿样为sample 2,均没有服用任何药物。收集其晨尿为阴性对照尿。阳性尿样为世界反兴奋剂机构水平考试所用尿样来自兴奋剂检测中心。3. 仪器[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]/燃烧炉/同位素比值质谱仪(HP6890/DELTA PLUS,Finnigan);高效液相色谱仪(Waters2796,检测器:Waters2996 PAD,自动收集器:Waters Fraction Collector Ⅲ);Anilent 5973i[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱联用仪。4. 方法4.I [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/C/IRMS操作条件色谱柱:HP5毛细管色谱柱,25m×0.2mm i.d.×0.3μm;柱流速:1mL/min(室温);升温程序:60 ℃(2min)一50 ℃/min→255℃一2.5℃/min→280℃(6.5min);进样口温度:260℃;燃烧炉温度:960℃;质谱离子源:EI;参考气:CO2,1.8V。4.2 高效液相色谱仪操作条件色谱柱:ZQRBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:水-乙睛,梯度洗脱(0-18min:乙睛从30%→100%);流速1mL/min;柱温:室温。4.3 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MSD操作条件色谱柱:HP-1毛细管色谱柱,25 m×0.2mm i.d.×0.11μm;柱流速:1 mL/min (室温);升温程序:150 ℃(1min一5℃/min→200℃一30℃/min→310℃(10min)。4.4 样品预处理取尿样2mL,加人1Ml0.2mol pH=7.0的磷酸盐缓冲液和10μLβ-葡萄糖醛酸酶(5000 IU)混匀,在55℃恒温水浴中培养3h,取出后加pH=8.8的碳酸盐固体缓冲剂约100mg 和5mL叔丁基甲醚,振荡萃取,离心后,取出上层有机溶液,在加热的情况下,用氮气吹干,加人50μL甲醇溶解残渣,备用。将上述甲醇溶液置HPLC仪上,依前述色谱条件分离,分段收集流出液,确定收集时间程序。分别将流出组分用氮气吹干,加人50μL环己烷,备用。4.5 对照品溶液的制备分别配制对照品睾酮、雄酮、本胆烷醇酮、5α-雄烷-3α,17β-二醇、5β-雄烷-3α,17β-二醇,孕二醇的甲醇溶液,浓度为1mg/mL。4.6 样品测定4.6.1 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MSD 分析依上述[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MSD仪器操作条件,取样品溶液及对照品溶液进行全扫描,扫描范围m/z 20~450,选择待测物的特征离子,获得SIM图。经对样品中与对照品有相同保留时间的峰进行质谱分析,及与标准品质谱图的对比,确定待测样品的组成。4.6.2 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/C/IRMS分析依上述CC/C/IRMS仪器操作条件,对处理后的样品进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/C/IRMS分析,测得内源性类固醇激素的δ值。
尊敬的客户: 我司自2002年成立以来,一直坚持自主、创新、专业的发展方向,经过多年的努力,我司生产的产品经大量用户的使用和时间的检验,以其高品质的质量、专业的产品、不断创新的技术,赢得了市场的高度认可,持有的自主商标品牌“SAN”、“台雄”,已经受到各界业内人士和海内外客户的高度推崇。 正所谓“树大招风”,我司持有的“SAN”、“台雄”在市场上树立良好声誉同时,个别急功近利、唯利是图者模仿我司的产品外观,打着混淆用户视线的“SHN”商标和做工粗糙的假“SAN”,以假冒伪劣产品鱼目混珠。最近更有某些居心叵测之徒利用公司注册的法律空子,注册:“无锡台雄****公司”、“嘉兴台雄****公司”、“珠海台雄****公司”、“上海台雄教育设备有限公司”等,同时其产品目录、网站等也不断拷贝我司的信息资料;更有甚者,盗用我司专有的“SAN”商标,公然打着“台雄直销价”的名义在外广为散播虚假信息,猖狂制假、贩假,蒙蔽客户,欺骗客户。我们“感谢”这些假“台雄”、假“SAN”为推动“台雄”品牌所作出的“贡献”,但我们不愿看到客户为这些假“台雄”、假“SAN” 、“SHN”产品付出不应该付出的代价,也不愿看到台雄的声誉蒙受不白之冤。为使广大客户利益免遭侵犯、捍卫台雄品牌的尊严,我司特作以下声明: 1、目前上海台雄工程配套设备有限公司除了北京、广州及济南三个办事处外,至今未开设其他分公司及办事机构,网上出现的和本公司名称相近的公司,例如:XX台雄(XX通常为地名)、SHN等,均与上海台雄工程配套设备有限公司无任何关系。 2、我司实验室配件、洗眼器等产品均为本公司工厂自行生产,不存在代工之说。那些假“台雄”、假“SAN”居心叵测,为了达到自己的目的,不惜歪曲事实,在外散播“台雄代工”之谣言。请广大客户不要被蒙蔽。 3、不少唯利是图者仿冒我司实验室配件、洗眼器等产品的外观以及雷同的商标图案,实与我司无任何关联,敬请用户在购买时通过以下三个步骤识别正宗上海台雄: a)《产地证明书》:要求产品供应商提供上海台雄工程配套设备有限公司生产的以“SAN”作为商标的产品,同时在安装之前,请您仔细观察产品上是否有“SAN”商标,并向家具厂商、仪器公司、安装公司等经销商索要盖有上海台雄工程配套设备有限公司红章的《产地证明书》原件。 b)《质量管理体系认证证书》:正宗上海台雄已通过ISO9001:2008质量管理体系最新版认证要求。请索要《质量管理体系认证证书》以确保购买到正宗上海台雄产品。 c)《品质保证书》:请索要盖有上海台雄工程配套设备有限公司红章的《品质保证书》,并请我公司有关人员检验产品的真伪,以保证产品的质量及相关的售后服务。 4、上海台雄工程配套设备有限公司对其生产销售的产品依照法律规定和合同约定提供良好的质量和服务保证,但某些唯利是图者冒用上海台雄工程配套设备有限公司名称或品牌在外承接、洽谈业务,此行为与上海台雄工程配套设备有限公司无关,相关法律责任均由行为方承担,我公司保留向违法者追究法律责任的权利。以下是姚建勇商标注册证无效公告:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012240933_269479_674_
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