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[align=center][font='times new roman'][size=18px]淫羊藿[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]中[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]淫羊藿苷[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]测定[/size][/font][/align][font='tahoma'][size=14px]小记:[/size][/font][font='tahoma'][size=14px] 2015[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]年版和[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]2020[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]版药典,[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]淫羊藿[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]药材中[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]的[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]指标成分[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]测定[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]有了变化,[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]2015[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]版药典测定淫羊藿苷,[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]2020[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]版药典测定[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]朝藿定[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]A[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]、朝藿定[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]B[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]、朝藿定[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]C[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]和淫羊藿苷的总量[/size][/font][font='tahoma'][size=14px][color=#000000]。[/color][/size][/font][align=center][img=,690,460]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301615124194_7779_1858223_3.jpg!w690x460.jpg[/img][/align][font='times new roman']1 [/font][font='times new roman']材料与试剂[/font][font='times new roman']乙腈(色谱级[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']上海安谱[/font][font='times new roman'])、[/font][font='times new roman']乙醇[/font][font='times new roman'](分析纯[/font][font='times new roman'],北京化工厂[/font][font='times new roman'])、[/font][font='times new roman']淫羊藿苷[/font][font='times new roman']标准品[/font][font='times new roman'](购自中检院)、[/font][font='times new roman']淫羊藿[/font][font='times new roman']药材[/font][font='times new roman']样品(送检样品)。[/font][font='times new roman']2 [/font][font='times new roman']色谱条件[/font][font='times new roman']LC-20AT[/font][font='times new roman'][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url](日本岛津),色谱柱:[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']Eclipse XDB [/font][font='times new roman']C18(250mm*4.6μm*5μm)[/font][font='times new roman'](安捷伦),流动相:以乙腈[/font][font='times new roman']-[/font][font='times new roman']水[/font][font='times new roman']梯度[/font][font='times new roman']洗脱[/font][font='times new roman']([/font][font='times new roman']10:90[/font][font='times new roman'])[/font][font='times new roman'];柱温[/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman']0[/font][font='times new roman'] [/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman']检测波长为[/font][font='times new roman']270[/font][font='times new roman']nm[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman']溶液制备[/font][font='times new roman'](按照中国药典[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']020[/font][font='times new roman']年版一部[/font][font='times new roman']淫羊藿项下[/font][font='times new roman']测定)[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']对照品溶液的制备[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']取淫羊藿苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每[/font][font='times new roman']1m[/font][font='times new roman']L[/font][font='times new roman']含[/font][font='times new roman']40[/font][font='times new roman']μ[/font][font='times new roman']g[/font][font='times new roman']的溶液,即得。