衣康酸锌

2017年9月3号，禾工实验室收到一份来自浙江某单位寄来的样品（衣康酸），禾工承诺为首次申请样品检测的用户免费测试两个样品，并在7天内提供检测服务报告。 衣康酸的性质非常活泼，除可自身聚合外，也可以和不同数目的其他单体聚合，形成聚合高分子，因此广泛应用于化学合成行业。 那衣康酸的含量如何检测呢？又会通过哪些设备进行检测呢？下面我们就来回顾一下样品的整个分析过程。 本次样品检测人员上海禾工科学仪器有限公司技术部吴经理； 实验检测设备1.禾工CT-1Plus多功能全自动电位滴定仪；2.651 PH复合电极；3.搅拌台，100mL滴定杯； 实验试剂滴定剂：0.1mol/L氢氧化钠溶液；溶剂：去离子水；样品：衣康酸； CT-1Plus电位滴定仪产品参数终点模式：智能判断终点终点判断体积：前0.5；后0.3最慢滴加体积：7uL （空白滴定5uL）每滴间隔时间：600ms终点判断微分值：200斜率计算间隔：4 （空白滴定2）最高滴定速度：4 （空白滴定1）搅拌速度：200 本实验通过采用中和法测定含量；第一步：空白滴定，在滴定杯中加入60mL去离子水，用滴定进行滴定，滴定终点体积即为空白体积。空白滴定记录：样品名称去离子水测定次序样品量终点体积160mL0.0347mL260mL0.0349mL分析时长：约5min平均值：0.0348mLRSD值： 0.406%空白体积=0.0348mL 空白滴定图谱 第二步：标定滴定剂浓度，精确称取约0.2g的105℃干燥后的邻苯二甲酸氢钾，溶于60mL的去离子水中，用滴定剂进行滴定，滴定结束后计算滴定剂的实际浓度。滴定剂标定记录：样品名称邻苯二甲酸氢钾测定次序样品量终点体积含量结果10.190910.8052mL0.0868 mol/L20.202011.4443mL0.0867 mol/L计算公式：R=4.8967*样品量/（终点体积-空白体积）分析时长：约5min结果平均值：0.08675 mol/LRSD值：0.08%标定结果=0.08675 mol/L 标定图谱第三步：进行样品测定，精确称取0.1g的衣康酸样品溶于60mL去离子水中，用已知浓度的滴定剂进行滴定，得到最终含量。样品测量记录：样品名称衣康酸测定次序样品量终点体积含量结果10.1196 g21.1843 mL99.7898 %20.1120 g19.8410 mL99.7930 %计算公式：R=0.08675*（终点体积-0.0348）*65.05*0.1/样品量分析时长：约5min结果平均值：99.7914 %RSD值：0.01% 测量图谱 结论：采用CT-1Plus自动电位滴定仪测量衣康酸，滴定曲线突跃明显，分析结果可以得到良好的测量精度及测量重复性。 CT-1Plus电位滴定仪除了进行常规的电位滴定如PH酸碱滴定、氧化还原滴定、沉淀滴定和络合滴定等，还可以进行通过颜色判断终点的传统滴定，全方位覆盖了所有通过滴定方法来进行的检测分析。禾工提供免费为首次申请检测的用户免费测样两个样品，也欢迎各位光临上海禾工科学仪器有限公司与禾工实验室与明星产品零距离接触。

尊敬的女士/先生： 感谢您选择百康分析仪器，并对您长期以来给予我们的支持表示深深的谢意! 应广大用户的要求，大昌华嘉公司&ldquo Biochrom氨基酸分析仪使用技术培训&rdquo 将于 2011 年9月26 日至9 月28日在 上海 举行，届时将由应用专家与大家共同探讨氨基酸技术及专业软件的应用。 培训内容： 一、氨基酸分析仪简介 二、氨基酸分析原理 三、样品的制备 四、影响氨基酸分析的各种因素 五、应用 六、软件的讲解 七、仪器的维护保养 八、客户交流 九、答疑 备注： 1、请于2011年9月26日早9：00准时到达会场。 2、每个用户需交1000元/人培训费。 3、请您收到通知后在9月5日之前将报名表回执回传，以便为您安排接送、住宿等事宜。如果您能对这次培训班提出意见和建议，是对我们工作的最大支持和帮助。在此一并感谢！ 4、具体地址：上海市浦东新区东方路710号汤臣金融大厦3楼会议室。 5、此次培训大昌华嘉公司负责提供相关的培训资料、场地、仪器等，中午负责工作餐，其他住宿、交通等生活费用自理。 大昌华嘉商业（中国）有限公司 2011年8月26日 附： 回执单 姓名 性别 人数 单位名称 详细地址 邮政编码 电话 传真 E-mail 您希望通过本次交流会，能够解决您的什么问题？ 备注：请尽快E-mail 或传真确认 联系人：胡小姐 电话：4008210778 021-53838811*126 E-mail: joyce.hu@dksh.com 传真：021-33678466

