北京棒杆菌

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  • 【求助】大肠杆菌的镜检

    我在做大肠杆菌的革兰氏染色后,在显微镜下观察总是一片红色鱼网纹,不见杆菌,复发酵实验证明大肠杆菌确实存在,不知染色出了什么毛病。请大家指教。多谢了。

  • 【原创大赛】双歧杆菌 之扫描电镜照片

    【原创大赛】双歧杆菌 之扫描电镜照片

    拍摄时间: 上个月样品名称:双歧杆菌 双歧杆菌 Bifidobacterium是1899年由法国学者Tissier从母乳营养儿的粪便中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性杆菌,末端常常分叉,故名双歧杆菌。双歧杆菌是人体中非常重要的有益菌(见附录)。大豆低聚糖是双歧杆菌的营养物质,还可抑止有害菌的生长,又被称为双歧杆菌增殖因子(双歧因子)。大豆低聚糖还有一个很好的性质,即它不易被胃吸收分解,大部分可进入肠道做为双歧杆菌的营养,因此糖尿病人也可食用。大豆低聚糖市场有卖。酸奶中含双歧杆菌,但绝大部分会被胃酸杀死。市场上还有双歧杆菌药品,也存在同样的问题。据说有些双歧杆菌药品采用特别技术,加上一层保护,使双歧杆菌可通过胃进入肠道。双歧杆菌具有能清除自由基及过氧化脂质的能力,因而能够延缓细胞的衰老,起到延年益寿的作用。除此,双歧杆菌能非特异性地提高机体的免疫力,提高抗感染的能力,也有利于健康和长寿由于细菌的细胞比较小,光镜下很多结构应该是看不太清楚的,鞭毛、芽孢、荚膜正常都看不见适当染色后芽孢和荚膜能看见,鞭毛不行。因为普通光镜的话四十倍之后就是一百倍的油镜了,看动物细胞一般用四十倍的,但是细菌大概是动物细胞的十分之一吧,想看清楚就得用电子显微镜了。、、人眼能分辨的最小长度大约是0.1毫米而细菌的一般直径约0.5微米,长度约0.5~5微米。(1微米=1000纳米) 当然有例外,有一种纳米比亚嗜硫珠菌直径达0.32~1.00毫米(1毫米=1000微米);已知最小的细菌“纳米细菌”直径约50纳米。 0.5微米*200=0.1毫米。也就是说,你将细菌的直径放大200倍大概可以看清了,可是这并不是常见的光学显微镜一、细菌培养:双歧杆菌(实验室自己分离出来一株)将菌种接种在优化以后的GAM液体培养基中,置厌氧工作站(BUG BOXnerobic Workstation)培养。见菌液均勺混浊,涂片。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112012058_334696_2019107_3.jpgRuskinn厌氧工作站操作指南及使用注意事项(Bug Box)一、 常规操作1、检查仪器是否正常(温度、气体压力、水槽水位等)。2、若需照明可按下控制面板Chamber Light照明开关或踩下SPOT脚踏。3、温度调节:按FN键→按▲▼调节到所需温度→按FN键直到仪表显示为实际温度和设定温度。4、袖套使用:(1)进入工作腔:涂滑粉→检查气路旋钮(选择单手或双手操作)→将手伸入袖套→踩下VAC脚踏抽气至双手有轻微紧绷感→踩下GAS脚踏充气至适量→逆时针旋转密封盖旋钮至松动→抓住密封盖横杆旋转至水平位置→往里轻推打开密封盖→缓缓伸手将密封盖置于两侧支架上。(2)关闭密封盖:缓缓伸手取下密封盖→将横杆水平方向对准袖套操作口轻轻外拉,旋转至垂直位置,松开横杆→顺时针旋转密封盖旋钮(不可过紧)→确认工作腔已密封,取出双手。5、转移闸使用:(1)放入样品:确认内门已关闭→往里推按钮,打开外门→放入样品架及样品→关闭外门→按下面板Interlock Purge键或踩下LOCK脚踏,Interlock Active指示灯亮,(仪器自动进行转移闸清洁),10秒钟后指示灯熄灭→通过袖套操作口打开内门,放入样品。(2)取出样品:确认外门己关闭→确认转移闸己进行自动清洁(否则按下面板Interlock Purge键或踩下LOCK脚踏清洁转移闸)→打开内门,放入样品→关闭内门,打开外门,取出样品(重复取出样品时,切记每次操作均需进行转移闸清洁)。6、单皿转移系统操作:将密封口螺丝拧松→放下密封板→将平板迅速塞入系统。7、常规操作注意事项:(1)工作腔内操作动作必须轻缓。(2)每天均需确认水槽处于满水位。[siz

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  • 北京检验检疫局“高效检测炭疽杆菌纳米技术研究”项目通过专家鉴定
    2011年11月22日,由北京检验检疫局承担的国家质检总局科技计划项目"高效检测炭疽杆菌纳米技术研究"顺利通过国家质检总局专家组的鉴定。   会上,来自深圳检验检疫局、军事医学科学院、中国检科院等单位的7名专家组成的鉴定委员会审查了项目组提交的相关资料,听取了项目组的工作报告及技术报告,并对研究过程进行了质询。经审议鉴定后,专家组认为:该项目研究技术新颖,具有创新性,研究成果达到国际先进水平,一致同意项目通过鉴定,并建议在国境口岸推广应用。   在国家质检总局卫生司、科技司及系统外有关单位领导和专家的关心和指导下,项目组通过3年认真细致的研究,成功建立了基于纳米金颗粒结合不对称PCR检测炭疽杆菌核酸序列的技术,利用纳米材料独特性检测白色粉末(炭疽杆菌)的特异、高效检测技术方法,填补了病原菌纳米检测领域的空白。