[/font][align=center][img=,553,117]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301616274223_9282_1858223_3.jpg!w553x117.jpg[/img][/align][align=center]淫羊藿苷标准品色谱图[font='times new roman'] [/font][/align][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']样品[/font][font='times new roman']溶液的制备[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']取本品叶片,粉碎过三号筛,取约[/font][font='times new roman']0.2g[/font][font='times new roman'],精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇[/font][font='times new roman']20m[/font][font='times new roman']L[/font][font='times new roman'],称定重量,超声处理(功率[/font][font='times new roman']400W[/font][font='times new roman'],频率[/font][font='times new roman']50kHz[/font][font='times new roman'])[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']小时,放冷,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。[/font][font='times new roman']对照品溶液的制备[/font][font='times new roman'].[/font][align=center][img=,564,127]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301616471936_1416_1858223_3.jpg!w564x127.jpg[/img][/align][font='times new roman'][/font][align=center][font='times new roman']淫羊藿[/font][font='times new roman']样品中[/font][font='times new roman']淫羊藿苷[/font][font='times new roman']色谱图[/font][/align][font='times new roman']结论:客户送检样品[/font][font='times new roman']只要求检测淫羊藿苷,淫羊藿[/font][font='times new roman']中[/font][font='times new roman']淫羊藿苷[/font][font='times new roman']含量为[/font][font='times new roman']0.[/font][font='times new roman']61[/font][font='times new roman']%[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']注:[/font][font='times new roman']①[/font][font='times new roman']淫羊藿为叶子类药材,提取溶液中杂质较多,梯度洗脱让淫羊藿苷与其他杂质有效分离,在按照标准梯度洗脱完,用大比例有机相进行冲洗色谱柱,以免影响下一针样品分离。[/font]
以薄层扫描法测定淫羊藿苷含量时,常用的薄层展开剂为醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水系统。如:胡润淮等建立薄层扫描法测定复方仙灵脾注射液中淫羊藿苷含量的方法。采用CS-9301 型双波长薄层扫描仪(岛津)。薄层层析条件:硅胶GF254板;展开剂:醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)。薄层扫描条件:采用反射法单波长锯齿扫描法,狭缝为1.2mm×1.2mm,线性参数SX =7,扫描宽度为14mm,测定波长为λs=272nm。供试品溶液的制备:用移液管吸取复方仙灵脾注射液5ml,置分液漏斗中,先用0.1mol/LNaOH饱和过的正丁醇萃取3次(10,15,20ml),弃去碱液,合并正丁醇层,再用正丁醇饱和过的0.1mol/LNaOH溶液洗涤3 次(15,20,20ml),弃去碱液,合并正丁醇层,置水浴上蒸干,残渣以水7ml 溶解,置于已处理好的大孔吸附树脂层析柱(1cm ×10cm) 上,依次用蒸馏水、20%乙醇、70%乙醇进行洗脱,洗脱液体积均为100ml ,流速为5ml/min。收集70%乙醇洗脱液,回收乙醇后,置于浴上蒸干,残渣用少量甲醇溶解,移至5ml 容量瓶中,用甲醇定容至刻度。
性状及微性状鉴别 对同一品种不同产地的淫羊藿干燥叶分别进行3次取样并观察。将样品表面清理干净,选取所需部位备用,在叶片基部徒手制作主脉的横剖面。将叶片与主脉横剖面分别放置于拍摄台上,使用单反相机和微距镜头,并结合景深扩展技术,收集实验样品同一位置、不同景深影像数据(每个位置30~50张图片),再使用Helicon Focus Pro7.7.0专业版聚焦堆叠软件得到高清全息彩色图像数据。 显微鉴别 表皮制片 取完整叶片参照2020年版《中国药典》四部通则2001显微鉴别法,采取定位取材、徒手切片法获取观察切片,于显微镜下观察,并用相机收集图像数据。 横切面制片 分别选取淫羊藿叶片的上、中、下3部分,用剪刀分割成小块,于酒精乙酸福尔马林混合液(FAA)固定液中固定48h后漂洗,体积分数1%番红(体积分数50%乙醇配制)染色,乙醇和二甲苯进行脱水透化,经二甲苯溶液透明后浸蜡包埋;蜡块用纯水浸泡后切片,郝氏粘贴剂贴片,50℃下保存2d,用二甲苯进行脱蜡处理;体积分数0.5%固绿染液(体积分数95%乙醇配制)染色,中性树胶封片。分别置于显微镜下,采用正常光明场和偏振光暗场对比观察法,并收集图像数据。 粉末制片 样品粉碎过筛,参照2020年版《中国药典》四部通则2001显微鉴别法制片,于显微镜下观察,并收集显微图像数据。 样品测量 将样品置于显微物镜下,用相机收集清晰的完整叶片图像,利用ImageJ的角度测量工具测量叶边缘刺的角度;选取叶上表皮细胞制片,用目镜测微尺测量叶上表皮细胞波状深度占比(上表皮细胞边缘两波峰中间点至波谷的距离,除以两波峰中间点经过波谷延伸至另一边细胞边缘的距离);选取有乳突的淫羊藿叶下表皮制片,用相机收集清晰的显微图片,利用Adobe Photoshop截取像素大小相同的区域,将图片导入ImageJ,调整阈值,去除背景后,利用Analyze Particles插件自动分析,得到乳突密度(淫羊藿叶下表皮单位面积内乳突面积/淫羊藿叶下表皮单位面积×100%);以上数据,不同品种均随机选取测量20次。