色谱填装系统

1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以?反冲后是正着用，还是反着用?具体到各型号柱子不仅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等，最好都有解释。 　　答：一般的正相、反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。 　　2、我在做方法开发的时候，用乙腈和水作为流动相，在调整梯度的时候发现，刚开始用60%乙腈，RT为2.5分钟，调到40%乙腈，RT没有变化，30%也没有变化，一直调到20%的时候，RT突然变到了约13分钟，请问这是什么原因?我用的是离子交换柱。 　　答：离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质?离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质?水相是什么缓冲盐?对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护?为什么要这样做? 　　3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护?为什么要这样做? 　　答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。 　　4、测定多肽，一般采用什么柱子?流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子? 　　答：分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。 　　5、氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复? 　　答：氨基柱测酸性样品，应该是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨)，之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1%。 　　6、色谱柱的技术都有哪些?比如封尾等，这些技术在应用时都体现在哪里? 　　答：色谱柱技术包括填料技术和装柱技术，填料技术自不待言，填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单，不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出紧密、稳定、均一的柱床，更多是一门艺术，需要经验积累。国内和国外想比，我认为色谱柱的差距在于：国内公司以前都不会自己开发填料，一般买国外现成填料装柱，买到的填料质量控制权不在自己手里。另外因为装柱历史短，经验积累少，装柱工艺也没有完全达到国外水平。另外，对色谱柱性能很关键的基础材料-----裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比，差距很大。 　　7、色谱柱技术的差距在哪里? 　　答：液相色谱柱装填实际上是有一定技巧和程序，可能还有一些运气。一般使用高压匀浆方法装填。也就是能让填料在溶剂内均匀地悬浮。然后用瞬间高压压实，这实际上用到了不同比例的匀浆液体，和合适的压力。压力太大，颗粒破碎，压力太小，塔板数少。同时压力需要稳定，不然分布不均，拖尾严重。同时还有头上平整程度。套上套，就可以用了。 　　8、柱子在什么情况下可以清洗一下筛板呢?原来也讨论过这个问题，我也拆下来清洗过，但我看到柱前段的污染更甚，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的筛板安装上去。问题解决了，但使用寿命会不会减少呢? 　　答：柱头污染了，就取出污染的，再装一些填料。因为加入你刮了些填料，那么微观的塔板数就少了。假入你刮得不多，仅表面，可能就是一些脏物，所以，问题解决。但是今后还会有同样问题，再挂，那么不小心刮，影响柱效。建议还是装一个预柱。 　　9、如果柱子取下来放置一段时间，需要做什么保护吗? 　　答：对一般的反相柱，也就是洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中，然后用堵头塞紧柱两头，以免保存溶剂挥发，应该不需要做特殊的保护。 　　10、流动相中加入适量的四氢呋喃可以改善峰形的机理是什么? 　　答：《高效液相色谱方法及应用》于世林编著的上面说：甲醇为质子给予体、乙腈为质子接受体、四氢呋喃是偶极溶剂，应该除了极性影响，还有另外的影响因素，至于分离机理，还是比较复杂的，不能看成是个万能方法。 　　