项目组还制备了特异性高、反应时间短、方便实用的炭疽纳米技术检测试剂盒,获得国内及PCT国际专利各一项,有效解决了炭疽杆菌检测环境要求高、检测时限长的问题,为在国门第一道屏障线的国境口岸快速、准确地开展反生物恐怖工作提供了有力的技术保障,对加强口岸生物恐怖因子反恐工作、提高快速应对生物恐怖事件能力、保护人民生命健康、生产生活安全具有重要意义。   车志军副局长代表项目组向鉴定委员会介绍了项目背景及基本情况。在美国"9.11"事件后,口岸生物恐怖事件时有发生。因此,国家质检总局、卫生部多次联合发文要求各口岸检验检疫部门建立健全应急机制、建立完善技术手段,大力加强核生化反恐力度。北京检验检疫局利用多年精心打造的纳米检测技术平台,联合国家纳米科学中心共同开展针对炭疽杆菌的特异高效纳米检测技术研究,通过高科技手段强化国境口岸安全管理。   杨金良巡视员祝贺项目顺利通过鉴定,并对长期以来关心和支持该局科技工作的专家表示感谢。他希望,项目组在会后根据专家组提出的建议继续完善研究成果,做好成果验证工作,将研究成果应用到日常的检测工作当中,接受实践的检验。   该局副局长车志军,巡视员杨金良出席了本次鉴定会。
  • 鲍曼不动杆菌的治疗和研究进展!
    鲍曼不动杆菌的治疗和研究进展!鲍曼不动杆菌感染的治疗一直是临床上很大的难题,因为鲍曼不动杆菌极易对各种消毒剂和抗菌药物产生耐药性,对重症患者、ICU病房的患者等威胁很大。MDR-AB(多重耐药鲍曼不动杆菌)、PDR-AB(泛耐药鲍曼不动杆菌)、CRAB(耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌)等的广泛传播更是成了医生和患者的噩梦。 在院内感染中,不动杆菌属的感染占有较高的比例,而在院内提取到的不动杆菌属的菌株,绝大多数为鲍曼不动杆菌。鲍曼不动杆菌为革兰氏阴性菌,故对万古霉素等存在固有耐药,对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、氯霉素、四环素、diyi及第二代头孢菌素也保持着较高的耐药率。通常情况下,对鲍曼不动杆菌有较强作用的药物主要有抗绿脓杆菌的青霉素类、第三和第四代头孢菌素(主要是头孢他啶、头孢吡肟等)、碳青霉烯类、β-内酰胺类抗生素复合制剂(头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦等)、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、替加环素、多粘菌素、舒巴坦等。但是因为近年来抗菌药物的滥用,鲍曼不动杆菌对以上药物的耐药率也在不断上升,氟喹诺酮类、氨基糖苷类等耐药率甚高,碳青霉烯类的耐药率也有上升。 考虑到鲍曼不动杆菌极易对抗菌药物耐药,故用药时应联合用药。常用的方案有β-内酰胺类+氟喹诺酮类、β-内酰胺类+氨基糖苷类等。我个人shouxuan的方案为头孢哌酮/舒巴坦+磷霉素(时间差攻击疗法),也可选择氨苄西林/舒巴坦+环丙沙星等)。 研究进展 随着医学技术的飞速发展,对疾病特别是危重病的救治水平不断提高,广谱抗生素的广泛使用是其重要手段之一。但是,临床治疗中滥用抗生素现象非常普遍,在抗生素的强大压力下,不可避免地产生大量耐药菌株,这些耐药菌株已成为当代医院感染的棘手问题,从本组资料结果显示,鲍曼不动杆菌对亚安培南、美罗培南的耐药率相对较低,原因是碳青霉烯类药物对青霉素结合蛋白(PBPS)亲和力强。  但仍有少部分鲍曼不动杆菌对其耐药,原因可能是其能产生一种能水解碳青霉烯类药物的β-内酰胺酶ARI-I,这无疑是一个可怕的信号。此外,与头孢哌酮/舒巴坦的化学结构不同或鲍曼不动杆菌的多重耐药性表达形式不同有关。而对喹诺酮类抗生素耐药率达60%以上,这可能是近年来喹诺酮类药物的广泛应用引起抗菌药物介导的耐药性基因突变,编码DNA旋转酶的gyra 或gyrb基因发生突变被认为是细菌产生耐药的主要原因。此外,氨基糖苷类抗生素的耐药率皆较高,这可能是本院普遍应用该类抗生素出现的耐药,给临床治疗带来了巨大的困难,因此,应注意各类抗生素的合理应用。 试验结果表明,临床上不动杆菌感染中,鲍曼不动杆菌占绝大多数(75.0%),其次为醋酸钙不动杆菌、洛菲不动杆菌、琼氏不动杆菌,与有关报道不一致,可能是由于不动杆菌属的命名较混乱,分类原则及鉴定系统不同所致。在4种不动杆菌的鉴定中,41℃培养时生长,苹果酸盐同化试验阳性,可初步鉴定为鲍曼不动杆菌与琼氏不动杆菌,两者的区别在于前者苯乙酸盐同化试验阳性,且氧化木糖,而后者不氧化木糖,且苯乙酸盐同化试验阴性。41℃培养时不生长,癸酸盐同化试验阳性,可初步鉴定为醋酸钙不动杆菌与洛菲不动杆菌,两者区别在于前者枸橼酸盐、苯乙酸盐同化试验均阳性,而后者均阴性。  从72株鲍曼不动杆菌的来源看,其感染部位分布广泛,如呼吸系统、泌尿系统、伤口、腹腔及神经系统等。其中以呼吸系统感染占多数(54.2%)。不动杆菌是近几年医院内感染出现率较高的菌属,其中鲍曼不动杆菌所引起的感染应引起重视。 