肌肽标准品

方法：HPLC基质：蜂制品应用编号：103731化合物：丙氨酸、组氨酸、肌肽固定相：Diamonsil C18(2)色谱柱/前处理小柱：Diamonsil 5μm C18(2), 250 x 4.6mm样品前处理：供试品：量取200 μL 组氨酸、丙氨酸、L-肌肽混合溶液，其中组氨酸浓度为310μg/mL（2.0 mmol/L）、丙氨酸浓度为178μg/mL（2.0 mmol/L）、肌肽浓度为2000 μg/mL，置于1.5 mL塑料离心管中，混匀，再加入100 μL 1 mol/L三乙胺-乙腈溶液和100μL 0.2 mol/L异硫氰酸苯酯-乙腈溶液，混匀，室温反应1 h，然后加入400μL正己烷，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取200 μL下层溶液与800 μL水混合，0.22 μm针式过滤器过滤，待分析。色谱条件：色谱柱： Diamonsil C18（2）250*4.6 mm，5 μm(Cat#：99603) 流动相： 50mM乙酸钠(冰乙酸调节pH值为6.50±0.05)：甲醇 =87：13 流速： 1.0 mL/min 柱温： 35℃ 检测器： 254 nm 进样量： 10.0 uL文章出处：天津应用实验室关键字：肌肽、Diamonsil C18（2）、丙氨酸、组氨酸、HPLC摘要：Diamonsil C18（2）检测丙氨酸、组氨酸、肌肽。谱图：http://www.dikma.com.cn/u/image/2016/01/18/1453098679716995.png

我用C18柱检测肌肽纯品（浓度是560mg/L），流动相是V甲醇：V磷酸缓冲液=60：40，进样量2ml/min，检测波长：210 nm，两个小时没出峰，请教下各位大侠，问题出在哪？应该怎样改进？不胜感激！！！

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