11、关于色谱柱的填装问题!我个人认为现在色谱柱的填装一般有3种情况：1.国外生产填料并填装完成成品卖到国内 2.国外生产填料，国内填装销售 3.国内生产填料，国内填装销售。一般情况下，第1种情况卖的最贵，也质量最好!可是我就不明白了：如果是填料的生产很复杂的话，那么填装上国内也跟不上去吗?为什么换在国内填装就会出现或多或少的一些小问题呢? 　　答：国内填装会出现质量小问题，和国内目前普遍做事没有国外严谨有关吧。如果工艺技术上没有问题，又能制订并切实执行一整套严格的生产质量管理措施，国内填装和国外填装并无区别。 　　12、什么原因导致峰比原来大，而且出现的早? 　　答：过快、过大的峰通常是由于从分流口和隔垫吹扫口排出的载气减少，而更多的进入色谱柱 因此增加柱头压力，可降低分流比。检查分流出品的气体流量，如需调整分流比则对调整此流量。如果问题依然存在，可卸下并清洁分流口。这个问题也可能由于柱头压调节阀有问题而引起。 　　13、预柱或保护柱用还是不用的问题!原来分析中药品种时，我一直都是用保护柱。但来到新公司后，发现大家都没有使用，几个实验室连保护柱都没找到一个，也就是说大家从来都没有用过。后来问一个老员工，说是有可能影响药品分析。我就想问：安装保护柱后会影响样品分析吗?我们做的大多是头孢类的抗生素。 　　答：应该这样说，加上保护柱，肯定有利于保护色谱柱不受一些颗粒物质的堵塞，肯定有害于分离度和柱效，因为保护柱中间有着死体积的存在，但是如果保护柱接得好，并且尽量控制其匹配性和经常更换，分离度和柱效应该影响并不大。头孢类的抗生素也要看到底是原料药还是制剂喽，有些原料药，可以根据色谱柱的损耗选择添加预柱(中间是个筛板)，制剂的话，如果有辅料严重干扰或者流动相盐分比较大，那还是最好配个保护柱。 　　14、用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水，经常出现停或进气泡这是什么原因? 　　答：水/甲醇比例在55：45时，黏度和柱压有个极大值。50：50接近了这个极值，柱压是比较高的，但影响柱压最大的还是填料粒径和色谱柱内径，你这个实例中不知用的什么规格的色谱柱?系统压力高，可能会因溶剂泵中的过滤头供液速度跟不上而导致气泡进入系统，停机也应该是因为气泡进入压力下降的原因，可考虑更换液体通量更大的过滤头。 　　15、何时需更换隔垫或衬管? 　　答：通常比较好的隔垫至少能保证100次进样不发生问题。当色谱特征说明衬管有问题时，需要更换衬管。影响隔垫寿命的因素有注射器尺寸、进样口温度和压力，当然受压力影响的程度比较小。影响衬管寿命的因素通常是样品的清洁度。应该根据仪器维护历史记录来选择色谱需要的特定程序。 　　16、想请您具体说明一下反冲色谱柱的方法，是不连检测器吗? 　　答：反冲就是将柱子反向连到系统中。因为有污染物反冲出来，当然不连检测器，出液端直接接到废液瓶就可以。 　　17、如果不使用不锈钢接头，而改用PEEK头，是否可以完全解决接头匹配问题? 　　答：色谱柱接头其实大都不是色谱柱厂商自己生产的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的标准相互之间不统一，那色谱柱接头的标准就统一不起来。不过一般这个问题也不难解决的，换个接头就可以了，而且现在有了万用接头，可以配所有不同类型的柱头，不泄露，连接死体积又很小。 　　18、有的厂商为避免堵塞，使用了较大孔径(2-5um)的前筛板，这种情况反冲会将填料冲出。厂商一般在使用说明书中会说明前后筛板的孔径吗? 　　答：厂商如果前后筛板孔径不对称，肯定会在说明书里特别提到的。 　　19、我在做多肽药物时遇到下列问题：1).基线不稳定波动大，流动相A：1%TFA水溶液，B:1%TFA乙腈溶液，检测波长210nm 流速1.0ml/ml，什么原因?怎么解决?TFA有什么作用?流动相中不加TFA见不到主峰，基线良好。2)做完肽类样品时怎么冲洗C18比较好 3)药典上介绍测定分子量大于2000的样品，选择柱子填料的孔径为30nm，30nm与10nm对结果有什么区别? 　　答：应该是起&ldquo 离子对&rdquo 的作用吧。在做多肽类样品的时候，300A孔径的填料相对100A孔径肯定要选择性好点，也就是分离度相对比较好点。流动相加入TFA，在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸(TFA)作为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方便地从制备样品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于200nm，对多肽在低波长处的检测干扰很小。 　　