2001~2005年对12种抗菌药物的药物敏感监测显示,12种药物对鲍曼不动杆菌的耐药率呈总体上升趋势,耐药率zuijin的IMP,其耐药率从2001年的6.5%上升至2005年的31.7%,头孢菌素类(CAZ、CFP、FEP)的耐药率从2001年的20.0%、38.6%、31.5%上升至2005年的66.7%、72.4%、67.7%;PIP、SXT、ATM、CIP、TZP、LEV耐药率也从2001年的19.6%~60.2%增加到2005年的52.2%~72.1%;耐药率下降的有TOB和GEN 2种药物,其耐药率分别从2001年的62.8%和63.6%下降到2005年的48.2%和45.2%,这可能与这类药物临床上现在不常使用有关。从表3可见,ICU 12种药物的耐药率明显高于非ICU,差异存在非常显著性(P0.01),在ICU耐药率较低的是IMP和TZP,耐药率分别为41.7%和53.3%,除此外其余抗生素的耐药率均在70.0%以上,由此可见,ICU鲍曼不动杆菌耐药现象已十分严重,且表现为多重耐药。这与鲍曼不动杆菌产生多种酶有关:对头孢菌素类的耐药,主要是产超广谱β-内酰胺酶;对亚胺培南耐药,主要与产金属β-内酰胺酶有关;喹诺酮类的耐药主要与gyrA和parC基因突变有关。 综上所述,鉴于近年鲍曼不动杆菌的耐药率有进一步上升的趋势,这应当引起临床医师及微生物界的高度重视。为减少该菌医院感染的发生及多重耐药菌株的出现,我们应对医疗器械进行严格彻底的消毒及对鲍曼不动杆菌进行规范的连续监测,弄清其耐药机制并及时监测其耐药情况。同时,临床医师应重视获得性鲍曼不动杆菌感染,与临床微生物实验室密切协作,加强耐药性的监测,有效预防和控制感染。欢迎访问中国微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!
  • “嗜血”的质谱——关于流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的鉴定问题
    p   卫生部临检中心组织的2018年第一次临床微生物室间质评已经结束,但关于流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的鉴定问题,在微信朋友圈里谈得正热烈 (见文《溶血 or 流感?傻傻分不清?》)[1]。主要是因为在这次质评中,生化鉴定仪和有些品牌的质谱仪的鉴定结果出错了。令小布自豪的是,布鲁克MALDI Biotyper质谱的鉴定结果与标准答案完全相符!所以小布在这里来一段点评。 /p p   流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌虽然同属,但属于两个不同的种,致病性和临床意义也大不相同,前者是上呼吸道感染的常见致病菌,而后者是上呼吸道的正常定植菌。小布认为要认真、仔细地把它们区分开,千万不要混淆! /p p   可是这两种菌的亲缘关系很近,用传统的形态学和生化方法难以区分。虽然产荚膜的流感嗜血杆菌可以通过荚膜肿胀实验区别于溶血嗜血杆菌,但有些流感嗜血杆菌是不产荚膜的,通常被认为是无法分型的。同样,虽然有的溶血嗜血杆菌能够通过卫星试验观察到溶血环,但不是所有的溶血嗜血杆菌都能观察到明显的溶血环。 /p p   难道就没有好办法了吗?当然不是! /p p    span style=" color: rgb(31, 73, 125) " strong 质谱是区分流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的好方法 /strong /span /p p   早在2013年中国CDC的研究人员就通过质谱图的聚类分析,发现质谱可以把流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌清楚地分成两类,甚至可以把不同地区来源的菌株进一步细分(见图1)[2]。 /p p style=" text-align: center" strong img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/dfbc448c-6829-4363-bbc8-eb80e5161d6e.jpg" title=" 1.jpg" width=" 450" height=" 409" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 409px " / /strong /p p strong   ▲图1. 流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的聚类分析树状图(MALDI Biotyper结果) /strong /p p   2014年荷兰公共卫生区域实验室、荷兰医学中心与布鲁克微生物研发中心共同发表了MALDI Biotyper能够正确鉴定流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的文章 [2],专家们通过分析不同来源的277个菌株,发现质谱法与测序法鉴定流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的结果几乎完全一致(见表1)。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/5e7cf664-5cee-4464-b1b3-ac63e6d76a51.jpg" title=" 2.jpg" / /p p    strong ▼表1.