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实验室刚扩的己烯雌酚用的是 sn/t3235-2012的标准,方法上不是己二烯雌酚才用内标么?己烯雌酚 也要用是么?如果用内标,用什么内标?,新手望大神指点
一、案例己烯雌酚(DES)是一种人工合成的激素类药物,医学上主要用于治疗雌激素缺乏症。但是其具有促进动物生长,促进动物蛋白质的合成代谢,提高动物日增重和提高饲料转化率的作用。曾被作为动物生长促进剂用于畜禽以及水产品的养殖中。但是含有己烯雌酚的肉制品能扰乱人体内的激素平衡,导致妇女更年期紊乱,女童性早熟,男性女性化,生育能力降低;国际癌症研究机构(IARC)研究发现DES是一种致癌物质,诱发女性乳腺癌、卵巢癌等。从1981年,世界卫生组织禁止使用己烯雌酚、己烷雌酚作为动物的生长促进剂。世界各国规定食品动物养殖中不得以任何途径和方式使用DES,养殖动物及动物性食品中不得检出DES。我国农业部早已明令禁止在畜牧养殖业中使用己烯雌酚及其盐、酯等。但受利益驱动,仍有部分养殖者非法使用。为保障畜产品质量安全,我国已将其作为兽药残留监控的重点对象。二、选用的国家标准GB/T 5009.108—2003畜禽肉中己烯雌酚的测定。三、测定方法1.提取及净化精确称取5.0g绞碎肉试样,放入50mL具塞离心管中,加10.00ml。甲醇,充分搅拌,振荡20min,于3000r/min离心10min,将上清液移出,残渣中加lO.00mL甲醇,混匀后振荡20min,于3000r/min离心10min,合并上清液,此时如出现混浊,需再离心10min,取上清液过0.5μmFH滤膜,备用。2.色谱条件①紫外线检测器:检测波长230nm。②灵敏度:0.04AUFS。③流动相:甲醇+O.043mol/L磷酸二氢钠(70+30),用磷酸调pH值至5。④流速:1mL/min。⑤进样量:20μL。⑥色谱柱:CLC—ODS—C18(5μm)6.2mm×150mm不锈钢柱。⑦柱温:室温。3.标准曲线绘制精确称取5份(每份5.0g)绞碎的肉试样,放入50mL具塞离心管中,分别加入不同浓度的标准液0、6.0μg/mL、12.0μg/mL、18.0μg/mL、24.0μg/mL,其中甲醇总量为20.00mL,使其测定浓度为0、0.30μg/mL、0.60μg/mL、0.90μg/mL、1.20μg/mL,按步骤一方法提取备用。4.测定分别取样20μL,注入HPLC柱中,可测得不同浓度DES标准溶液峰高,以DES浓度对峰高绘制工作曲线,同时取样液20μl,注入HPLC中,测得的峰高从工作曲线图中查相应含量,Rt一8.2355.结果计算式中 X一一试样中己烯雌酚的含量,mg/kg;A一进样体积中己烯雌酚的含量,ng;m——试样质量,g;V1——试样甲醇提取液总体积,mL;V2——进样体积,mL。6.试剂①甲醇。②0.043mol/L磷酸二氢钠溶液:取1g磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)溶于水,定容至500mL。③己烯雌酚(DES)标准溶液:精确称取100mg己烯雌酚(DES)溶于甲醇,移入100mL容量瓶中加甲醇定容,混匀,每毫升含DESl.0mg,储存于冰箱中。④己烯雌酚(DES)标准使用液:吸取10.00mL DES储备液,移入100mL容量瓶,加甲醇定容,每毫升含DESl00μg。⑤磷酸。7.仪器①高效液相色谱仪:具紫外检测器。②小型绞肉机。③小型粉碎机。④电动振荡器。
【液相色谱之家】己烯雌酚的检测为何要在三氯甲烷中侵泡5小时 来自微友:质量检测-曾http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/03/201603141931_586966_2960432_3.jpg维A:为什么要溶解在三氯甲烷中5小时挥发干,再检测?使用的检测器为:PDA检测器微B:己烯雌酚具有较大的共轭结构,用三氯甲烷溶解也许是使这种具有两种几何体的结构更容易分开,己烯雌酚反式体比己烯雌酚顺式体极性较大,这两种几何体在三氯甲烷的长时间作用下,由于其结构的特殊性与溶剂产生一定的作用力,使其断键满足分析。微A:我现在遇到的问题是:没有泡过直接用甲醇溶解,只有一个峰,然后样品再经过制备液相后纯化的样品重新HPLC检测,居然多了一个峰,会不会是它的顺反异构的峰讲过流动相的长时间浸泡导致它的出现?微A:我走制备,没有经过三氯甲烷的浸泡,直接走样,只有一个峰,讲收集的溶液进行分析,就多了一个峰。多了后面的峰,就是用甲醇和水的流动相,经过制备收集的。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/03/201603141954_586967_2960432_3.jpg微iA:甲醇泡了一晚上的没有经过制备的乙烯雌酚进行分析没有那个小峰。对此您有什么看法呢?