20、waters Atlantis C18柱可以用较高比例的流动相，那麽用完后应该怎麽清洗?在什麽体系中保存比教合适? 　　答：反相柱都可以用下面通用的方法清洗维护：流动相中不含缓冲盐分析完成后，用甲醇(或乙腈)：水=90：10反向冲洗色谱柱45min流动相中含有缓冲盐，分析完成后，先用甲醇(或乙腈)：水=10：90反向冲洗45min，然后再用甲醇(或乙腈)：水=90：10反向冲洗色谱柱45min (注意：甲醇(或乙腈)：水=10：90容易长菌，使用时间不可超过3天) 水性柱保存体系也不特别：短期保存在所用的流动相中(不含缓冲盐)，中长期保存在纯甲醇(乙腈)或80%的甲醇(乙腈)/水中。 　　21、正相硅胶柱一般保存在什么溶剂里面比较合适? 　　答：短期和长期都建议保存在正相测定所用的流动相中，一般是正己烷和极少量的异丙醇。 　　22、磷酸盐缓冲盐渗透力强，为什么，是因为与醋酸盐，枸椽酸盐相比，基团小吗，使用磷酸盐缓冲液与其它缓冲液相比，会使色谱柱寿命缩短多少? 　　答：经常用磷酸盐，在其它条件差不多一样的情况下，柱子寿命肯定比不用磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有不可取代的优点吧，否则不可能现在大部分人还在用。 　　23、反相离子对色谱法中，离子对是如何起作用的，是离子对试剂的非极性端溶解在填料的非极性端里，解离端伸向流动相，对含胺化合起离子交换作用，还是样品与离子对生成紧密的结合物，离子对试剂掩藏化合物中的极性基团，还是这种结合物是在解离与结合的动态平衡之中? 　　答：首先离子对试剂的解离端和目标离子形成离子缔合物，降低其极性，这样就能较好的在柱子上保留。再者，根据疏水效应理论，离子对试剂的疏水端是很容易和C18链相互作用的，这样更容易在柱子上保留，所以我认为离子对试剂作用是混合保留机制，即纯粹的反相保留和离子对保留机制共同作用。 　　24、四烷基季铵盐(如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等)在水中电离后，也形成了类似N+H(CH2CH3)3的结构N+(CH2CH2CH2CH3)4，这种结构也能有效的与Si-O-产生较强的静电作用，此类离子对用的比较少，但它的作用仅是掩藏Si-O-吗，它对物质的保留性能有何影响，实验中发现检测胺化物时，流动相中加入磷酸缓冲盐有增加物质保留的趋势，而加入三乙胺则会降低物质的保留能力? 　　答：前面提到的四丁基氢氧化铵等离子对试剂确实不如辛磺酸钠等极性基是阴离子的离子对试剂用得普遍，原因是酸类极性物质很容易通过降低pH值的方法提高在反相色谱中的保留能力，降低pH可抑制酸的电离，使酸处于中性状态而与疏水碳链的作用力增强。而碱类分析物则受硅胶基质pH上限的严重影响(以前上限是8，后来抬到10，直到最近杂化硅胶才将pH上限提到12左右)。铵盐类离子对试剂确实有辛磺酸钠等所不具有的屏蔽硅醇基作用，但其主要作用还是疏水端和疏水固定相结合，外露的阳离子亲水端和酸阴离子作用，从而提高其保留能力。当然同样还有第二种解释机理，离子对试剂先和分析物结合，掩藏极性基，从而提高极性分析物在反相色谱中的保留能力。而且丁基比辛基疏水性差，这种情况下，认为后面的结合机理占上风的可能性更大。检测胺类化合物，加入三乙胺预先和硅醇基结合，胺和硅醇基作用被三乙胺取代，保留下降是肯定的。 　　25、同一根色谱柱在分析完三聚氰胺后，再分析苯甲酸、山梨酸、糖精钠时为什么保留时间会提前? 　　答：色谱柱被强保留物质污染后，保留时间提前和滞后的情况都有，具体要看污染物的性质，还要看分析物、固定相和污染物三者共同作用的情况，情况比较复杂，有时候比较难预测是提前还是滞后。不过你平时维护的时候，注意在测定后将污染物用有机溶剂反冲清洗，就可以减轻或避免这种情况的出现。建议每个分析方法用专门的色谱柱，长远看，这样更节省色谱柱的费用。 　　26、HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题?1)为什么要衍生?2)衍生化的分类?3)进行衍生，适用的化合物有哪些?4)进行衍生化的要求有哪些?5)柱前衍生和柱后衍生的优缺点? 　　答：色谱技术中的化学衍生法系指在色谱过程中用特殊的化学试剂(一般称为衍生化试剂或标记试剂)使样品成分转变相应的衍生物之后进行分离检测或进行检测的方法。目的为：1.将紫外&mdash 可见强吸收功能基团引入被检测对象或将其转变为荧光衍生物，以提高检测灵敏度 2.提高对分析样品的分离和选择性。