流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的MALDI Biotyper质谱法与测序法鉴定结果比较 /strong /p p   另外,布鲁克公司在美国FDA注册进行临床试验的结果显示:通过对74个流感嗜血杆菌和31个溶血嗜血杆菌的检测MALDI Biotyper质谱法鉴定100%正确!(结果摘自布鲁克公司提交美国FDA的报告) /p p   可见,质谱是区分流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌可以信赖的方法!有些老师不免心生疑问:既然布鲁克质谱的鉴定结果都是正确的,那为什么其它品牌的质谱鉴定错了呢? /p p    strong span style=" color: rgb(31, 73, 125) " 质谱法的数据库和鉴定结果的算法非常重要 /span /strong /p p   原来呀,质谱鉴定微生物时,需要通过软件拿采集到的样品“蛋白指纹图”到数据库里进行逐个比对,因此,数据库建立与比对时所采用的理念与算法,以及数据库的容量,是影响鉴定结果非常重要的因素。 /p p   布鲁克MALDI Biotyper的建库理念是以菌株为单位,数据库中每个条目都是一个独立的菌株。它的比对算法是采用指纹识别中的“模式识别”算法,就是把样品的“蛋白指纹图”与数据库中所有菌株的“蛋白指纹图”快速自动地进行逐个图逐个峰的比较,看看每对比对的“蛋白指纹图”之间有哪些峰是匹配的,哪些峰是不匹配的,以及匹配的谱峰之间相对强度的相关性,从而得到一个综合的匹配分数,并根据分数值告诉我们鉴定的可信程度。 /p p   MALDI Biotyper的算法看上去通俗、简单,正可谓“大道至简”吧,不仅非常实用!而且最大程度上避免了误判!就像警察通过指纹比对来识别罪犯一样,只要数据库里有罪犯的指纹,它就能正确地识别出罪犯 即使数据库里没有罪犯的指纹,它也不会找错,只是告诉我们当前数据库里没有匹配的指纹,只要扩大搜索数据库的范围,定会让罪犯无以循形,不会造成冤假错案! /p p   有些老师可能会问:我们是做菌种鉴定,MALDI Biotyper的数据库为什么不以菌种为单位,而是以菌株为单位建立的呢?难道它能鉴定到菌株吗? /p p   大家知道,微生物种类繁多,每种微生物又包含丰富多样的不同菌株,而同一菌种内不同菌株之间的差异是天然存在的,并和微生物的种类有关,有的种内差异大,有的种内差异小。所以,布鲁克决定在菌株水平上建库,并在选择每个菌种的建库菌株时,尽可能包含差异大的菌株,而剔除差异小的菌株。MALDI Biotyper在菌株水平建库,具有以下优势: /p p    span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 给代表性菌株预留了充分的覆盖范围 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) "   避免了数据库不必要的冗余 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) "   容易实现数据库的扩充和更新 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) "   能快速适应分类学的改变 /span /p p   充分发挥了质谱技术分辨能力远远高于传统方法(如生 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " /span 化方法)的特点,不丢失种水平之内菌株之间的差异。 /p p   正是由于上述优势,美国CDC、加拿大国家微生物实验室和美国NIH等多家机构也在采用布鲁克的仪器和理念建立数据库并对外开放。 /p p   通过以上对布鲁克MALDI Biotyper质谱的数据库与软件算法的简单介绍,相信各位老师就能理解为什么这次卫生部的质评中,布鲁克质谱的鉴定结果是正确的,也就很好理解为什么美国FDA批准Bruker MALDI Biotyper CA系统作为首个鉴定新型致病菌耳念珠菌(C. auris) 的新方法了[4-6]。 /p p   参考文献 /p p   1. 溶血 or 流感?傻傻分不清? /p p   2. B. Q. Zhu, D Xiao et al. MALDI-TOF MS Distinctly Differentiates Nontypable Haemophilus influenzae from Haemophilus haemolyticus.PLoS One. 2013 8(2): e56139 /p p   3. J. P. Bruin, M. Kostrzewa et al. Identification of Haemophilus influenzae and Haemophilus haemolyticus by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2014, 33:279–284 /p p   4. https://www.fda.gov/NewsEvents/Newsroom/PressAnnouncements/ucm605336.htm /p p   5. FDA首次批准质谱方法鉴定新型致病菌耳念珠菌 (Candida auris) /p p   6. “布”下天罗地网,防止“耳念”侵袭 /p