近日，北京大学化学与分子工程学院、北大-清华生命科学联合中心王初课题组在Chemical Science上杂志上发表了题为“Chemoproteomicprofiling of itaconations in Salmonella”的论文，并且被选为“Pick of the week”文章。在这项工作中，研究学者发展了新型衣康酸修饰化学探针工具，并结合定量化学蛋白质组学技术，首次实现了在病原微生物沙门氏菌中衣康酸修饰位点的大规模直接鉴定，并且进一步揭示了衣康酸通过共价修饰关键代谢蛋白从而对细菌生长过程的抑制作用。　　衣康酸是近些年来被发现具有显著抗炎抗菌活性的代谢物分子，它在病原菌侵染或者脂多糖刺激的炎症巨噬细胞中会大量产生，浓度可达到毫摩级别，并广泛参与到抗炎信号通路中。由于衣康酸具有共轭不饱和双键结构，它可以通过迈克尔加成反应共价修饰蛋白质中的半胱氨酸残基，通过影响底物蛋白的活性和功能从而调节宿主炎症反应过程。因此衣康酸修饰蛋白的大规模鉴定对理解其炎症和抗菌调节机理具有重要的意义。在宿主巨噬细胞层面，此前王初课题组分别发展了基于非天然糖的竞争性探针和生物正交的衣康酸探针，并结合定量化学蛋白质组学技术对炎症巨噬细胞中的衣康酸修饰进行系统的分析，揭示了衣康酸可以修饰ALDOA，LDHA、GAPDH和RIPK3等蛋白，调节糖酵解和细胞坏死等通路。这些研究为理解衣康酸在巨噬细胞炎症反应中的作用机制提供了丰富的数据支持。然而，在病原菌层面，衣康酸对于细菌的调控机制还不是特别清楚。目前普遍认为衣康酸可以竞争性抑制细菌中某些特有的代谢酶(例如异柠檬酸裂解酶、丙酰辅酶A羧化酶等)，来影响细菌代谢。近些年也有研究发现衣康酸可以通过与鸟苷三磷酸酶GTP酶Rab32作用，限制囊泡内病原菌复制，协助宿主防御沙门氏菌。细菌还会适应宿主产生的衣康酸，通过改变自身代谢，促进细菌表面生物膜的形成增强自身的耐受能力。衣康酸和病原菌之间具有复杂的作用，而衣康酸对细菌中蛋白的共价修饰和功能影响还研究甚少。在本工作中，作者结合新型衣康酸修饰探针和定量化学蛋白质组学技术，首次在病原菌中对衣康酸修饰的蛋白进行了鉴定。　　作者首先发现此前在巨噬细胞中表现良好的生物正交探针ITalk并不能在沙门氏菌中产生明显的标记，因此本工作设计并合成了几种不同结构的衣康酸生物正交探针，并评估筛选了它们在沙门氏菌蛋白质组中标记的效果。作者发现，带有酰胺连接的短链C3A探针标记效果更好，并且和衣康酸具有明显的竞争。在进一步的小分子水平反应、蛋白组水平标记和抗菌功能验证后，作者确认了C3A能模拟衣康酸的作用效果。　　结合基于还原二甲基化标记的定量化学蛋白质组学技术，作者利用C3A探针在沙门氏菌蛋白质组中大规模鉴定了衣康酸修饰蛋白，作者设置了三组标记样品，得到两个比值，一个为扣除非特异性吸附，另外一个为衣康酸竞争组，一共鉴定到1230个蛋白，其中扣背景比值大于10、竞争比值大于1.5的高置信衣康酸修饰靶标蛋白有197个，这些蛋白被定义为衣康酸修饰蛋白。这些蛋白中包括很多在沙门氏菌中参与重要代谢过程的功能蛋白酶，其中最为显著的一个蛋白是异柠檬酸裂解酶 (ICL)。　　结合TOP-ABPP技术，作者进一步对衣康酸修饰位点进行大规模直接鉴定，通过两次生物学重复实验，鉴定到781个蛋白上的1319个修饰位点，通过与修饰蛋白进行比对，作者发现其中129个蛋白被鉴定到位点，其中61个蛋白含有一个以上修饰位点，35个蛋白含有两个以上修饰位点。作者选取了一些具有重要功能的蛋白进行了位点突变实验，通过突变后探针标记信号的消失证实了这些修饰位点的可靠性。　　作者在异柠檬酸裂解酶ICL，共鉴定到5个修饰位点，而突变实验显示主要标记位点在该蛋白的活性位点Cys195上。作者进一步对ICL上存在的衣康酸修饰进行了深入的生化实验验证，通过基因敲除回补实验以及纯蛋白酶活实验，验证了衣康酸是通过对ICL活性位点195位半胱氨酸上的共价修饰影响酶活，产生的抑菌作用。有趣的是，作者还发现了ICL中第318位半胱氨酸也会被衣康酸修饰，而该位点的突变会影响ICL的热稳定性和活性。　　总之，本工作首次报道了适用于沙门氏菌标记的衣康酸生物正交探针，并结合化学蛋白质组策略实现了衣康酸修饰位点的直接鉴定，不仅在沙门氏菌中提供了一个丰富的衣康酸修饰蛋白的数据库，还揭示了衣康酸通过共价修饰从而抑菌的新机制，这对于进一步理解衣康酸的抗菌功能有着重要意义。本文的通讯作者为北京大学化学与分子工程学院、北大-清华生命科学联合中心的王初教授，其指导的前沿交叉研究院北大清华生命联合中心2016级博士研究生张艳玲为本文的第一作者。王初课题组博士毕业生秦为，研究生刘东阳和博士后刘源等合作者为本课题做出了贡献。该工作受到科技部蛋白质重点专项、基金委国家杰出青年基金、重大研究计划培育项目等项目经费的支持。　　原文链接：　　https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2021/sc/d1sc00660f　　文献引用：DOI: 10.1039/d1sc00660f