从是否与HPLC系统联机的角度，化学衍生法分为在线on line)与离线∣Off line)两种。从发生衍生化的场合，分为柱前衍生法pre-column derivatization)与柱后衍生法(post-column derivatization)两种。目前，在HPLC中，以离线的柱前衍生法(简称柱前衍生法)与在线的柱后衍生法(简称柱后衍生法)使用居多。 　　27、多个样品不好不离的时候，请问该怎么通过选择合适的柱子来提高分离度? 　　答：提高分离度可从三个主要影响因素来考虑，柱效、选择性和保留因子。可通过减小填料粒径和增加柱长提高柱效 选择性和固定相选择以及pH条件有关，通过选择合适的色谱柱和合适的pH，可以提高选择性 有时候适当延长出峰时间增加保留因子，也可提高分离度。 　　28、苯基柱，氰基柱该什么时候考虑用? 　　答：苯基柱用于含苯环的芳香族化合物的测定时，具有较高的选择性。CN柱可作为一个保留能力最弱的反相柱使用，也可作为一个活性降低的正相柱使用(保留时间比硅胶柱和氨基柱低很多)。 　　29、同样类型柱子还有长度，粒径等差异，这些该怎么去选择? 　　答：长度和粒径都是用来改变柱效的，选择原则是够用就好。　　30、我前几天刚刚装上一个新的C18柱，在进样之前我用100%的甲醇冲了半个多小时。刚才看到上面写的要活化什么的?不知道我只冲洗半小时就开始用对柱子有没有影响?对出峰什么的有没有影响呢? 　　答：不是所有的测定，都需要对新柱子用所测样品老化。但先按方法程序进样几针，观察到峰面积保留时间不再有明显变化，再开始正式测定，这是一个好习惯。按你现在的做法，如果第一针和第二针的峰面积、保留时间没有变化，就继续做没影响吧。 　　31、现在色谱柱和仪器的接口还没有标准化吗，除了检测池的出入管较小外，色谱柱的接口与PEEK头不匹配的有哪个型号的色谱柱，以后使用的时候需要注意一点。同时发现使用过金属接头的色谱柱再换成PEEK头，常易漏液，这是因为金属头易使色谱柱接口变形吗? 　　答：色谱柱接头其实大都不是色谱柱厂商自己生产的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的标准相互之间不统一，那色谱柱接头的标准就统一不起来。不过一般这个问题也不难解决的，换个接头就可以了，而且现在有了万用接头，可以配所有不同类型的柱头，不泄露，连接死体积又很小。 　　32、普通的C18柱能作为正相色谱柱使用吗?正相色谱体系中最常用也最普通的是那种色谱柱。正相柱在使用过程中与反向柱相比有什么需要注意的地方? 　　答：普通C18柱作为正相柱使用，我还没听说过。正相色谱分离模式是指固定相的极性比流动相的极性大，反过来，流动相极性大就是反相。C18固定相属于疏水性相对比较强的，疏水性强就是极性很弱，应该找不出极性比它更弱的流动相了。正相体系常见的柱子有：硅胶柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱，最普通的应该就是硅胶柱。正相柱和反相柱比，最需要注意的是水分，正相柱对水分非常敏感，流动相中水分含量的些微变化对保留时间影响很大，因此正相柱测定前平衡时间需要几个小时甚至更长。 　　33、色谱柱的柱头类型与不锈钢毛细管接头有6种连接方式(在讲义里面提到)，那么我们用户一般是液相色谱仪是固定某一个厂家，而是根据样品检测需要更换不同类型的色谱柱，那么怎么判断我所购买的色谱柱是否与不锈钢毛细管是否匹配呢，我之前只是知道安捷伦和waters都有规定他们自己家的柱子与自己家的仪器配套是最合适的，而其他厂家的色谱柱都很少提及，在不知道的情况下，我们该怎么选择? 　　答：不锈钢毛细管接头有个缺点，用过一次后卡匝位置和距离毛细管末端的长度就固定死了。如果下次用的色谱柱的柱头接口深度和原来的不同，就容易产生死体积和泄漏。产生的死体积一般不大，如果只引起柱效的稍微下降而没引起拖尾，这个问题就容易被忽略。引起大家关注的是泄漏，如果用了新柱子，发现和毛细管的接口处有泄漏，就可以判断是接头的匹配问题。最好的判断方法还是：询问一下厂商色谱柱柱头的类型和柱头接口的深度，然后和毛细管接头的规格比较。如果用PEEK接头，发生问题的情况就大大减少，因为PEEK接头卡匝位置是不固定的。接头与色谱柱的匹配，并没有在实际色谱应用中造成很大的问题，有很多人都没有关注到这个问题。一方面原因是使用PEEK接头的情况很普遍，另外如果发现不匹配，换个毛细管接头还是非常方便的。 　　34、相对于气相色谱，液相的优势在哪里?做防腐剂分析时，流动相加入乙酸铵才可以出峰，原理是什么? 　　答：液相和气相相比的优势有很多，我认为主要在于应用范围更广。气相只限于容易气化的低分子量物质的分析测定，对象大部分是基础化工原材料 而任何能溶解于某溶剂的物质都能用液相分析，适用对象是分子量从几十到几万的广大范围。