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  • Lovibond® 德国罗威邦® 水质分析 罗威邦 测菌板 Lovibond 罗威邦 测菌板,Dipslide,也叫琼脂板,使用半定量测定方法反映微生物数量。 检出限为100 (102) CFU/ml。 可应用于工业用水、工业流体、食品制造、牙科诊所、啤酒厂、环境卫生、皮革工业、燃料、乳制品工业、游泳池和水疗中心以及化妆品等。Lovibond® 测菌板特点• 可弯折不同角度适应各种应用场景; • 10 cm2 的有效接触面积,便于表面测试计算;• 琼脂培养基配方符合 ISO 11133;订购信息订货号试纸条琼脂测试细菌种类56B010110D001TTC/TTC总菌56B010210D002TTC/MALT总菌/真菌和霉菌56B010310D003TTC/ROSE总菌/真菌和霉菌56B010410D004TTC/MAC总菌/大肠菌群56B010510D005TTC/E.Coli总菌/大肠菌群和大肠杆菌56B010610D006MAC/PDM大肠菌群 / 假单胞菌56B010710D007TTC/PDM总菌 / 假单胞菌56B010810D008SRB硫酸盐还原菌56B010910D009NRB亚硝氮还原菌56B011110D011R2A/R2A总菌
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  • 产品信息:PH-D9000大肠杆菌检测仪中大肠菌群的检测采用酶底物法主要针对粪大肠菌群、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌。大肠菌群检测仪已经列入GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标、NY/T 1665-2008《畜牧用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定-酶底物法》、HJ 1001-2018《中华人民共和国国家环境保护标准-水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定-酶底物法》
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  • 主要特点:可检测固态、液态、表面、膏状、浆状样本;样本在检测时无需任何的前处理过程,直接丢入检测瓶即可;可自动控制孵育温度和孵育时间检测样本只需1ml/1g;8个检测位各自独立可检测不同的样品;灵敏度高达可检测到1目标微生物;特异性高达99.999%;独立、持续的检测并记录瓶中的微生物数量(CFU)简单三个操作步骤,傻瓜型,无需专业操作人员;仪器便携式,可随时随地进行检测、100%定量分析,并可直接连接电脑出定量分析检测报告。通过ISO 16140:2003 “食品和动物饲料的微生物学 – 代替法的认证”。 RVLM微生物检测仪 检测范围:活细菌总数大肠菌群/大肠杆菌/大肠杆菌O157, O111, O104...等肠道杆菌科金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌;绿脓杆菌 沙门氏菌李斯特菌肠球菌曲霉属真菌;曲霉菌属酵母菌乳酸杆菌 应用范围:卫生控制:-食品(HACCP)-厨房、工具、表面(HACCP)-水质-(CDC)疾病控制、进出口检验检疫-药品及 化妆品 与我们的生活息息相关,例如:咖啡馆、餐厅 水源检测、制水厂分析实验室和HACCP诊断农产品及相关加工公司药厂、药房、化妆品厂环境监测机构水配送公司消费者保护团体、工商管理机构室内空调调节公司 微生物检测瓶尤其能应用于军事、大型展会等等的食品快速检测 集传统检验方法优点于一身:-培养皿法-酶法(β-葡萄糖苷酸酶分析) -免疫法(抗原搜寻)-基因法(基因搜寻) 检验样本无需任何前处理-液态样本,固态样本和表面样本均无需前处理定性和定量分析-搭配检测机:100%的定量分析-肉眼判读:定性或半定量分析简单便捷-简单的三个步骤得到检测结果检验迅速-是传统检验方法速度的2~5倍 高灵敏性-可以检测到1目标微生物(理论极值)高特异性-特异性高达99.999%(理论极值)检测瓶就是实验室-微生物检测瓶随时可用-未受过严格专业训练的检测人员也可随时随地进行检测使用后安全丢弃-和过期药物同样处理 检测步骤:(简单三个步骤得到100%定量检测结果) 第一步:放入样本 -打开瓶盖,加入11ml无菌水-放入液态(固态/表面)样本0.1~1.0ml(0.1~1.0g)-盖紧瓶盖 第二步:摇动瓶子直到溶剂充分溶解或混合(充分溶解或混合如右图所示) -若使用振荡器,需时20秒左右;或用手用力摇,需时2~3分钟左右。 第三步:在适当时间判读结果(请查右表) -使用RVLM微生物检测仪:-充分溶解混合后立即放入检测仪-得到100%定量分析结果 *若没有RVLM微生物检测仪: -待充分溶解混合后,放入恒温器孵育 (在适当温度下孵育适当时间,请查下表)-肉眼判读定性或半定量分析结果以大肠菌群为例:若菌落数>108CFU/ml:2小时内颜色即变成黄色;若菌落数<102CFU/ml:14小时内颜色不会变成黄色;若菌落不存在:18小时后颜色仍保持开始颜色或其他中间色(不变成黄色) 使用后无菌处理 -按下RVL微生物检测瓶的瓶盖上方-放心安全丢弃(与过期药物同样处理) 微生物快速诊断 RVL@产品 Q&A1. 