京尼平

【名词解释】此处采用最通俗的说法，书上那些复杂的定义，这里不讲究；苷：在母核上，连接一个或多个糖，一般就叫苷，极性较大；苷元：单纯地母核，或者母核去掉一个或多个或所有的糖，就称其为相应苷的苷元，极性较小；比如A结构＝B结构+糖，那么B就是A的苷元形式，A就是B的苷；【发贴背景】1. 分到了化合物就需要对其进行活性测试（没有活性发不了SCI）；2. 一般来说，苷元的活性比苷的活性要好，而我分到的都是些苷；3. 综合第1点和第2点，我要将苷进行水解，得到苷元成分；【如何水解】1. 水解分很多种，酸水解，碱水解，酶水解，等等；2. 酸水解我嫌麻烦，碱水解我不乐意，酶水解我才喜欢；【为何选择酶水解】1. 我有相应的水解酶（β-D-葡萄糖水解酶）；2. 它干净，不需要用到其它试剂；3. 它专一，基本没有其它副产物；4. 它速度，几个小时就可以完成了；5. 最重要的：我很喜欢，我说了算；【水解反应】样品处理：1g样品用少量甲醇溶解后加入200ml水稀释，后加入250mg酶；反应条件：放入40度水浴锅恒温加热，搅拌，全程监测；下图，左为京尼平苷，右为苷元：京尼平；http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221338_325732_1745326_3.jpg【仪器试剂】水：重蒸水 甲醇：色谱纯，天津大茂 HPLC：Waters 高效液相Waters 996 DAD检测器Waters Model 600 controller液相色谱【色谱条件】 色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5μm, 4.6x250mm）流动相：40%甲醇/水（V：V）流速：1.0ml/min柱温：常温（约25度）；检测波长：全波长检测；进样量：5微升；【实验过程】这是京尼平苷反应前的色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221353_325734_1745326_3.jpg反应开始后，大约是半小时（没有确切时间）后取样过滤后进针通过进行峰面积比较，京尼平苷：京尼平＝77：23http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221354_325736_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间（没记时）通过进行峰面积比较，京尼平苷：京尼平＝62：38http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221355_325737_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间（真没记时）通过进行峰面积比较，京尼平苷：京尼平＝55：45http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221356_325738_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间（我真的没记时）通过进行峰面积比较，京尼平苷：京尼平＝17：83http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221356_325739_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间（我真的没记时，反正到午饭的时间点了）已经全部转化完毕了，干燥后等着交样品测活性吧http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221358_325740_1745326_3.jpg【结果与讨论】1. 酶水解，简单、快速、方便、低廉、干净；前提：你有相应的酶（葡萄糖苷酶还是很容易得到的）；2. 由于糖没有紫外吸收，所以所有的谱图均未看到糖信号，利用示差应该是可以检测到的（不过40%的流动相，出峰会很早）；示差我们是有的，但是平衡太麻烦我不乐意开，最重要的是，糖能否检测到跟本实验关系不大；3. 比值为77：23那张图，好像显示一些其它双紫外吸收的小杂质，后来几张图没有了，应该也被水解了；4. 取的样品没有考虑量的多少，吸收基本都在1.0以上（很大），倾向的重点是转化的过程；5. Ultimate XB-C18，很多人问我极限的柱子到底怎么样，看图说话嘛，上面好多图啊，呵呵；6. 另外，这款柱子，其实跟某日本知名品牌柱子（为避免不必要的麻烦，不透露品牌）分离效果差不多，但是呢，柱压要低30%左右，这是最普通最形象的比较结果。7. 价格比较？那得问小S小卢了，反正我是试用。。

1. 发贴背景 京尼平苷——最为典型的环烯醚萜类化合物之一，事实上，去掉最后“之一”两个字，也不为过。 京尼平苷具有众多的药理活性，像什么保肝利胆，像什么抗炎镇静等等，甚至最近的研究表明，它还具有一定的抗老年痴呆活性等等。这么多药理活性，你信么？好吧，我要告诉你，药理作用就是扯淡，平时说着玩一玩是可以的，正式场合。。。还是谈点正经地比较好。 不管怎么样，给个京尼平苷的结构吧。。2. 仪器与试剂 甲醇：天津大茂产的色谱甲醇 水：娃哈哈纯净水 HPLC：忘了抄型号了，汗3. 色谱条件 流动相：A泵甲醇、B泵水溶液； 流速：A泵0.2ml/min、B泵0.8ml/min； 柱温：柱温箱30度恒温； 检测波长：230nm； 进样量：5微升； 色谱柱：Ultimate XB-C18柱(5μm， 4.6x250mm) 某色谱柱一（国产品牌）(5μm，4.6x250mm) 某色谱柱二（国产品牌）(5μm，4.6x250mm) 某知名色谱柱三（国外品牌）(5μm，4.6x250mm)4. 样品处理 京尼平苷标准品由本人提取分离纯化得到，纯度99.5%以上。取少量用甲醇溶解，过滤备用。5. 实验结果某国产品牌一分析结果如图所示http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106131606_299641_1745326_3.jpg某国产品牌二分析结果如图所示http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106131606_299642_1745326_3.jpg某国外品牌分析结果如图所示：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106161328_300126_1745326_3.jpgUltimate XB-C18柱分析结果如图所示：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106161331_300127_1745326_3.jpg6. 小结与讨论（下面将结合我对柱子的实际需求，对色谱柱的柱压、保留时间、柱效进行比较）6.1 柱压比较 国产品牌1和国产品牌2压力较低，双泵泵压均为16MPa左右，单从压力的角度来说，这是一个不错的结果。与之相对的是，某国外品牌色谱柱的柱压，双泵压力均高达26MPa左右，这是让人不太满意的结果。耐人寻味的是，Ultimate XB-C18柱的压力为20MPa，大小左右介于二者之间，且更偏向于前者，这个结果，是完全可以接受的。6.2 保留时间比较 对我而言，分析液相的结果将用于指导制备液相条件的确定。保留时间太短，在降低甲醇比例分离多组分的样品时，此类色谱柱将不具备优势，比如，用10%甲醇水时样品在10min内就出峰，将来要“往后拖”的时候，就只有5%甲醇水等选择了（换柱子不太可能）；相反，如果保留时间太长，“往后拖”分离多组分样品时，制备液相的出峰时间将变得极其漫长，这是不可接受的。从分析结果来看，如果要购买制备色谱柱，本人将不考虑国产品牌2（这段估计看着很费劲吧，汗）。6.3 柱效比较 本人极其厌烦理论塔板数一类的东西，简单明了干净利落是我追求的风格。关于柱效，最简单的说法就是，峰宽越窄峰高越高柱效越好。从图中可以看出，国产品牌1柱效过低，明显不适合用于分离此类化合物（国产品牌2色谱柱有点旧，此处不参与比较）；Ultimate XB-C18柱的柱效跟某知名国外品牌基本相当，或者说，略好。7. 结论 通过以上比较得出结论，以后在选择制备型液相色谱柱（限文中提到的4种品牌）的时候，某国产色谱柱保留时间太短，将不予考虑；另一国产色谱柱由于对此类样品的分离柱效太低，将不予考虑；在对柱压没有太大要求的情况下，Ultimate XB-C18和某国外品牌将成为考虑的对象。如果是对柱压有要求（嫌高），那么Ultimate XB-C18将会成为唯一的选择。