在制药、化工、环保、食品和刑侦等诸多重要领域，液相都已成为主导的分析分离工具。也有两者都能应用的交叉情况，但液相的制样更简单。液相色谱的出现克服了气相色谱不能直接用于难挥发、热不稳定及高分子化合物的弱点。 　　35、您提到&ldquo 磷酸盐缓冲盐渗透力强，有加快硅胶溶解的副作用，它的存在会降低pH使用范围。&rdquo ，既然这样，经常使用，柱子寿命是否也下降的快呀? 　　答：经常用磷酸盐，在其它条件差不多一样的情况下，柱子寿命肯定比不用磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有不可取代的优点吧，否则不可能现在大部分人还在用。 　　36、CN柱的保存需要在低温条件，但是又不能太低，使固定相冻结，怎么控制这个温度?怎么判断固定相是否被冻结?固定相冻结后会是什么样的现象? 　　答：所谓低温储存，就是放到阴凉处或者放到冰箱的冷藏室。储存液只要不是纯水，冰点都比较低，纯甲醇的冰点是零下90度以下了。 　　37、我们测试样品时，经常会关心柱压是否太高，但是在购买色谱柱时，并没有说每一根色谱柱的最大使用压力是多少?针对这样的情况，用户怎么判断柱压是否超过该柱的极限? 　　答：装柱时的压力比使用时高很多，所以柱压对色谱柱本身在使用时没有极限问题存在，倒是一般仪器有个40Mpa的上限。如果色谱分离度还能满足分析方法要求，柱压只要仪器能承受就OK吧。 　　38、使用缓冲液不当，使硅胶溶解并重新形成粉末后，会出现什么样的异常情况?怎么处理? 　　答：出现异常就是柱压升高。小粉末在流动相不断冲洗带动下，最后会聚集在柱子出口端，沉积在后筛板。处理方法只有拆下后筛板进行清洗或更换，但这样做会影响到柱床，处理后柱效会下降。 　　39、今天才知道滤膜的材质分了这么几种：再生纤维素、聚四氟乙烯、硝酸纤维和醋酸纤维等，之前只知道有有机系和水系之分?各种不同材质的滤膜适合于什么样的样品? 　　答：再生纤维素膜：具有蛋白质吸收低，适用于水溶性样品和有机溶剂 聚四氟乙烯：适用于所有有机溶剂，酸和盐 尼龙66：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸，70%的乙醇，二氯甲烷，不适用与二甲基甲酰胺 醋酸纤维：不适用有机溶剂，特别适用水基溶液。 　　40、我原来遇到个这样的问题，一直不知道原因。刚拿柱子做，色谱条件是成熟的，绝对没问题，但是该条件下保留的物质变的不被保留，比如本来保留时间15分钟却怎么调比例都是2-3分钟就出峰了，维护后，下次再使用又正常了，什么样原因啊? 　　答：最大可能是发生相塌陷了。C18柱和高密键合封尾的C8柱，在高含水流动相下会发生相塌陷，后果就是保留能力大幅下降。用有机相比例较高的流动相冲洗后，又可恢复正常性能。 　　41、UPLC色谱柱可以反冲吗?HPLC的色谱柱可以简单反冲，但是，UPLC的色谱柱.也是一样的吗?如果压力偏高，该怎么办? 　　答：如果两端筛板孔径对称，UPLC柱应该也是可以反冲的。发现压力偏高，当然也可以用反冲清洗的方法维护，UPLC柱和普通色谱柱比，只是压力高一点，不应该有什么特殊吧。 　　42、常规LC的柱子粒度小，柱效高，现在有3.5um的常规柱，不知道用3.5um*250的压力与4.6um的压力相差多少? 　　答：一般柱子4.6mmx250mm指的是其内径和长度。粒径才用um的单位，但一般标的是5um，也有3.5um的。其它条件一样，光粒径是3.5um和5um的柱压差别，理论上3.5um柱子的柱压是5um柱子的(5/3.5)平方倍数，即2.04倍，简单说就是2倍。 　　43、因为不知道流动相已走完，液相色谱柱空走了大概一晚上，请问这种情况下柱子还能用吗?如果可以应该如何再生? 　　答：能用的!可能柱子里会有气泡进去，但之后多用流动相冲冲，看到基线稳定，就没问题了。用色谱柱的保存液低流速长时间冲洗，然后再检测一下柱效，看柱子是否恢复，液相最好设置一下最低压限，这样就不怕流动相走光而会损伤色谱柱。 　　44、在梯度洗脱的时候，如果整个时间程序越长，保留时间的重现性越差，尤其是后出的峰重现性差更明显，我猜估计是流量本身的误差引起的，但是怎么尽量避免这种情况的出现，使保留时间重现性更好?而且最好将THF冷藏、干燥和避光保存，使用前最好能检测一下过氧化物的含量。