微生物检测瓶除可以检测活菌外,死菌可以检测么?答:不能检测死菌。2. 微生物检测瓶可以检测厌氧菌么?答:检测瓶的检测范围即包括厌氧菌(亚硫酸盐梭状芽胞杆菌 Sulphite reducing Clostridia,产气荚膜杆菌 Clostridium perfrigens),也包括需氧菌。 检测不同种微类生物的检测瓶中试剂不同。对于厌氧菌,我们有特殊的试剂,如检测产气荚膜杆菌 Clostridium perfrigens。3. 检测瓶的检测原理都分别用到了哪些检测方法?答:培养皿法、酶法、免疫法、基因法。4. 对于第 3 题,你能简要叙述这些方法的优劣势么?答:与传统的培养基法、胶体金、酶免法和 PCR 法不同,德国皇家微生物检测仪是多种方法的集合。单独使用一种检测方法都有自己的缺点:比如, PCR 法需要专业技术人员和昂贵设备; 培养基法操作复杂; 胶体金法灵敏度低; 酶免法特异性捕捉不充分。 德国皇家微生物检测瓶快速检测系列产品是以上多种方法的综合运用,吸收了每种方法的优点,弥补了各种方法的不足。5. 用微生物检测瓶进行微生物检测时,第一步是先放样本还是无菌水?答:都可以。6. 对样本进行微生物接种时,需要在无菌环境下进行么?答:检测瓶是通过捕捉特异性,结合多种检测法进行分析。无菌环境与否均可(临检的场所大都是非无菌环境)。7. 检测瓶可以检测表面样本和固态样本么?答:可以检测固态、液态、表面样本(用所配棉棒沾湿无菌水后涂抹表面)。纸浆等膏状、糊状、粘稠状昂本都可以检测。8. 检测瓶在检测固态样本时需要对进行研磨、稀释等前处理过程么?答:直接将样本放入检测瓶,无需任何前处理。 9. 每次检测的无菌水用量是多少?答:一般是 11ml。如果是检测液态样本或水样本,建议加样 1ml,加无菌水 10ml。 10. 放入样本和无菌水后,“摇匀使其充分溶解和混合”这一操作步骤,无论定性分析还是定量分析,都是必要的步骤么?答:是的,摇匀无论是定性还是定量分析都是必要步骤。11. 不同的微生物对应的孵育温度是一样的么?请举例说明。答:不一样。37 摄氏度居多:活菌总数、沙门氏菌、李斯特菌等,大肠杆菌 44 摄氏度等,详细请参考对照表。12. 若是检测冷菜或者冰欺凌这样的样本,孵育是否应该低温进行?答:对检测样本自身的温度没有限制,检测样本中微生物,请严格遵照所检测微生物对应的孵育温度,依然根据对照表。13. 如果想加快检测时间,孵育温度可以调至高于所检测微生物对应的孵育温度?答:不可以,严格遵照对照表。14. 操作手册规定放入的样本量为多少?答:0.1g‐1.0g 或 0.1ml‐1.0ml。15. 若放入的样本量高于规定的样本量,检测结果会不同,或者检测结果(定量时)增加么?答:样本量多一些或少一些,定量分析结果不会有变化。 原因:传统的微生物学检测方法,包括官方参考方法,即基于固体选择性培养基的菌落计数法内在的统计分散度(统计名词,也称为统计变异,是变量或概率分布蔓延,常见的例子是方差,标准差和四分位距。)大于 50%。很多实验室已经证实皇家生物检测法与其他检测方法比统计分散度低,可信度高。但不管怎样,25‐30%的统计分散度还是有的。另外,由采样产生的统计分散度同样应该考虑在内,尤其是微生物经常容易繁殖的固态的肉制品类。 因此,加样是 0.5g 或 1.5g 所得的结果在统计上是等价的(和其他任何方法获得的结果相等)。16. 对于面粉这类低密度的散装样本,可以照常检测么?答:可以。 17. 对于酱油这样的深色样本,会影响定性检测结果的判读么?您有什么好的建议?答:如果搭配检测仪进行定量分析,不存在这个问题;如果只是通过肉眼观察变色进行定性分析,深色样本如果担心肉眼不能够清晰的辨认,建议进行稀释后再进行检测。还记得第 15 题得答案么?加样是 0.5g 或 1.5g 所得的结果在统计上是等价的和其他任何方法获得的结果相等)。稀释同样的道理。18. 如果是检测水样,还需要加入无菌水么?加多少?答:建议加水样 1ml,无菌水 10ml。19. 不同的微生物对应的开始颜色和呈阳性的颜色都相同么?请举例说明。答:不同。例如,沙门氏菌孵育 10 分钟左右出现的开始颜色为红色,阳性颜色为黄色;李斯特菌,开始颜色为蓝色,阳性颜色为黄色。具体请参考对照表。20.微生物检测仪兼备孵育机的功能么?答:是的。将检测瓶充分摇匀后立即放入检测仪,在软件上进行检测菌类设置后。检测仪会自动进行孵育,并自动给出定量分析检测报告。21. 微生物检测仪兼备振荡器的功能么?答:不具备。需用手用力摇 2‐3 分钟,或振荡器摇 20 秒左右,直至充分溶解或混合。22. 微生物检测仪的判读原理是什么?答:微生物检测仪是一款精密的光学判读仪。通过光学原理精密探测检测瓶中的颜色变化,并给出精确的定量分析检测报告。23. 微生物检测仪是外接电源,还是自带充电电池?答:外接电源。24. 微生物检测仪可以同时、独立地检测多少个检测瓶?答:8 个。同时、独立的探测,并分别给出定量分析报告。25. 微生物检测仪定量分析,需要在电脑上安装分析软件么?答:需要按照配套分析软件。26. 怎样的计算机操作系统对该分析软件兼容?