铜标、银标、金标快速色谱柱RediSep 快速色谱柱产品是Teledyne ISCO按照ISO9001质量管理认证体系在美国制造的，它以高质量和稳定的性能而wen名，RediSep有三个版本，旨在满足不同实验室的需求，最新的RediSep 铜标色谱柱加入到产品大家庭，为注重成本、用于反应后纯化的实验室提供了快速、安全和持续稳定的性能。 银标色谱柱，20年前投放市场，已被市场证明可用于各种目的应用，也包括天然产物的分离。RediSep 金标色谱柱，有着大上样量和杰出的纯化效果，对于最终产品，也包括异构体分离中消除了任何返工的可能。精确的填装，确保性能一致所有RediSep正相硅胶柱都是全自动填装的生产过程，确保柱 - 柱和批 - 批间的一致性，与手工填装色谱柱或玻璃柱相比，机器填充硅胶使得填料更紧密、更密集的硅胶柱，以产生更高分辨率的纯化效果，因为更紧凑的色谱柱可以负载更多样品，而不产生拖尾，优化了目标化合物的纯度和收率。关于RediSep色谱柱产品，请咨询您的Teledyne ISCO销售代表。应用●铜标柱： 初始反应、合成反应后的洗脱。在大样品量实验室或科研过程中使用，为制备型高效液相色谱前处理●银标柱： 常规的纯化柱；也包括天然产物的提取、香料、食品化学●金标柱： 终产物的纯化；包括同分异构体特点●RediSep色谱柱：用于闪式色谱仪，可在一定压力下的安全使用●色谱柱自动填装过程，填料密集、密实保证始终如一的质量●z越的分离率以得到高纯度的目标化合物●高分离率允许通过增加样品的载荷以提高生产率●批次间的再现性保证了同一目标化合物以后的纯化和之前的运行结果一致填料参数快速色谱柱参数新品活动期间（2021.4.21-6.15），所有铜标柱折上折，快来订购吧！

前言 自2004年Waters公司推出Aquity UPLC以来，超高效液相色谱一直震动着液相色谱市场的脉搏，而此番安捷伦科技二度推出超高效液相色谱产品，并且打出了“安捷伦终结了有关 UHPLC 的争论”宣传语，无疑给已经竞争激烈的液相色谱市场以更强烈的冲击。 安捷伦科技生命科学与化学分析事业部大中国区总经理牟一萍女士 笔者（以下简称：Instrument）带着种种疑问参加了安捷伦科技在北京新世纪日航饭店的新品发布会，并在会后与安捷伦科技生命科学与化学分析事业部大中国区总经理牟一萍女士、液相产品应用经理安蓉女士、医药事业市场部经理庄晨杰先生就Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统的研发背景、产品的技术特点、市场推广等进行了交流。 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统 Agilent 1290 Infinity超宽的工作范围给用户无限可能 Instrument：自2004年UPLC问世以来，超高效液相色谱一直是各公司的研发重点，安捷伦也于2006年推出了Agilent 1200高分离度快速液相色谱系统（RRLC），时隔3年，安捷伦又推出Agilent 1290 Infinity液相色谱系统，能否请您介绍一下Agilent 1290液相色谱系统研发背景、主要的技术特点及应用领域？ 安蓉女士：首先介绍一下研发背景。小颗粒填料在速度、分离度和灵敏度上的优势早已为人所知。安捷伦早在2003年就推出了亚二微米填料的ZORBAX高分离度快速高通量柱（RRHT），该色谱柱在Agilent 1100 液相色谱系统上能够使用，并且也能体现出亚二微米填料的优势。随着填料等相关技术的不断发展，我们原来的系统虽然可以在一定程度上体现小颗粒填料的优势，但是由于受到硬件的限制，小颗粒填料优势的发挥受到一定的限制。2006年，Agilent 1200推出了具有更高耐压限和灵活性的高分离度快速液相色谱系统（RRLC）。 而近2-3年由于液相色谱的各个厂家都专注于这项技术的开发，市场上就出现不同规格、不同品牌的亚二微米的色谱柱，以及性能和工作范围各不相同的超高效液相色谱产品。如何使用户在同一超高效液相色谱系统上使用不同品牌、不同规格的色谱柱，且在该系统上应用来自不同厂商的分析方法成了安捷伦研发人员所关注的一个焦点，Agilent 1290 Infinity液相色谱系统就是在这样的情况下应运而生。 谈到Agilent 1290 Infinity主要的技术特点，我想最宽泛的工作范围应该是这个产品最为主要的技术特点。目前，这个系统在流速2mL/min时，最高压力可达1200bar；在流速5mL/min时，可达800bar，这样一方面可以满足用户使用不同技术小颗粒长柱对耐压的要求，另一方面也满足了薄壳型填料柱子对宽流速范围的要求。此外，该产品的技术特点还体现在以下几个方面：（1）卓越的分离能力和灵活性；（2）新色谱柱完善了1290 Infinity的性能；（3）与安捷伦质谱系统完美匹配：（4）功能强大、平稳的新泵；（5）最高的灵敏度；（6）高通量，每天可运行超过2,000个样品的分析速度。 关于应用领域，我想现在所有液相色谱的应用领域（如制药、食品、环境、化学化工等）的用户使用这个仪器都能从中受益。 