答:XP, Vista, Windows 727. 如果检测仪是初次开机,接通电源后需要稍等多少时间再进行下一步操作?答:若初次开机,开机后停留 40 秒左右继续操作为宜。28. 检测仪进行定量分析时,充分混合后的检测瓶是应该立即放入检测仪,还是稍等片刻后再放入?答:充分混合后立即放入检测仪。29. 检测瓶放入检测仪后,在检测仪分析软件点击开始,软件界面上对应检测孔的灯会变成什么颜色?答:在所检测检测瓶对应的操作界面上点击“Start”(开始),对应孔的指示灯由绿色变为红色。表明检测开始并进行中。30. 当检测结束后,分析软件界面对应孔的灯光会恢复为什么颜色,说明检测结束,可以放入新样本?答:在检测进行时,指示灯为红色。当检测结束后,指示灯变为绿色。此时在对应的检测仪检测孔放入新的检测瓶开始下一轮检测是可以的。检测时间由细菌的存在量决定(当微生物含量较高时),或由对照表对应的检测时长决定(当微生物含量很低时,应超过对照表中检测 1CFU 对应的检测时间)。31. 微生物检测瓶的分析时间和检测瓶中微生物含量之间是什么关系?答:反比关系。即微生物含量越多,对应的检测时间越短;微生物含量越少,对应的检测时间越长。 如果样本中微生物含量过高,几分钟甚至几秒钟内检测仪的定量分析结果就会显著变动;如果微生物含量很低,(由于 RVLM 是非常精密灵敏的仪器)有经验的使用中可以通过几小时甚至几分钟的数据变化初步判断微生物目标含量是否达到规定要求。32. 分析检测前是否应该有明确的实验目的以确定你要检测的微生物含量(根据国家标准规定微生物的存在量。)?答:这样是最好的。例如,根据国家 GB 标准,或根据国际 EC 标准等,都有明确(或部分明确)地注明微生物在不同家禽、畜牧物种中的允许最大存在量。具体地说,在进行微生物检测时,我们首先要明确检测目的。如、国际 EC 2073:2005标准中规定,大肠杆菌在鲜肉中允许的最大存在量为 CFU 10^2/g,即每克鲜肉中大肠杆菌的含量不允许超过 CFU 10^2。此时我们根据对招表,找到大肠杆菌所在列,查 log CFU 10^2=2,即在大肠杆菌行中找到数字 2 所对应第一列的数字为 14。无论是肉眼进行定性分析,还是检测仪进行定量分析,要检测样本中大肠杆菌含量是否超过 CFU 10^2,最长在 14 小时即可得到严格精准的分析结果。如果是检测瓶进行定量分析,有经验的实验员会在很短时间内(譬如十几分钟)根据定量分析数据的动态变化情况,初步判断出检测瓶中的微生物含量。33. 明确要检测微生物含量的目的是什么,对照表起到什么作用?答:是确定所检测微生物对应的孵育温度、开始颜色、分析时间、阳性颜色的标准对照的依据。具体的使用方法请参考上一题答案。34. 什么是 CFU?答:colony‐forming unit,菌落形成单位。 经培养所得菌簇形成单位的英文缩写。 细菌(可见)和真菌的测量单位。CFU:colony‐forming unit,菌落形成单位,将稀释后的一定量的菌液通过浇注或涂布的方法,让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上,待培养后,每一活细胞就形成一个菌落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同,主要是对可见(即多数情况下形成菌落)的细菌数量进行测量的单位。 意思就是每毫升菌液中含有多少单细胞! 传统上就叫“个”。但是,我们知道,一个菌落并不一定是一个细菌所生成,也可能是由一簇细菌(一个细菌团)所生成,这时候再叫“个”就不太准确啦,准确的叫法就是“菌落形成单位”,英文缩写“CFU”。就像“公斤”和“千克”,只是叫法不同,数量上没有变化。 CFU 代表“colony forming units”。CFU/mL 指的是每毫升样品中含有的细菌群落总数,也有用 CFU/g 即对应固体培养基。35. 假如我要检测样本中大肠菌群的菌落含量不得超过 106CFU/g 或 106CFU/ml, 用肉眼观察瓶中颜色变化进行定性分析,请对照“孵育温度和比色对照表”详细叙述检测步骤。答:第一步:放入样本 放入所要检测的样本(0.1‐1.0g,或 0.1‐1.0ml),加入 11ml 无菌水(根据检测物情况,若为液体,建议加样 1ml,加无菌水 10ml。差别不大),盖紧瓶盖。 第二步:摇动瓶子直到溶剂充分溶解或混合。 如果用手需有力摇 2‐3 分钟左右;或用振荡器摇,需时 20 秒左右。 第三步:在适当时间判读检测结果 (1)若肉眼定性分析。根据对照表确定大肠菌群对应的孵育温度、开始颜色、检测时间、阳性颜色等信息。 孵育温度:根据对照表为 37℃; 开始颜色:即摇匀后放入 37℃恒温箱孵育 10 分钟左右会呈现的颜色。根据对照表为红色; 检测时间:我们要检测标准为大肠菌群含量不超过 106CFU/g 或 106CFU/ml。根据对照表,对应列log 106=6,找数字 6 对应行的数字为 6,即检测时间为 6 小时。即,观察时间确定为 6 小时。 阳性颜色:根据对照表,大肠菌群的阳性颜色为黄色。 确定了以下信息后,我们把充分混合后的检测瓶放入 37℃恒温箱,这样一直放置。孵育 10 分钟左右,我们观察会发现检测瓶会呈现检测大肠菌群对应的开始颜色——红色。