安捷伦科技生命科学与化学分析事业部大中国区液相产品应用经理安蓉女士 Instrument：与Agilent 1200（RRLC）相比有何创新之处？特别是ZORBAX 快速分离高分辨RRHD柱？ 安蓉女士：相比于Agilent 1200（RRLC），Agilent 1290 Infinity几乎在各个方面都进行了创新。在泵的设计上变化特别大。因为系统的最高耐压高达1200bar，这就对泵的动力要求很高，此次新产品我们采用了保时捷的马达，并且泵柱塞杆也采用了新材料，即采用了导热、导电性好、机械强度高的熔融碳化硅。新型固件和硬件技术的巧妙结合，不仅得到一种称为主动阻尼的效果，而且可以在确保高耐压、极低延迟体积的同时，提供及其平稳、精密的溶剂输送。此外，进样器能够同时应用两种进样方式，即流通式和固定定量环式的进样，为不同需求的用户提供了极大的、前所未有灵活性。创新设计的检测器采用了微流控光学波导技术，具有极高的灵敏度和平稳的基线性能。 此次同期推出的ZORBAX 高分离度快速高分辨柱（RRHD）在填料化学性质上与ZORBAX高分离度快速高通量柱（RRHT）是完全一样的，也就是说其选择性与安捷伦前两代的亚二微米色谱柱都没有区别，但由于采用全新的专利填装技术，使得ZORBAX 快速分离高分辨柱（RRHD）的耐压能力更强(1200 Bar)，且柱效更高。 Instrument：笔者发现在Agilent 1290 Infinity的宣传材料中写到：“安捷伦终结了有关 UHPLC 的争论”，并且在命名上用了“Infinity”（无穷，无限），这是否意味着液相色谱关于UPLC概念的研发已经到了极限？您认为超高效液相色谱未来会取代目前广泛使用的常规液相色谱吗？ 牟一萍女士：这里需要说明一下，我们所说的终结是指“有关于UHPLC的争论”，而不是指终结液相色谱技术的研发。自从2004年Waters推出UPLC以来，先后有10家厂商推出相关产品，各个厂家关于这项技术的优势如何体现说法不一，争论主要在于：色谱柱内径大小、小颗粒填料的大小、颗粒技术、流速高低、温度高低、压力高低等孰优孰劣，以及方法转移等方面。而今安捷伦推出Agilent 1290 Infinity 的工作范围不仅覆盖了所有系统给出的范围，并且在此基础上还有所扩展，重要的是我们实现了不同厂家仪器之间的方法转移，可以用安捷伦海纳百川来形容吧，无论用户使用何种规格、何种填料的色谱柱，使用来自何种仪器的方法，安捷伦1290 Infinity都可以轻松实现这些方法。故而有关UHPLC的争论不再继续了。 在命名上用了“Infinity”，这对于安捷伦来说也是首次，以前我们都是直接用数字序列来命名的，我想此次安捷伦用了这个单词想表达的是：Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统能为用户带来无限的可能性。 安蓉女士：我想不能绝对的说“取代”，应该说在某些应用领域会是将来的发展方向，而在某些领域就是补充。例如现在大家都在提倡节省溶剂、实现高通量，那么在这方面超高效液相色谱就是很好的发展方向；不仅如此，超高效液相色谱可以在缩短分析时间的同时，改善液相色谱和液质联用分析结果的质量。但是对于某些应用（如GPC分离），超高效液相色谱技术由于目前填料技术的限制就不能体现出明显的优势。因此，可以说UHPLC未来会得到越来越广泛的应用，它不仅是对常规液相色谱技术很好的补充和发展，而且在其优势领域(如，快速高通量应用，复杂体系分离以及液质联用等)可能取代常规液相色谱技术。 一切从用户出发，回归用户 Instrument：如此之快推出又一高端产品Agilent 1290 Infinity液相色谱系统，是否会对Agilent 1200高分离度快速液相色谱系统（RRLC）在中国市场的销售产生影响呢？这方面公司是怎样考虑的？ 庄晨杰先生：我认为不会对Agilent 1200高分离度快速液相色谱系统（RRLC）销售产生很大影响。2006年安捷伦推出Agilent 1200高分离度快速液相色谱系统（RRLC）时，我们的一大亮点就在于它可以一机两用，既可以用作标准液相色谱分析也可以用作高分离度快速液相色谱分析，而且转换十分方便，当时有一个广告很有创意：上下拨动一个开关就完成转换，形象说明了一机两用的特点。在实际的销售中，广大用户也接受并认可了这点；而今天我们推出的Agilent 1290 Infinity液相色谱系统更侧重在为用户解决实验分析过程中遇到的瓶颈问题，以及帮助用户在不同厂家仪器之间做方法转移。我只能说，我们在沟通过程中会根据用户的不同情况，给他们提供最适合的产品，合适的就是最好的。 安捷伦科技生命科学与化学分析事业部中国区医药事业市场部经理庄晨杰先生 Instrument：高品质必然预示着高价格，不知道此次推出新产品的价格和潜在的用户群是如何定位的？