继续放置,到 6 个小时的时候进行观察,如果颜色变为黄色,说明样本中大肠菌群含量超过 106CFU/g 或 106CFU/ml,样本为不合格品;若没有变为黄色,而是始终保持开始颜色红色,或其他中间颜色,说明样本中大肠菌群含量未超过 106CFU/g 或 106CFU/ml,样本为合格品。 (2)若检测仪进行定量分析 此步骤请参见下一题。第四步:无菌处理最后别忘记按下检测瓶的瓶盖上方对检测瓶进行灭菌处理。按下瓶盖后摇一摇,好了,可以安全丢弃了。注意:在进行实验操作时,不要碰到检测瓶的瓶盖顶部,以免在不当的时候进行了无菌处理,影响试验结果。36. 若第 34 题搭配检测仪进行精确的定量分析,请详述操作步骤。答:(2)若检测仪进行定量分析 将充分混合后的检测瓶立即放入检测仪。 启动检测仪软件,点击“Station”(状态)录入相关信息(包括:检验员姓名、检测、检测样本所属客户、检测时间等信息);在软件操作界面“analysis type”(检测种类)下拉菜单中勾选所检测的微生物种类,点击 ok,点击开始,指示灯变红,开始进入分析状态。观察检测仪的定量分析数据变化,进行判断。37. 为什么在检测结束之前,不能按下检测瓶的瓶盖?答:无菌处理。瓶盖中还有无菌处理物质,按下瓶盖,瓶盖中的无菌处理物进入瓶内,与瓶内溶剂进行反应,完成无菌处理。因此,实验过程中请不要轻易触碰检测瓶的瓶盖。 技术人员选答题,销售人员必答题:1. 检测瓶可以检测多少种微生物,分别是什么?答:活菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、肠道杆菌科、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、李斯特菌、肠球菌、亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌、产气荚膜梭菌、曲霉属真菌、曲霉菌、酵母菌。 以后还有陆续有其他微生物菌种的检测瓶相继面世。包括军团菌等。2. 检测瓶在检测大肠杆菌时,可以检测到所有的大肠杆菌菌株么(包括目前流行的 EHEC?)答:是的,可以检测到全部的大肠杆菌菌株,包括 EHEC 肠出血性大肠杆菌(E.coli O104, O111, O157 等)3. 检测瓶的应用范围有哪些?答:卫生控制:食品(HACCP),厨房、工具、表面(HACCP),水质,(CDC)疾病控制、进出口检验检疫、药品及化妆品。 与我们生活息息相关的:环境监测机构,农产品及相关加工公司,水源检测和制水厂,水配送公司,药厂、药房、化妆品厂,分析实验室和 HACCP 诊断,奶制品厂,咖啡馆、餐厅,消费者保护团体、工商管理机构,室内空调调节公司,尤其能应用于军事、大型展会等的食品快速检测。4. 你认为大肠杆菌检测瓶、李斯特菌检测瓶、沙门氏菌检测瓶除了是用于食品安全检测外,适用于医疗么?答:大肠杆菌(EHEC)、李斯特菌、沙门氏菌,这三款检测瓶可用于体外临床检测。 Royal 微生物检测瓶系列的全球定位依然是食品安全。在欧洲,对人体进行微生物的临床体外检测是非常少的,欧洲的各方面安全控制的很好。然而,在发展中国家,以上三款微生物的人体体外临床检测经常发生。而以上三款检测瓶用于体外临床检测的安全性和准确度都可以保证。4 合 1 试纸片和检测瓶市场定位的区别 1)4 合 1 试纸片和检测瓶比较 4 合 1 试纸片配合其分析仪,一台分析仪可以同时检测 48 个试纸片。因此,从经济成本的角度考量,最好一开机就是 48 片同时检查。对于医院,攒够 48个粪便样本后,一次性进行分析。检测瓶,一个样本就可以进行检查。而且更大的优势在于,这款产品会非常受医生的欢迎。因为医生可以不用接触样本,这是目前大多数的医院检测无法做到的。把瓶子给病人,让病人自己将粪便样本放入后送回给医生。医生拿到检测瓶,在医院的振荡器上摇匀后,放入孵育机,等待结果判读即可。2)检测瓶与医院目前传统检测法的比较 ?目前医院的检测方式依然是培养皿法居多。这种方法最令医生反感的地方是医生要接触样本。如果医生处于怀孕期,接触到李斯特菌的后果就是流产。如果检测台没有处理干净,也容易导致微生物的传播。 检测瓶,医生完全不用接触样本。样本放入检测瓶的的这个过程交给病人在卫生间去操作就可以。医生要做的就是简单的摇匀和放入孵育器孵育(振荡器和孵育器都是医院的常规设备)。5. 无论固态、液态还是表面样本,在检测时是否都无需进行前处理?答:是的6. 检测仪的特异性是多少?答:99.999%(理论极限值)7. 检测仪的灵敏度是多少?答:可以检测到 1 个活菌的理论极限值。8. 做定性分析时,检测需要几步,分别是什么?答:三步:加样;摇动瓶子直到充分溶解和混合;在适当时间判读结果(根据对照表)。最后不要忘记按下瓶盖上方进行无菌处理。9. 做定量分析时,检测需要几步,分别是什么?答:同上。具体请参考检测仪操作文档。10. 检测后按下检测瓶瓶盖的目的是什么?答:无菌处理,请参考上第 45 题。11. 检测瓶的储存温度是多少?答:在 20℃-25℃左右既可以储存,这个温度下很方便运输,对于临检来说是有利的。但随着大气温室效应,夏天时还是要注意储存温度不要超过 25℃,负责会影响检测瓶检测的灵敏度。然而,如果可以放到 4℃进行储存,保质期可以延长近一倍。12. 如果预延长检测瓶的有效期,储存温度最好为多少?答:4℃,具体见下表。
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