而中国哪个单位将有可能成为新产品的首个用户呢？ 牟一萍女士：具体的价格就不便透露了，不过我可以肯定的说，购买Agilent 1290 Infinity液相色谱系统的用户会觉得“物超所值”。 Agilent 1290 Infinity液相色谱系统在以下几个方面最能体现其优越性：（1）高通量分析；（2）复杂体系分析；（3）与质谱联用；（4）不同仪器间的方法转移。因此对这些方面有需求的用户都是该产品的潜在用户。 我们全球首台1290 Infinity LC近期将落户中科院大连化物所张玉奎院士的实验室。4月19日，我们在长沙色谱会（2009年4月19-22日在湖南长沙召开的第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会）上举办了Agilent 1290 Infinity LC全球预发布会，会后大连化物所张丽华老师就与我们达成了订购意向，双方的结缘源于张院士和他的团队对安捷伦在色谱领域不断创新的认可和对安捷伦中国团队的信任， 也源于安捷伦长期关注国内科研领域的发展和对新技术新产品的要求。 金融危机中的安捷伦科技生命科学与化学分析事业部大中国区 Instrument：近日，安捷伦科技发布了09财年第二季度财务报告，报告显示由于受全球金融危机的影响，集团出现亏损，虽然生物分析测量业务表现相对突出，但是也呈现下降，不知道安捷伦科技生命科学与化学分析事业部大中国区的情况如何呢？ 牟一萍女士：09财年第二季度财务报告显示安捷伦科技生命科学与化学分析事业部全球的营业收入呈现下降，同时，安捷伦CEO邵律文 (Bill Sullivan)宣布了生命科学与化学分析事业部大中国区，营业收入同比增长高于30%，创逆市飘红佳绩。在大中国区业务高速增长的的激励下，安捷伦科技生命科学与化学分析事业部日本和东南亚业务都呈现增长态势。 Instrument：作为集团中表现突出的业务部门，又站立在中国这个快速发展的市场中，安捷伦科技生命科学与化学分析事业部大中国区会采取哪些措施来帮助集团走出困境？ 牟一萍女士：安捷伦科技总部与生命科学与化学分析事业部大中国区都在努力对抗全球性经济衰退所带来的冲击。一方面安捷伦科技总部继续加大了生命科学与化学分析仪器的研究开发，比如2008年是安捷伦质谱年，推出的全新7000A型超高灵敏度的三重串联四极杆气质联用仪、世界上灵敏度最高的6460型三重串联四极杆液质联用仪和6530型至尊高精度四极杆－飞行时间串联质谱仪等系列质谱新产品，开创了质谱技术新纪元；2009年继续推出一系列的新产品，如Agilent 7820A 气相色谱系统 、Agilent 7693A 系列自动液体进样器、新一代SurePrint G3生物芯片、SureSelect靶向序列捕获系统、新型直接驱动机器人（Direct Drive Robot）、连接质谱的新一代HPLC-Chip，以及今天发布的Agilent 1290 Infinity液相色谱系统、7100 毛细管电泳系统等，此外总部也加大了对中国的投入，例如成都办公大楼即将落成，上海用户卓越中心的启动，继续增加化学分析事业部新兴市场研发投入、加速本土化产品推出速度，提供适合中国用户的解决方案等等，这些都为安捷伦科技生命科学与化学分析事业部大中国区业务发展提供强有力的支持与保障。 作为公司增长最快的部门和地区，安捷伦科技生命科学与化学分析事业部大中国区担负帮助公司摆脱全球经济衰退影响的责任，也是集团业务增长摆脱暂时困境的发动机。我们在继续保持化学分析核心业务持续增长同时，加速整体生物学业务的增长速率，确保新产品在中国的成功推广，扩大耗材和色谱柱的市场份额， 提供多元化的服务产品，不断优化运行模式，在部门内全面推行6-sigma 管理理念以提高质量，推广Lean管理理念以提高效率。简单讲：我们要将“开源”和“节流”做到最佳境界，帮助公司走出困境。 后记 在金融危机肆虐全球的今天，大多数的公司都选择收缩战线，减少研发资金投入，但是安捷伦公司逆势而行，其新产品的推出频率比以往任何时期都更加密集，为此牟一萍女士给出了这样的解释，“科技的进步，以及研究人员对新技术的渴望绝不会因为金融危机而止步，而安捷伦作为用户最好的伙伴有责任也有义务帮助他们实现梦想”。 危机预示着挑战，也预示着无限可能的机遇，我们相信凭借着对科学的无限关注及对用户的责任，加上对市场敏锐的嗅觉和积极的态度，安捷伦科技生命科学与化学分析事业部大中国区在牟总的带领下一定能以安然的姿态，迎来无限可能的未来。 采访编辑：杨娟 附录：安捷伦科技有限公司 http://agilent.instrument.com.cn http://www.agilent.com/chem/cn